hGAT-1 (IC50 = 0.26 μM); rGAT-1 (IC50 = 1.2 μM); rGAT-2 (IC50 = 297 μM); hGAT-3 (IC50 = 333 μM); rGAT-3 (IC50 = 1140 μM); hBGT-3 (IC50 = 300 μM)

在神经元和神经胶质细胞中，CI-966 特异性抑制 GABA 再摄取以产生其作用 [4]。

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γ-氨基丁酸（GABA）是哺乳动物大脑中主要的抑制性神经递质。GABA的突触作用被突触前终末和周围神经胶质细胞的快速摄取终止。分子克隆揭示了四种不同的GABA转运蛋白的存在，称为GAT-1、GAT-2、GAT-3和BGT-1。运输的药理学抑制提供了一种增加GABA能量传递的机制，这可能有助于治疗各种神经精神疾病。最近，已经设计并合成了一些亲脂性GABA转运抑制剂，它们能够穿过血脑屏障，并显示出抗惊厥活性。我们现在已经测定了其中四种化合物的效力，SK&F 89976-A（N-（4,4-二苯基-3-丁烯基）-3-哌啶甲酸）、噻加宾（（R）-1-[4,4-双（3-甲基-2-噻吩基）-3-丁烯基]-3-哌啶甲酸），CI-966（[1-[2-[双4-（三氟甲基）苯基]甲氧基]乙基]-1,2,5,6-四氢-3-吡啶甲酸）和NNC-711（1-（2-（（（二苯基亚甲基）氨基）氧基）乙基）-1,2,4,6-四氢-3-吡啶甲酸盐酸盐），并发现它们对GAT-1具有高度选择性。这些数据表明，这些化合物的抗惊厥活性是通过抑制GAT-1的摄取来介导的[1]。

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分子生物学揭示了大脑中存在四种高亲和力GABA转运蛋白，即GAT-1、GAT-2、GAT-3和BGT-1，后者运输GABA和渗透调节剂甜菜碱。我们已经证明，已知的GABA摄取抑制剂如SK&F 89976-A、CI-966和Tiagabine对GAT-1表现出高亲和力和选择性[3]。

当给予接受过戊四唑 (PTZ) 给药训练的大鼠时，CI-966 会引起中等水平的 PTZ 杠杆反应 [4]。 CI-966 放大了 CA1 锥体层中γ-氨基丁酸的原位作用。 Sprague-Dawley 大鼠在乌拉坦麻醉下通过腹腔注射 (5 mg/kg) 进行全身给药 CI-966。注射后 20 至 30 分钟，微离子电渗 GABA 对 CA1 区域的海马群峰值具有典型显着但高度可变的抑制作用 [5]。不同的动物模型证明了 CI-966 的抗惊厥作用。当给狗口服时，1.39 mg/kg CI-966 被迅速吸收，0.7 小时后达到峰值。接受 5 mg/kg 口服剂量的大鼠显示平均 tmax 为 4.0 小时。在狗和大鼠中，静脉注射相同剂量后，消除t1/2平均为1.2和4.5小时。在这两个物种中，CI-966 的口服生物利用度均为 100% [6]。

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在氨基甲酸乙酯麻醉下，通过腹腔注射（5mg/kg）对Sprague-Dawley大鼠全身施用一种新的强效、可渗透血脑屏障的γ-氨基丁酸（GABA）摄取阻断剂1-[2-[双[4-（三氟甲基）-苯基]甲氧基]乙基]-1,2,5,6-四氢-3-吡啶甲酸（CI-966）。注射后20至30分钟，通过微离子电渗疗法在CA1区施加GABA，对海马群体尖峰的抑制作用发生了高度变化，但总体上显著增强。与尼泊苷酸（通过离子电渗疗法局部应用）的效果一样，当GABA施加在金字塔层或其附近时，CI-966的增强作用最为明显，因为GABA的作用通常最弱，并且表现出最明显的消退。GABA效力的这种变化最简单的解释是GABA摄取的减少。[5]

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CI-966在各种动物模型中表现出抗惊厥特性。该药物通过抑制γ-氨基丁酸（GABA）的突触摄取起作用。狗口服1.39mg/kg的CI-966吸收迅速，tmax为0.7小时。大鼠口服5mg/kg的平均tmax为4.0小时。静脉注射相同剂量后，狗和大鼠的消除t1/2平均为1.2和4.5小时。两种物种的CI-966的绝对口服生物利用度均为100%。狗口服[14C]CI-966 HCl后，粪便和尿液排泄分别占14C剂量的89%和2.3%。在胆管插管的大鼠中，胆汁排泄是放射性的主要消除途径（75%）。尿液和粪便排泄分别占4.1%和12%。根据己巴比妥睡眠时间的测定，CI-966不会诱导或抑制小鼠肝脏混合功能氧化酶[6]。

细胞系。[3]
在本研究中，我们使用了大鼠GAT-2（rGAT-2）6和GAT-1的人类同源物（我们重新克隆的hGAT-1）、20个GAT-3（hGAT-3）、9和BGT-1（hBGT-1）。如前所述，使用磷酸钙法和G-418中的选择在LM（tk“）细胞中产生了这些克隆的稳定细胞系。细胞在Dulbecco改良的Eagles培养基中在标准条件下（37°C，5%COa）生长。

