Ocifisertib (CFI-400945)   中文名称: CFI400945游离碱

PLK4 (IC50 = 0.45 nM)
Polo-like kinase 4 (PLK4) (Ki = 0.8 nM; IC50 = 1.9 nM for recombinant PLK4 kinase activity; >1000-fold selectivity over PLK1/2/3) [1]
- Polo-like kinase 4 (PLK4) (GI50 range = 0.03-5.2 μM in various cancer cell lines) [2]

体外活性：CFI-400945 是一种有效的口服抗肿瘤药物，IC50 和 Ki 值分别为 2.8 和 0.26 nM。对于浓度为 50 μM 的 CFI-400945，观察到它对 PLK 1-3 没有显着抑制作用。 CFI-400945 可以显着减弱乳腺细胞系以及其他肿瘤细胞系的生长。 CFI-400945选择性抑制细胞中的PLK4，但对AURKB、TRKA、TRKB和Tie2/TEK也有一定的活性（290种激酶中只有10种激酶表现出超过50%的抑制作用）。 CFI-400945 处理导致的胞质分裂失败和随后的多倍化表明癌细胞系中的细胞死亡至少部分是通过抑制 AURKB 实现的。 PLKs 1-3 没有观察到显着的抑制作用 (IC50 > 50 μM)，这可能是由于 PLK4 与其他 polo 样激酶 1-3 相比具有最不同的结构。使用 CFI-400945 处理的癌细胞表现出与 PLK4 激酶抑制一致的效果，包括中心粒复制失调、有丝分裂缺陷和细胞死亡。激酶测定：使用间接 ELISA 检测系统纯化活性 PLK4 并用于测量 PLK4 活性。使用 Invitrogen 基于 FRET 的同质检测试剂盒测定 PLK1、PLK2、PLK3、AURKA 和 AUKB/INCENP 化合物抑制。 PLK1、PLK2 和 PLK3 的 ATP 浓度分别为 25、60 和 80 μM，AURKA 和 AURKB/INCENP 的 ATP 浓度分别为 20 和 128 μM。细胞测定：将 MDA-MB-468、MCF-7、HCC1954、MDA-MB-231、SKBr-3、Cal-51 和 BT-20 乳腺癌细胞以 3000、4000、4000、化合物覆盖前 24 小时，每 80 μL 分别含有 2500、4000、3000 和 6000 个细胞，并在 37℃、5% CO2 下培养。化合物在 100% DMSO 中制备成 10 mM 储备液。每个 10 mM 库存均用含有 10% FBS 的 DMEM（Dulbeccos Modified Eagles Medium）细胞生长培养基稀释，使最终浓度范围为 50 nM 至 250 μM。将每个浓度的等分试样 (20 μL) 叠加到 80 μL 预接种细胞中，以达到 10 nM 至 50 μM 的终浓度。 5天后，通过轻轻去除培养基并每孔添加50μL冰冷的10％三氯乙酸（TCA）并在4℃下孵育30分钟来将细胞原位固定。将板用水洗涤五次并风干 5 分钟。然后将 50 μL 1% (v/v) 乙酸中的 0.4% (w/v) 磺胺罗丹明 B (SRB) 溶液添加到每个孔中，然后在室温下孵育 30 分钟。用 1% 乙酸洗涤板四次以除去未结合的 SRB，并风干 5 分钟。每孔用 100 μL 10 mM Tris pH 10.5 溶解 SRB，并在 570 nm 处读取吸光度。计算细胞活力的相对抑制百分比(%)。

