| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
5-LO
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| 体外研究 (In Vitro) |
5-脂氧合酶（5-LO）是花生四烯酸（AA）合成生物活性白三烯（LTs）的关键酶，5-LO的抑制剂被认为可以防止LTs的不良病理生理效应。在这项研究中，我们介绍了新型非氧化还原型5-LO抑制剂cj - 13610的分子药理学特征，并在各种体外试验中进行了评估。在完整的人多形核白细胞（PMNL）中，Ca(2+)-离子载体A23187激发，cj - 13610有效抑制5-LO产物的形成，IC(50)=0.07微米。外源AA的补充削弱了cj - 13610的效力，表明其作用方式是竞争性的。与ZM230487和L-739.010相似，两种密切相关的非氧化还原型5-LO抑制剂cj - 13610在非还原条件下，在无细胞检测系统中，当浓度达到30微米时，不能抑制5-LO，但加入过氧化物酶活性后，cj - 13610恢复了其抑制效果（IC(50)=0.3微米）。与ZM230487和L-739.010相比，cj - 13610的效力不依赖于细胞刺激或5-LO的激活途径。因此，与Ca（2+）介导的5-LO激活相比，cj - 13610同样抑制了磷酸化事件诱导PMNL中5-LO产物的形成。在转染的HeLa细胞中，cj - 13610仅能轻微区分可磷酸化的野生型5-LO和缺乏磷酸化位点的5-LO突变体。综上所述，cj - 13610可能具有相当大的潜力，作为一种有效的口服活性非氧化还原型5-LO抑制剂，它缺乏这类5-LO抑制剂以前代表的某些缺点。[1]
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| 酶活实验 |
无细胞体系中5-LO产物形成的测定[1]
为了测定细胞匀浆中5-LO的活性，将7.5 × 106新鲜分离的PMNL重悬在含有1 mM EDTA的PBS中，在4°C下超声（3 × 10 s），并加入1 mM ATP。为了测定重组分离的5- lo的活性，将部分纯化的5- lo （0.5 μg / 5 μl）加入到1 ml的5- lo反应混合物（PBS, pH 7.4, 1 mM EDTA， 25 μg ml−1磷脂酰胆碱，1 mM ATP和20 μg ml−1 γ-球蛋白）中。在细胞匀浆或部分纯化的5-LO样品中添加DTT （1 mM）、GSH （1 mM）、GPx-1 （30 mU）和cj - 13610。在4℃下5-10 min后，样品在37℃下预热30 s，加入2 mM CaCl2和指定浓度的AA，开始5-LO产物的形成。在37°C下，加入1 ml冰冷的甲醇，反应10分钟后停止，形成的代谢物用HPLC分析完整细胞。 |
| 细胞实验 |
完整细胞中5-LO产物形成的测定[1]
对于完整细胞的检测，7.5 × 106。最后将新分离的PMNL或2 × 106 HeLa细胞重悬于1ml PGC缓冲液中。在37°C下用指定的化合物预孵育后，通过添加指定的刺激物和外源AA开始形成5-LO产物。37℃下加甲醇1 ml， 1 N HCl 30 μl，前列腺素B1 200 ng， PBS 500 μl停止反应。形成的5-LO代谢物按照描述（Werz & Steinhilber, 1996）用高效液相色谱法提取和分析。5- lo产物的形成以每106个细胞中5- lo产物的ng表示，包括LTB4及其全反式异构体，5(S),12(S)-二羟基-6,10-反式8,14-顺式二十碳四烯酸(5（S),12(S)-二hete）和5(S)-氢(pero) -6-反式8,11,14-顺式二十碳四烯酸（5- h (p)ETE）。未检测到半胱氨酸ltts (LTC4、D4和E4)，也未检测到LTB4的氧化产物。 5-LO 亚细胞定位[1] 如前所述，研究了5-LO的亚细胞定位（Werz et al., 2002a）。简而言之，将新鲜分离的PMNL （3 × 107）放入1ml PGC缓冲液中，在37°C下用指定的刺激孵育10分钟，并在冰上冷藏。细胞经0.1% NP-40裂解后得到核和非核组分。用SDS-PAGE和抗5-LO抗血清(AK7, 1551；亲和关系在5-LO柱上纯化)。以硝基蓝四氮唑和5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸为底物，用碱性磷酸酶偶联igg可视化蛋白。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
细胞内5-脂氧合酶（5-LO）响应外部刺激而被激活，其过程包括5-LO从可溶性区域转位至核膜，并在核膜上与FLAP共定位（Peters-Golden & Brock, 2001）。这一过程由细胞内Ca2+水平升高和/或丝裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶（MAPKAP）激酶在Ser-271位点以及ERK1/2在Ser-663位点对5-LO进行磷酸化介导（Werz et al., 2000; 2002a, 2002b）。研究表明，在某些细胞类型中，诱导5-LO磷酸化的刺激所激活的5-LO并不依赖于Ca2+（Werz et al., 2002a; Burkert et al., 2003）。非氧化还原型5-脂氧合酶（5-LO）抑制剂ZM230487和L-739.010的效力取决于诱导5-LO产物合成的刺激和激活途径（Fischer等，2003）。