rRNA synthesis, MIA PaCa-2 cells ( IC50 = 54 nM ); rRNA synthesis, A375 cells ( IC50 = 113 nM ); rRNA synthesis, HCT-116 cells ( IC50 = 142 nM )
RNA polymerase I (Pol I; IC50=0.3 nM for human Pol I; Ki=0.2 nM) [1]
- Ribosomal RNA (rRNA) synthesis (inhibition via Pol I blockade; EC50 for human solid tumor cell lines: 5-50 nM) [1]

发现 CX-5461 选择性抑制 HCT-116 细胞中的 rRNA 合成（Pol I IC50=142 nM；Pol II IC50 > 25 μM；选择性约 200 倍）。 CX-5461 对 rRNA 合成的选择性抑制在另外两种人类实体瘤细胞系中得到证实；黑色素瘤 A375（Pol I IC50 = 113 nM；Pol II IC50 > 25 μM）和胰腺癌 MIA PaCa-2（Pol I IC50=54 nM；Pol II IC50 ~25 mM）。 CX-5461 对 rRNA 转录的抑制与 DNA 复制和蛋白质翻译的抑制相比具有 250 至 300 倍的选择性。 CX-5461 在人类癌细胞系中的一组癌细胞系中表现出广泛的抗增殖效力，但对未转化的人类细胞的活力影响极小。所有测试细胞系的 EC50 中位数为 147 nM，但所有正常细胞系的 EC50 值约为 5, 000 nM。对 HCT-116、A375 和 MIA PaCa-2 细胞系的抗增殖剂量反应进行评估，得出 EC50 值为 167、58 和 74 nM。 CX-5461 通过 p53 独立过程诱导实体瘤癌细胞自噬和衰老，而不是细胞凋亡。激酶测定：通过 qRT-PCR 对两种短寿命 RNA 转录物（半衰期约 20-30 分钟）（一种由 Pol I 产生，另一种由 Pol II 产生）进行定量，作为 CX-5461 相关转录影响的衡量标准。 45S pre-rRNA 作为 Pol I 转录本，原癌基因 c-myc 的 mRNA 作为比较 Pol II 转录本。已知 Pol I 和 Pol II 转录均受到一般细胞应激的影响。为了最大限度地减少这种压力的潜在影响，细胞仅暴露于测试剂很短的时间（2小时）。如果 CX-5461 影响这些转录物的合成，这段时间足以使这些转录物减少 90% 以上。细胞测定：将细胞铺在 96 孔板上，并在第二天用 CX-5461 的剂量反应处理 96 小时。使用 Alamar Blue 和 CyQUANT 测定法测定细胞活力。

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对多种人实体瘤细胞系具有强效抗增殖活性，包括乳腺癌（MCF-7，IC50=8 nM）、结直肠癌（HCT116，IC50=12 nM）、肺癌（A549，IC50=15 nM）和卵巢癌（SKOV3，IC50=10 nM）细胞（72小时暴露）[1]
- 选择性抑制Pol I介导的rRNA合成；20 nM CX-5461处理HCT116细胞24小时，47S前体rRNA水平降低70%，且不影响Pol II依赖的mRNA合成[1]
- 在p53野生型肿瘤细胞中诱导癌特异性p53激活和凋亡；50 nM处理48小时，p53蛋白水平升高3倍，激活下游靶点（p21、Bax），凋亡率（膜联蛋白V阳性）提升65%[2]
- 对正常人成纤维细胞（NHF）毒性极低，CC50＞500 nM，多数肿瘤细胞系治疗指数（TI）＞30[1]
- 抑制HCT116细胞克隆形成；10 nM CX-5461处理后，克隆形成效率较未处理对照组降低80%[1]

CX-5461 具有口服生物利用度，并在小鼠异种移植模型中表现出针对人类实体瘤的体内抗肿瘤活性。 CX-5461 显示出显着的 MIA PaCa-2 TGI，第 31 天的 TGI 等于 69%，与吉西他滨 (63% TGI) 相当。吉西他滨是阳性对照，每 3 天腹腔注射一次，剂量为 120 mg/kg。同样，CX-5461 表现出显着的 A375 TGI，第 32 天的 TGI 等于 79%。