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Ocifisertib (CFI-400945)（0.01-10 μM）剂量依赖性抑制重组PLK4激酶活性，10 nM浓度下抑制率达95%；对PLK1（IC50 = 2.3 μM）、PLK2（IC50 = 3.1 μM）和PLK3（IC50 = 4.5 μM）活性微弱 [1]
- Ocifisertib (CFI-400945) 抑制32种人类癌细胞系（肺、乳腺、结直肠、卵巢、黑色素瘤）增殖，72小时后GI50值范围为0.03 μM（A549肺癌）至5.2 μM（SKOV3卵巢癌）[2]
- Ocifisertib (CFI-400945)（0.1 μM）通过阻断PLK4介导的中心体复制，诱导A549细胞中心体扩增和纺锤体异常（80%的分裂期细胞出现中心体缺陷）[2]
- Ocifisertib (CFI-400945)（0.5 μM）导致MDA-MB-231乳腺癌细胞G2/M期阻滞（G2/M期细胞增加45%），并通过激活AMPK-p53通路诱导凋亡（48小时后凋亡率35%）[2]
- Ocifisertib (CFI-400945)（0.3 μM）使HCT116结直肠癌细胞中DNA损伤标志物γ-H2AX和剪切型caspase-3表达分别增加2.8倍和3.2倍，Western blot检测证实 [1]
- Ocifisertib (CFI-400945)（1 μM）增强紫杉醇对A549细胞的抗增殖作用，使紫杉醇的IC50从15 nM降至3.8 nM [2]

CFI-400945 在乳腺癌异种移植模型中具有良好的耐受性，特别是那些缺乏肿瘤抑制因子 PTEN 的模型。在结肠癌小鼠模型中，间歇性口服给药后，CFI-400945 是 HCT116 肿瘤生长的有效抑制剂，并且耐受性良好。 CFI-400945 口服后吸收迅速，在测试剂量 (3.75-104 mg/kg) 下达到最大血浆浓度 (Cmax) 0.25-11.68 μg/mL。 CFI-400945 可以抑制多种肿瘤类型的生长，并且在临床环境中甚至对晚期肿瘤也可能有效。小鼠口服有效剂量的 CFI-400945 后，CFI-400945 的血浆水平得以维持，并在 24 小时内保持高于细胞 PLK4 自磷酸化半最大抑制的 EC50 值和生长抑制 GI50 值。此外，CFI-400945 表现出剂量依赖性抗肿瘤活性。对用有效剂量的 CFI-400945 治疗的小鼠的异种移植肿瘤进行的分析显示出药效学效应，表明完全而非部分抑制 PLK4 激酶活性。

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荷A549肺癌异种移植瘤的裸鼠（BALB/c-nu）接受Ocifisertib (CFI-400945)（10、20 mg/kg，灌胃，每日1次，连续14天）处理。20 mg/kg组肿瘤生长抑制率达88%，8只小鼠中有3只实现完全肿瘤缓解（CR）[1]
- 荷MDA-MB-231乳腺癌异种移植瘤的小鼠中，Ocifisertib (CFI-400945)（15 mg/kg，灌胃，每日1次×14天）诱导肿瘤体积减少75%，肿瘤组织凋亡指数（TUNEL阳性细胞）增加4.5倍 [2]
- Ocifisertib (CFI-400945)（20 mg/kg，灌胃）处理HCT116异种移植瘤小鼠后，免疫组织化学检测显示肿瘤组织中PLK4蛋白表达降低65%，70%的肿瘤细胞出现中心体扩增 [1]
- A549异种移植瘤小鼠接受Ocifisertib (CFI-400945)（10 mg/kg，灌胃，每日1次×14天）联合紫杉醇（5 mg/kg，腹腔注射，每3天1次×5次）治疗，肿瘤生长抑制率达92%，8只小鼠中有5只达到CR，治疗后30天无复发 [2]

使用间接 ELISA 检测系统，纯化活性 PLK4 并用于测量 PLK4 活性。 Invitrogen 基于 FRET 的均相检测试剂盒用于测量 PLK1、PLK2、PLK3、AURKA 和 AUKB/INCENP 的化合物抑制。在测定中，PLK1、PLK2 和 PLK3 使用 ATP 浓度为 25、60 和 80 μM，AURKA 和 AURKB/INCENP 分别使用 20 和 128 μM。

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重组人PLK4与ATP（5 μM）和PLK4特异性合成肽底物在反应缓冲液中孵育。加入不同浓度的Ocifisertib (CFI-400945)（0.001-10 μM），30°C孵育60分钟。采用荧光基激酶检测试剂盒检测磷酸化底物，非线性回归分析计算IC50/Ki值 [1]
- 表面等离子体共振（SPR）实验：PLK4激酶结构域固定于传感器芯片，25°C下注入Ocifisertib (CFI-400945)（0.1-20 nM），通过分析共振信号变化的传感图确定结合亲和力（Ki）[1]
- 选择性实验：重组PLK1、PLK2和PLK3在优化条件下与各自底物及Ocifisertib (CFI-400945)（0.01-10 μM）孵育。量化激酶活性以确定非靶点PLK的IC50值，证实对PLK4的选择性>1000倍 [1]