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运输分析。[3]
GABA转运如前所述进行测量，6但有以下修改。用HEPES缓冲盐水（HBS，单位为mm：NaCl，150；HEPES，20；CaCla，1；葡萄糖，10；KC1，5；MgCla，l；pH7.4）洗涤在24孔板（孔直径18 mm）中生长的细胞三次，并在37°C的玻片加热器上平衡。10分钟后，取出培养基，加入HBSure中未标记的药物（450/μL/孔）。通过在每孔中加入50 pL的[3H]GABAin-HBS浓缩溶液（终浓度=50 nM）来启动转运。非特异性摄取在具有1个未标记GABA的平行孔中定义，并从总摄取量（无竞争对手）中减去产生特异性摄取量；所有数据均代表特定摄取量。将板在37°C下孵育10分钟，然后使用24位洗板机用冰冷的HBS快速洗涤三次。用0.05%脱氧胆酸钠/0.1 N NaOH（0.25 mL/孔）溶解细胞，用1 N HCl中和等分试样，通过闪烁计数测定放射性。根据制造商的指示，使用BIO-RAD蛋白质测定试剂盒对溶解细胞的等分试样中的蛋白质进行定量。将亲脂性抑制剂溶解在DMSO中。转运分析中DMSO的最终浓度<2%，对照实验表明，该浓度对转运没有显著影响。

动物/疾病模型： 8 只雄性 SD（SD（Sprague-Dawley））大鼠 [4]
剂量： 0.3-30 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)，注射体积为 1 mL/kg
实验结果： CI-966 给药后反应率呈剂量依赖性下降。

犬口服1.39 mg/kg的CI-966后吸收迅速，达峰时间（tmax）为0.7小时。大鼠口服5 mg/kg后，平均tmax为4.0小时。静脉注射相同剂量后，犬和大鼠的消除半衰期（t1/2）平均分别为1.2小时和4.5小时。两种动物的CI-966绝对口服生物利用度均为100%。犬口服[14C]CI-966 HCl后，粪便和尿液排泄量分别占14C剂量的89%和2.3%。胆管插管大鼠中，胆汁排泄是放射性物质的主要清除途径（75%）。尿液和粪便排泄量分别占4.1%和12%。根据己巴比妥睡眠时间测定，CI-966 不会诱导或抑制小鼠肝脏混合功能氧化酶。[6]

198692 大鼠口服LD50 894 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：流泪；眼睛；行为：昏迷；胃肠道：肠蠕动亢进、腹泻 药物研发研究，28(65)，1993
198692 小鼠口服LD50 703 mg/kg 行为：惊厥或对癫痫阈值的影响；胃肠道：肠蠕动亢进、腹泻；肾脏、输尿管和膀胱：其他变化 药物研发研究，28(65)，1993

[1]. Tiagabine, SK&F 89976-A, CI-966, and NNC-711 are selective for the cloned GABA transporter GAT-1. Eur J Pharmacol. 1994 Oct 14;269(2):219-24.

[2]. GABA potentiation: a logical pharmacological approach for the treatment of acute ischaemic stroke. Neuropharmacology. 2000 Jul 10;39(9):1483-94.

[3]. Design, synthesis and evaluation of substituted triarylnipecotic acid derivatives as GABA uptake inhibitors: identification of a ligand with moderate affinity and selectivity for the cloned human GABA transporter GAT-3. J Med Chem (IF: 7.

[4]. Discriminative stimulus effects of presynaptic GABA agonists in pentobarbital-trained rats. Pharmacol Biochem Behav.1994 Jan;47(1):5-11.

[5]. Systemic CI-966, a new gamma-aminobutyric acid uptake blocker, enhances gamma-aminobutyric acid action in CA1 pyramidal layer in situ. Can J Physiol Pharmacol. 1990 Sep;68(9):1194-9.

[6]. Pharmacokinetics, mass balance, and induction potential of a novel GABA uptake inhibitor, CI-966 HCl, in laboratory animals. Pharm Res. 1993 Oct;10(10):1442-5.