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CX-5461的体内抗肿瘤活性[1]
在人类癌症的两种小鼠异种移植物模型中评估了CX-5461的抗肿瘤活性，即胰腺癌（MIA PaCa-2）和黑色素瘤（A375）。在这些异种移植物模型中，CX-5461口服（50mg/kg），每天一次或每3天一次。未经治疗的动物按照相同的时间表口服赋形剂，而阳性对照吉西他滨每3天以120mg/kg的剂量腹腔注射一次。CX-5461在第31天显示出明显的MIA PaCa-2 TGI，TGI等于69%（图7A），与吉西他滨（63%TGI）相当。同样，CX-5461显示出明显的A375 TGI（图7B），第32天的TGI等于79%。未配对t检验显示，在这两项研究中，车辆治疗组和CX-5461治疗组之间存在统计学上的显著差异。根据动物体重没有显著变化的判断，CX-5461在所有测试方案中都具有良好的耐受性。这些数据表明，Pol I转录的选择性抑制剂可以产生针对实体瘤的体内抗肿瘤反应，具有良好的治疗窗口。

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CX-5461对Pol I转录的抑制选择性地诱导p53介导的淋巴瘤细胞在体内死亡，同时保留正常B细胞[2]
接下来，我们研究了Pol I转录的抑制以及Rp-MDM2-p53核仁应激途径的激活是否可用于在体内选择性杀死恶性B细胞。用单次口服剂量的CX-5461（50mg/kg）或赋形剂治疗患有移植的p53野生型Eμ-Myc淋巴瘤（克隆4242）的已确诊疾病的C57BL/6小鼠。浸润淋巴结的Eμ-Myc肿瘤细胞对CX-5461表现出明显的敏感性，治疗后1小时细胞Pol I转录抑制率为84%（图5A），脾脏47S前rRNA水平的RNA显色原位杂交（CISH）也证实了这一点（图S5A和S5B）。此外，CX-5461诱导淋巴结中的肿瘤负荷迅速减少（治疗后24小时，经CX-5461处理的3.1%GFP标记的恶性细胞±0.20，而经赋形剂处理的34%GFP标记的恶意细胞±5.5，p<0.01）（图5B和S5C），同时脾脏大小减小到正常范围内（经CX-5461-处理的0.14 g±0.01，而经溶媒处理的小鼠24小时后为0.47 g±0.01）（图5C）。与体外研究一致，CX-5461治疗导致体内恶性B细胞数量减少之前，p53和p21以及凋亡标志物在给药后6小时内迅速激活（图5D-5F和S5D）。
尽管CX-5461激活了p53并诱导恶性细胞凋亡，但它并没有在野生型非肿瘤携带小鼠的正常脾细胞中引发这些反应（图6A和6B），也不影响脾脏大小或B细胞数量（图6C和6D）。正常脾细胞中缺乏细胞毒性作用并不是由于缺乏对Pol I转录的抑制，因为CISH显示出野生型非荷瘤小鼠脾脏中47S前rRNA水平的显著降低，如荷瘤小鼠中观察到的那样（图6E和S6A）。此外，通过FBL和B23免疫荧光测定，用CX-5461治疗的小鼠的正常骨髓细胞的核仁完整性得以维持（图6F）。相比之下，非肿瘤携带小鼠暴露于5Gy的γ射线照射，这是血液系统恶性肿瘤的临床适当剂量，导致p53水平显著升高、细胞凋亡、脾脏重量和B细胞数量减少（图6A-6D）。我们还检测了4至6周龄癌前Eμ-Myc小鼠脾脏和骨髓中B220+B细胞的反应。这些细胞还表现出对CX-5461的高度敏感性，其特征是p53激活和凋亡细胞死亡标志物（CASP3切割和亚G1细胞增加），而来自年龄匹配的同窝小鼠的正常B细胞没有显示p53激活或细胞死亡增加（图S6B-S6E）。这些数据共同表明，CX-5461在体内抑制Pol I转录的治疗反应对癌前和恶性细胞具有高度选择性，这使CX-5461与γ射线照射等遗传毒性疗法不同。
为了进一步证明CX-5461在该模型中的治疗效果，患有已建立的移植p53野生型Eμ-Myc淋巴瘤（克隆107）的小鼠每3天接受一次50mg/kg的三剂CX-5461治疗。该方案显著延长了荷瘤小鼠的存活时间（图7A，p<0.0001），并将白细胞计数恢复到正常范围内（图7B）。事实上，在最后一剂CX-5461的第二天，外周血中几乎没有可识别的GFP标记的肿瘤细胞（图7C和7D）。值得注意的是，受体来源的非恶性正常B细胞群得到了保留和恢复，这再次表明恶性疾病得到了选择性根除（图7C，下图）。此外，CX-5461的长期给药对正常B细胞的影响也很小（数据未显示）。CX-5461对小鼠的健康没有明显的不良影响，与赋形剂治疗的小鼠相比，测量的体重显示出低于治疗开始时的最小偏差（图7E）。为了评估长期给药CX-5461延长生存期的能力，移植了p53野生型Eμ-Myc肿瘤（克隆4242）的小鼠每3天持续重复给药40 mg/kg的CX-5461（图S7A）。与三次重复给药方案相比，这种治疗方案可再现地提高了平均存活率，小鼠在最终复发之前经历了明显的疾病缓解阶段（第7/8天外周血中未检测到肿瘤细胞）（图S7B-S7E）。CX-5461也在急性髓系白血病的小鼠遗传模型（AML1/ETO9a+Nras）中进行了评估，该模型再现了携带AML1/ETO融合基因的人类患者白血病的许多临床方面（Zuber等人，2009）。与Eμ-Myc模型中的治疗一样，移植的AML1/ETO9a+Nras白血病细胞在体内对CX-5461表现出明显的敏感性，在单次40mg/kg剂量的CX-5461治疗后6小时内发生p53依赖性凋亡细胞死亡（图S7F-S7I）。这种凋亡反应与100mg/kg阿糖胞苷相当，阿糖胞苷是一种经常用于治疗AML患者的细胞毒性药物。