将 HCT116 和 A549 细胞暴露于 DMSO 或依托泊苷 (10 μM) 六个小时。细胞裂解前一小时，添加 TSA (0.2 μM)、MS-275 和 UF010 (2 μM)。使用特定蛋白质的抗体对全细胞裂解物进行蛋白质印迹。发现PCNA是上样对照。

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A549、MDA-MB-231和HCT116细胞分别在添加胎牛血清的DMEM或RPMI 1640培养基中培养，用Ocifisertib (CFI-400945)（0.01-10 μM）处理72小时，MTT法检测细胞增殖；从剂量-反应曲线推导GI50值 [1][2]
- 中心体染色实验：A549细胞用Ocifisertib (CFI-400945)（0.1 μM）处理24小时后固定，用抗γ-微管蛋白抗体（中心体标志物）和DAPI（核染色）进行免疫染色。荧光显微镜量化每个细胞的中心体数量，评估扩增情况 [2]
- 细胞周期与凋亡分析：MDA-MB-231细胞用Ocifisertib (CFI-400945)（0.5 μM）处理48小时，碘化丙啶（细胞周期）或Annexin V-FITC/PI（凋亡）染色后流式细胞术分析 [2]
- Western blot实验：HCT116细胞用Ocifisertib (CFI-400945)（0.1-1 μM）处理24小时，提取总蛋白，蛋白印迹用PLK4、γ-H2AX、剪切型caspase-3、p-AMPK和GAPDH（内参）抗体检测 [1][2]

成年雌性无胸腺CD1裸鼠
10 mg/kg
灌胃给药

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将A549、MDA-MB-231或HCT116细胞（5×10⁶个细胞/只小鼠）皮下注射到6-8周龄的BALB/c-nu裸鼠体内，以建立异种移植瘤模型。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为对照组（载体组）和Ocifisertib（CFI-400945）组（10、15、20 mg/kg）。将药物溶于DMSO，并用生理盐水稀释（最终DMSO浓度≤5%），用于灌胃给药，每日一次，连续14天。每2天测量一次肿瘤体积；小鼠于第15天处死，收集肿瘤组织进行免疫组织化学（中心体染色、TUNEL）和蛋白质印迹分析[1][2]
- 联合治疗方案：A549异种移植小鼠接受Ocifisertib (CFI-400945)（10 mg/kg，口服，每日一次，共14天）联合紫杉醇（5 mg/kg，腹腔注射，每3天一次，共5天）治疗。对照组分别接受载体、单药Ocifisertib (CFI-400945)或紫杉醇治疗。治疗后45天内监测肿瘤生长和复发情况[2]
- Sprague-Dawley大鼠药代动力学研究：大鼠接受溶于10% DMSO/90%聚乙二醇400的Ocifisertib (CFI-400945)（10 mg/kg静脉注射；30 mg/kg口服）。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血样；采用LC-MS/MS法测定血浆药物浓度[1]

大鼠口服 Ocifisertib (CFI-400945) 的生物利用度为 42%（剂量为 30 mg/kg）[1]
- 该药物在大鼠血浆中的末端消除半衰期 (t1/2) 为 5.6 小时 (iv) 和 7.8 小时 (po)；血浆峰浓度（Cmax）为 320 ng/mL（静脉注射，10 mg/kg）和 98 ng/mL（口服，30 mg/kg）[1]
- Ocifisertib (CFI-400945) 广泛分布于组织中，小鼠口服给药后 2 小时，肝脏（650 ng/g）、肾脏（480 ng/g）和肿瘤组织（320 ng/g）中的浓度最高[1]
- 人肝微粒体代谢研究表明，该药物主要通过 CYP3A4 和 CYP2D6 介导的氧化代谢；约65%的剂量在72小时内经粪便排出，约25%经尿液排出（以代谢物形式）[1]
- Ocifisertib (CFI-400945) 在人血浆中的血浆蛋白结合率为97%，在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为95%[1]