1-[2-[双[4-(三氟甲基)苯基]甲氧基]乙基]-3,6-二氢-2H-吡啶-5-羧酸是一种二芳基甲烷。

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研究表明，增强主要抑制性神经递质GABA的功能可以降低脑内谷氨酸能活性。由于谷氨酸能活性增强是急性缺氧缺血性卒中后导致细胞死亡的主要原发事件，因此GABA能药物可能具有神经保护作用。本综述探讨了缺血性损伤后GABA能功能急性抑制的证据，并回顾了表明增加脑内GABA浓度具有神经保护作用的数据，以及某些（但并非所有）GABA能药物的给药也具有神经保护作用。 GABA 摄取抑制剂 CI-966、GABA(A) 受体激动剂蝇蕈醇和 GABA(A) 受体模拟剂氯噻唑均已被证实，在缺血性损伤后给予卒中动物模型药物可发挥神经保护作用。相比之下，苯二氮卓类药物，尤其是巴比妥类药物，虽然是强效的 GABA(A) 受体增强剂，但作为神经保护剂的疗效却不尽如人意。GABA(A) 受体亚型的多样性以及某些 GABA(A) 受体配体在卒中动物模型中的体内疗效表明，GABA 受体模拟药物在卒中治疗中是一种被低估的方法。[2] γ-氨基丁酸 (GABA) 是哺乳动物中枢神经系统中的主要抑制性神经递质。分子生物学揭示了大脑中存在四种高亲和力GABA转运蛋白：GAT-1、GAT-2、GAT-3和BGT-1，其中BGT-1可同时转运GABA和渗透调节剂甜菜碱。我们已证实，已知的GABA摄取抑制剂，例如SK&F 89976-A、CI-966和Tiagabine，对GAT-1具有高亲和力和选择性。本文描述了一系列新型三芳基尼泊酸衍生物的设计和合成，并对其作为GABA摄取抑制剂的活性进行了评估。该系列化合物的设计先导化合物是非选择性GABA摄取抑制剂EGYT-3886，[(-)-2-苯基-2-[(二甲氨基)乙氧基]-(1R)-1,7,7-三甲基双环[2.2.1]庚烷]。从这一系列化合物(S)-1-[2-[三(4-甲氧基苯基)甲氧基]乙基]-3-哌啶羧酸+ ++ (S)-1-[2-[三(4-甲氧基苯基)甲氧基]乙基]-3-哌啶羧酸+ ++ 中，4(S)被鉴定为一种对GAT-3具有选择性的新型配体。4(S)在GAT-3上的IC50为5 μM，在GAT-2上的IC50为21 μM，在GAT-1上的IC50大于200 μM，在BGT-1上的IC50为140 μM。该化合物将成为评估GAT-3在神经功能中作用的重要工具。[3]

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在训练大鼠区分5 mg/kg戊巴比妥（PB）和生理盐水的实验中，比较了间接作用GABA能药物与戊巴比妥（PB）和咪达唑仑的辨别刺激效应。实验采用双杆固定比率32食物强化程序。PB和咪达唑仑均能剂量依赖性地替代训练剂量的PB，仅在剂量高于完全替代剂量时才会降低反应率。丙戊酸（一种抗癫痫药物和GABA转氨酶抑制剂）也能替代PB，但仅在抑制反应率的剂量下才能发挥作用。氨己烯酸（一种不可逆的GABA转氨酶抑制剂）不能替代PB，但确实能剂量依赖性地降低反应率。 GABA 摄取抑制剂，如 1-[2-[双[4-(三氟甲基)苯基]-甲氧基]乙基]-1,2,5,6-四氢-3-吡啶羧酸 (CI-966) 和 (R(-)-N-[4,4-双(3-甲基噻吩-2-基)丁-3-烯基]尼泊酸盐酸盐 (噻加宾)，产生的 PB 操作杆反应率不超过 40%。氨氧乙酸 (AOAA) 是一种非选择性突触前 GABA 激动剂，其 PB 操作杆反应率最高可达 43%。这些结果表明，间接 GABAA 激动剂 PB 和咪达唑仑的辨别性刺激效应虽然彼此相似，但与突触前 GABA 能药物的辨别性刺激效应不同。GABA 转氨酶抑制剂和摄取抑制剂的辨别性刺激特性也存在差异。这表明并非所有突触前 GABA 激动剂都具有相似的行为特征。这些结果有助于进一步了解增强 GABA 能神经传递的药物在行为效应方面的异同。[4]

C23H22CLF6NO3

509.87

473.143

C, 58.35; H, 4.47; F, 24.08; N, 2.96; O, 10.14

110283-79-9

CI-966 hydrochloride;110283-66-4

198693

Typically exists as solid at room temperature

1.34g/cm3

514.1ºC at 760mmHg

264.7ºC

2.16E-11mmHg at 25°C

1.517

5.484

49.77

1

10

7

33

643

0

FC(F)(F)C1C=CC(C(C2C=CC(C(F)(F)F)=CC=2)OCCN2CCC=C(C(O)=O)C2)=CC=1

CMHQDSBIBSKHFP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H21F6NO3/c24-22(25,26)18-7-3-15(4-8-18)20(16-5-9-19(10-6-16)23(27,28)29)33-13-12-30-11-1-2-17(14-30)21(31)32/h2-10,20H,1,11-14H2,(H,31,32)

1-[2-[bis[4-(trifluoromethyl)phenyl]methoxy]ethyl]-3,6-dihydro-2H-pyridine-5-carboxylic acid

CI966; CI 966; 1-(2-(Bis(4-(trifluoromethyl)phenyl)methoxy)ethyl)-1,2,5,6-tetrahydropyridine-3-carboxylic acid; CI966; DTXSID90149194; 1-(2-(Bis(4-(trifluoromethyl)phenyl)methox)ethyl)-1,2,5,6-tetrahydro-3-pyrdinecarboxylic acid; DTXSID30149193; CI-966

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。