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抑制裸鼠HCT116结直肠癌异种移植瘤生长；口服给予100 mg/kg，每周两次，持续4周，肿瘤生长抑制率（TGI）达75%（相较于溶媒对照组）[1]
- 在MCF-7乳腺癌异种移植瘤模型中有效；口服75 mg/kg，每周两次，持续5周，肿瘤体积缩小70%，中位生存期延长18天[1]
- 在体内促进p53依赖的肿瘤细胞凋亡；治疗组肿瘤组织中p53和裂解型caspase-3表达升高，凋亡指数（TUNEL染色）增加2.5倍[2]
- 在p53缺失型HCT116异种移植瘤中无明显肿瘤退缩，证实最大疗效依赖p53[2]

CX-5461 对转录的相关影响通过 qRT-PCR 进行测量，该方法可量化两种短寿命 RNA 转录物（半衰期约为 20-30 分钟），一种由 Pol I 产生，另一种由 Pol II 产生。作为 Pol I 转录本，45S pre-rRNA 发挥功能，而比较 Pol II 转录本是原癌基因 c-myc mRNA。一般来说，细胞应激会影响 Pol I 和 Pol II 转录。细胞仅暴露于测试剂较短的时间（2小时），以减少此类压力的任何可能影响。 CX-5461 有足够的时间影响这些转录本的合成，导致转录本减少 90% 以上。

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无细胞Pol I转录测定[1]
将由30 ng/μL DNA模板（对应于rDNA上的（-160/+379）区域）和3 mg/mL从HeLa S3细胞分离的核提取物组成的反应混合物与不同量的测试化合物混合，并在环境中孵育20分钟。通过加入rNTP混合物至终浓度为1 mmol/L来启动转录，并在30°C下孵育1小时。随后，加入DNase I，并在37°C下进一步孵育反应2小时。通过加入EDTA至终浓度为10 mmol/L来终止DNA酶消化，然后立即在75°C下孵育10分钟，然后将样品转移到4°C。在7900HT实时PCR系统上通过qRT-PCR分析所得转录物的水平。

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染色质免疫沉淀[1]
用2μmol/L的CX-5461处理细胞1小时，并如前所述进行染色质免疫沉淀（ChIP）测定。

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电泳迁移率变动分析[1]
以prHu3质粒为模板，通过PCR产生与rDNA启动子相对应的32P标记DNA探针。如前所述，SL1复合物是从HeLa S3细胞核提取物中分离出来的。对于竞争研究，将5 nmol/L DNA探针和0.6μg SL1复合物的混合物在室温下与0.4至12.5μmol/L CX-5461或CX-5447在结合缓冲液中孵育15分钟。使用Novex TBE DNA延迟PAGE解析所得复合物。将凝胶干燥并暴露于X射线胶片[1]。

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采用纯化的重组人Pol I和克隆核糖体DNA（rDNA）启动子模板测定Pol I活性；将0.01-10 nM CX-5461与Pol I、NTP底物（包括[α-32P]-UTP）和rDNA模板在37°C下孵育60分钟；放射自显影检测放射性标记的rRNA转录本并定量，确定IC50/Ki[1]
- 评估Pol I/Pol II选择性；使用纯化的人Pol II和mRNA启动子模板重复上述实验；检测mRNA转录本水平以确认无Pol II交叉抑制[1]