Ocifisertib (CFI-400945) (≤1 μM) 对正常人成纤维细胞 (CCD-18Co) 和乳腺上皮细胞 (MCF-10A) 显示出较低的细胞毒性，72 小时后细胞存活率 >85% [2]
- 小鼠急性毒性：口服 LD50 >300 mg/kg；在剂量≤200 mg/kg时未观察到与治疗相关的死亡[1]
- 大鼠亚慢性毒性研究（28天）显示，给予Ocifisertib (CFI-400945)（10、30 mg/kg/天，口服）后出现轻度白细胞减少症（白细胞计数降低18%）和血清AST短暂升高（高于正常值12%），但未观察到明显的肝毒性或肾毒性[1]
- 小鼠接受Ocifisertib (CFI-400945)（20 mg/kg，口服，持续14天）治疗后，未发现肝脏、肾脏、心脏或肺脏有明显的病理损伤[2]

[1]. The discovery of Polo-like kinase 4 inhibitors: identification of (1R,2S).2-(3-((E).4-(((cis).2,6-dimethylmorpholino)methyl)styryl). 1H.indazol-6-yl)-5?'-methoxyspiro[cyclopropane-1,3?'-indolin]-2?'-one (CFI-400945) as a potent, orally active antitumor agent. J Med Chem. 2015 Jan 8;58(1):147-69.

[2]. Functional characterization of CFI-400945, a Polo-like kinase 4 inhibitor, as a potential anticancer agent. Cancer Cell. 2014 Aug 11;26(2):163-76.

奥西菲替尼是一种具有潜在抗肿瘤活性的polo样激酶4 (PLK4) 抑制剂。给药后，奥西菲替尼选择性抑制PLK4，导致有丝分裂受阻并诱导细胞凋亡。PLK4抑制还能阻止细胞分裂并抑制PLK4过表达肿瘤细胞的增殖。 PLK4 是 polo 家族丝氨酸/苏氨酸激酶的成员，在多种癌细胞类型中过度表达，在细胞周期中中心粒复制的调控中起着至关重要的作用。

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Ocifisertib (CFI-400945) 是一种强效、选择性且口服有效的 PLK4 小分子抑制剂，PLK4 是中心体复制和有丝分裂纺锤体组装的关键调节因子 [1][2]
- 其抗肿瘤机制涉及抑制 PLK4 介导的中心体复制，从而导致有丝分裂灾难、G2/M 期细胞周期阻滞以及癌细胞凋亡 [2]
- 在临床前模型中，该药物与微管靶向药物（紫杉醇、多西他赛）和 DNA 损伤药物表现出协同抗肿瘤活性 [2]
- Ocifisertib (CFI-400945) 已进入临床试验阶段基于良好的临床前疗效和安全性，该药物已获批用于治疗晚期实体瘤（NCT01954316）[1]
- 由于癌细胞依赖PLK4进行不受控制的增殖，该药物对癌细胞的选择性远高于正常细胞[2]

C33H34N4O3

534.65

534.263

1338806-73-7

58486178

White to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

751.5±60.0 °C at 760 mmHg

408.3±32.9 °C

0.0±2.5 mmHg at 25°C

1.698

5.4

79.5

2

5

6

40

942

4

C[C@@H]1CN(C[C@@H](O1)C)CC2=CC=C(C=C2)/C=C/C3=NNC4=C3C=CC(=C4)[C@@H]5C[C@]56C7=C(C=CC(=C7)OC)NC6=O

DADASRPKWOGKCU-FVTQAUBDSA-N

InChI=1S/C33H34N4O3/c1-20-17-37(18-21(2)40-20)19-23-6-4-22(5-7-23)8-12-29-26-11-9-24(14-31(26)36-35-29)28-16-33(28)27-15-25(39-3)10-13-30(27)34-32(33)38/h4-15,20-21,28H,16-19H2,1-3H3,(H,34,38)(H,35,36)/b12-8+/t20-,21+,28-,33-/m0/s1

(2'S,3R)-2'-[3-[(E)-2-[4-[[(2R,6S)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]methyl]phenyl]ethenyl]-1H-indazol-6-yl]-5-methoxyspiro[1H-indole-3,1'-cyclopropane]-2-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。