ZM230487和L-739.010能有效抑制多形核白细胞（PMNL）中Ca2+介导的5-LO激活，但抑制磷酸化诱导的5-LO产物合成则需要高10至100倍的抑制剂浓度（Fischer等，2003）。相反，在完整的PMNL中，当5-LO被磷酸化激活时，CJ-13,610的效力并未降低。此外，CJ-13,610 对 HeLa 细胞中可磷酸化的野生型或不可磷酸化的突变型 S217A/S663A-5-LO 的效力没有显著差异。值得注意的是，一些与 5-LO 产物水平升高相关的疾病，例如炎症反应、过敏性哮喘、多种癌症和动脉粥样硬化，都与细胞磷酸化状态的升高有关（Hajjar & Pomerantz, 1992; Johnson & Lapadat, 2002），而磷酸化状态决定了 5-LO 对非氧化还原抑制剂的敏感性。由于 CJ-13,610 的疗效并不依赖于 5-LO 的磷酸化状态，因此，使用这种药物靶向 5-LO 可能确实有利于这些疾病的治疗。尽管 CJ-13,610 的治疗潜力可能因过氧化物水平升高而降低，从而受到疗效的一定限制，但该化合物显然比此类 5-LO 抑制剂的先前代表具有优势，这些代表由于临床疗效差而未能获得常规批准。[1]
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| 分子式 |
C22H23N3O2S
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|---|---|
| 分子量 |
393.51
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| 精确质量 |
393.151
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| 元素分析 |
C, 67.15; H, 5.89; N, 10.68; O, 8.13; S, 8.15
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| CAS号 |
179420-17-8
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| 相关CAS号 |
179420-27-0
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| PubChem CID |
9821945
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 熔点 |
198 - 200 °C
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| LogP |
5.015
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| tPSA |
96.43
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
532
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
VPTONMHDLLMOOV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H23N3O2S/c1-16-24-11-12-25(16)18-5-7-19(8-6-18)28-20-4-2-3-17(15-20)22(21(23)26)9-13-27-14-10-22/h2-8,11-12,15H,9-10,13-14H2,1H3,(H2,23,26)
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| 化学名 |
4-[3-[4-(2-methylimidazol-1-yl)phenyl]sulfanylphenyl]oxane-4-carboxamide
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| 别名 |
179420-17-8; CJ-13610; CJ-13,610; CJ 13610; 4-(3-((4-(2-Methyl-1H-imidazol-1-yl)phenyl)sulfanyl)phenyl)tetrahydro-2H-pyran-4-carboxamide; CHEMBL195309; 2H-Pyran-4-carboxamide, tetrahydro-4-[3-[[4-(2-methyl-1H-imidazol-1-yl)phenyl]thio]phenyl]-; 5275PJ1C59;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~10 mg/mL (~25.41 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5412 mL | 12.7062 mL | 25.4123 mL | |
| 5 mM | 0.5082 mL | 2.5412 mL | 5.0825 mL | |
| 10 mM | 0.2541 mL | 1.2706 mL | 2.5412 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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