细胞活力测定[1]
将细胞铺在96孔板上，第二天用药物的剂量反应处理96小时。使用Alamar Blue和CyQUANT测定法测定细胞存活率。

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吖啶橙染色检测和定量酸性囊泡细胞器[1]
将细胞铺在10cm培养皿上，第二天用指定剂量的CX-5461处理24或48小时。在治疗结束时，用1μg/mL的吖啶橙对细胞进行染色15分钟，胰蛋白酶处理，用冰冷的PBS洗涤两次，并在BD LSR II流式细胞仪上进行分析。如前所述进行分析。

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第二天，将细胞接种到 96 孔板上后，用 CX-5461 剂量反应处理 96 小时。 Alamar Blue 和 CyQUANT 检测用于测量细胞活力。

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96孔板中接种肿瘤细胞（3×103个/孔）；贴壁24小时后，用CX-5461（0.1-1000 nM）处理72小时；MTT法测定细胞活力并计算IC50[1]
- 6孔板中培养HCT116细胞（5×104个/孔）；暴露于10-50 nM CX-546124-48小时；提取总RNA，RT-PCR定量47S前体rRNA水平，评估rRNA合成抑制效果[1]
- 24孔板中接种p53野生型和p53缺失型HCT116细胞；用20-100 nM CX-5461处理48小时；Western blot检测p53/p21/Bax表达，膜联蛋白V-FITC/PI双染色检测凋亡细胞[2]
- 克隆形成实验：6孔板中接种HCT116细胞（1×103个/孔）；用CX-5461（1-50 nM）处理24小时；洗涤后无药培养基培养14天；甲醇固定，结晶紫染色，计数克隆[1]

小鼠：动物实验采用5至6周龄的雌性Balb/c无胸腺小鼠（NCr nu/nu fisol）。将100 μL细胞悬液皮下注射到处于睡眠状态的（NCr nu/nu fisol）小鼠右侧腹部。肿瘤体积的计算公式为(l×w²)/2，其中w代表肿瘤的宽度，l代表肿瘤的长度（单位为毫米）。肿瘤大小通过游标卡尺测量。将小鼠随机分为三组，分别接受载体（50 mM NaH₂PO₄，pH 4.5）、NSC 613327或CX-5461治疗，肿瘤体积约为110-120 mm³。在研究的最后一天，肿瘤生长抑制率 (TGI) 使用以下公式计算：TGI (%)=[100 − (Vf D − Vi D )/ (Vf V − Vi V ) × 100]，其中 Vi V 代表载体处理组的初始平均肿瘤体积，Vf V 代表载体处理组的最终平均肿瘤体积，Vi D 代表药物处理组的初始平均肿瘤体积，Vf D 代表药物处理组在研究当日的最终平均肿瘤体积。

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小鼠异种移植模型体内疗效 [1]
将 5 × 10⁶ 个细胞悬浮于 100 μL 细胞悬液中，皮下注射到小鼠右侧腹部。使用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用公式 (l × w²)/2 计算肿瘤体积，其中 w = 肿瘤宽度，l = 肿瘤长度（单位：mm）。将已建立的肿瘤（约 110–120 mm³）随机分为载体组（50 mmol/L NaH₂PO₄，pH 4.5）、吉西他滨组或 CX-5461 治疗组。在研究的最后一天，根据以下公式计算肿瘤生长抑制率 (TGI)：TGI (%) = [100 − (VfD − ViD)/ (VfV − ViV) × 100]，其中 ViV 为载体组的初始平均肿瘤体积，VfV 为载体组的最终平均肿瘤体积，ViD 为药物治疗组的初始平均肿瘤体积，VfD 为药物治疗组的最终平均肿瘤体积。MV 4;11 异种移植模型 [1]
雌性免疫缺陷小鼠 CrTac:Ncr-Foxn1nu（6–8 周龄）饲养于无菌过滤笼中，置于洁净室条件下。将 5 × 10⁶ 个 MV4;11 细胞皮下注射到每只小鼠的右后侧腹部，建立异种移植瘤模型。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组（50 mM NaH₂PO₄，pH 4.5）和 CX-5461 治疗组，每组 10 只小鼠。CX-5461 每周腹腔注射一次，剂量为 125 mg/kg，持续 25 天。每周测量两次肿瘤体积和体重。使用游标卡尺测量肿瘤的长和宽，并使用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积 = (长 × 宽²)/2。在研究的最后一天，根据以下公式测定肿瘤生长抑制率 (TGI)：TGI (%) = [100 – (VfD – ViD)/(VfV – ViV) × 100]，其中 ViV 为载体处理组的初始平均肿瘤体积，VfV 为载体处理组的最终平均肿瘤体积，ViD 为药物处理组的初始平均肿瘤体积，VfD 为药物处理组的最终平均肿瘤体积。

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将 2×106 个 HCT116 或 MCF-7 细胞皮下植入 6-7 周龄的裸鼠体内；当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为治疗组和对照组（每组 n=8）[1]
- 治疗组每周两次口服 CX-5461（溶于 0.5% 羧甲基纤维素钠 + 0.1% Tween 80 溶液中），剂量为 75-100 mg/kg；对照组仅给予溶剂[1]
- 每 3 天测量一次肿瘤体积；在研究结束时（4-5 周）处死小鼠，称量肿瘤重量，收集肿瘤组织进行免疫组织化学（p53、cleaved caspase-3）和 TUNEL 染色[1,2]
- 另建 p53 敲除 HCT116 异种移植模型：重复上述方案以评估抗肿瘤疗效对 p53 的依赖性[2]

小鼠口服生物利用度为 45-55%；口服 100 mg/kg 后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.8 μM，曲线下面积 (AUC0-24h) 为 12.5 μM·h [1]
- 小鼠血浆半衰期 (t1/2) 为 4-6 小时；分布容积 (Vd) 为 1.8-2.2 L/kg [1]
- 肝脏代谢极少；24 小时内，超过 80% 的剂量以原形经粪便 (60%) 和尿液 (20%) 排出 [1]
- 小鼠血浆蛋白结合率为 85-90% [1]

小鼠口服剂量>150 mg/kg，每周两次，观察到轻度血液毒性（短暂性白细胞减少症）；停药7天内即可恢复[1]
- 治疗剂量（75-100 mg/kg）下，小鼠未检测到明显的肝毒性或肾毒性（血清转氨酶、肌酐水平在正常范围内）[1]
- 治疗小鼠未出现明显的神经毒性、胃肠道毒性或体重减轻[1,2]
- 对正常人造血祖细胞的细胞毒性较低（IC50 >200 nM）[1]

[1]. Targeting RNA polymerase I with an oral small molecule CX-5461 inhibits ribosomal RNA synthesis and solid tumor growth. Cancer Res. 2011 Feb 15;71(4):1418-30.

[2]. Inhibition of RNA Polymerase I as a Therapeutic Strategy to Promote Cancer-Specific Activation of p53. Cancer Cell. 2012 Jul 10;22(1):51-65.

CX-5461 是一种有机杂四环化合物，其结构为 5-氧代-5H-[1,3]苯并噻唑并[3,2-a][1,8]萘啶-6-羧酸，其 2 位被 4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基取代，6 位羧基被 [(5-甲基吡嗪-2-基)甲基]腈基取代。CX-5461 是一种核糖体 RNA (rRNA) 合成抑制剂，可特异性抑制多种癌细胞系中 RNA 聚合酶 I 驱动的 rRNA 转录。目前，CX-5461 正在进行针对晚期血液系统恶性肿瘤和携带 BRCA1/2 突变的三阴性乳腺癌的 I/II 期临床试验。CX-5461 具有抗肿瘤活性、诱导细胞凋亡和抑制 EC 2.7.7.6（RNA 聚合酶）的作用。它是一种二氮杂卓类化合物，属于有机杂四环化合物，是吡嗪类化合物、仲酰胺和萘啶衍生物。
吡纳鲁雷克斯是一种口服生物利用度高的RNA聚合酶I（Pol I）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，吡纳鲁雷克斯选择性地结合并抑制Pol I，阻止Pol I介导的核糖体RNA（rRNA）合成，诱导细胞凋亡，并抑制肿瘤细胞生长。Pol I是合成rRNA的多蛋白复合物，在癌细胞中表达上调，并在细胞增殖和存活中发挥关键作用。rRNA转录过度激活与癌细胞不受控制的增殖有关。

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核糖体RNA合成失调与癌细胞不受控制的增殖有关。RNA聚合酶（Pol）I是合成rRNA的多蛋白复合物，在癌症中广泛激活。因此，选择性Pol I抑制剂可能为阻断癌细胞增殖提供一种通用的治疗策略。将药物化学研究与基于细胞和分子的串联筛选相结合，最终设计出了CX-5461，一种强效的小分子rRNA合成抑制剂。CX-5461选择性地抑制Pol I驱动的转录，而对Pol II驱动的转录、DNA复制和蛋白质翻译则无明显影响。分子研究表明，CX-5461抑制rRNA合成的起始阶段，并通过一种不依赖于p53的途径诱导实体瘤细胞系的衰老和自噬，但不诱导细胞凋亡。CX-5461具有良好的口服生物利用度，并在小鼠异种移植模型中显示出对人实体瘤的体内抗肿瘤活性。我们的研究结果表明，CX-5461 有望成为一种高效、选择性强且可口服的癌症治疗药物，并可用于开展临床试验。[1] RNA聚合酶I介导的核糖体RNA基因（rDNA）转录增强是人类癌症的常见特征，但其是否是恶性表型所必需的尚不明确。我们发现，小分子CX-5461可作为rDNA转录的靶向治疗药物，在体内选择性地杀死B淋巴瘤细胞，同时维持野生型B细胞群的存活。这种治疗效果源于核仁破坏和p53依赖性凋亡信号的激活。人类白血病和淋巴瘤细胞系也对rDNA转录抑制剂表现出高度敏感性，且这种敏感性取决于p53的突变状态。这些结果表明，选择性抑制rDNA转录可作为一种治疗策略，用于特异性激活p53并治疗血液系统恶性肿瘤。[2] 核糖体RNA基因（rDNA）的RNA聚合酶I（Pol I）介导的转录局限于核仁，是细胞生长和增殖的限速步骤。CX-5461抑制Pol I可在体内选择性地诱导p53介导的肿瘤细胞凋亡。目前，CX-5461正在墨尔本彼得麦肯纳医院进行针对晚期血液系统恶性肿瘤患者的临床试验。本文证明，CX-5461在无DNA损伤的情况下，还能诱导由ATM/ATR信号通路介导的p53非依赖性细胞周期检查点。此外，我们的数据表明，靶向ATM/ATR信号通路的药物与CX-5461联合使用，可显著提高体内p53缺失型肿瘤的治疗效果，而这些肿瘤通常对单一药物均无疗效。从机制上讲，我们发现CX-5461诱导了一种异常的染色质结构，其中具有转录活性的松弛rDNA重复序列缺乏转录Pol I，从而激活核仁内的ATM信号通路。因此，我们提出CX-5461对Pol转录起始的急性抑制诱导了一种新型的核仁应激反应，该反应可作为靶点以提高治疗效果。Oncotarget. 2016 年 8 月 2 日；7(31):49800-49818。

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CX-5461 是一种口服小分子 RNA 聚合酶 I (Pol I) 抑制剂，是首个靶向核糖体生物合成的药物[1]
- 其抗肿瘤机制涉及选择性阻断 Pol I 介导的 rRNA 合成，导致核仁应激、癌症特异性 p53 激活和细胞凋亡[2]
- 已开发用于治疗具有野生型 p53 的实体瘤；尚未获得FDA批准（截至文献发表时仍处于临床开发阶段）[1,2]
- 对肿瘤细胞的选择性源于肿瘤细胞对Pol I介导的核糖体生物合成的依赖性增强，以支持其快速增殖[2]
- 临床前模型显示，该药物与DNA损伤剂（例如顺铂）具有协同作用，可能增强p53野生型肿瘤的疗效[1]

C27H27N7O2S

513.61

513.194

C, 63.14; H, 5.30; N, 19.09; O, 6.23; S, 6.24

1138549-36-6

1138549-36-6; 2101314-20-7 (HCl)

25257557

White solid powder

1.5±0.1 g/cm3

739.9±60.0 °C at 760 mmHg

401.3±32.9 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.740

-0.81

123.97

1

9

4

37

915

0

S1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N2C1=C(C(N([H])C([H])([H])C1C([H])=NC(C([H])([H])[H])=C([H])N=1)=O)C(C1C([H])=C([H])C(=NC2=1)N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O

XGPBJCHFROADCK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H27N7O2S/c1-17-14-29-18(15-28-17)16-30-26(36)23-24(35)19-8-9-22(33-11-5-10-32(2)12-13-33)31-25(19)34-20-6-3-4-7-21(20)37-27(23)34/h3-4,6-9,14-15H,5,10-13,16H2,1-2H3,(H,30,36)

2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)-N-[(5-methylpyrazin-2-yl)methyl]-5-oxo-[1,3]benzothiazolo[3,2-a][1,8]naphthyridine-6-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。