DHQZ-36

Leishmania amazonensis(EC50 = 13.63 μM)

随着 DHQZ 36 浓度的增加，寄生空泡 (LPV) 的大小显着减小；在 50 μM 时，液泡尺寸减小 30%。由于这些寄生虫，每个巨噬细胞的寄生虫数量都会减少。使用 DHQZ 36 后，寄生虫在低至 5 μM 时即可显着减少。当 DHQZ 36 以 12.5 μM 或更高浓度施用时，寄生虫无法再次生长。
当 DHQZ 36 存在时，寄生虫蛋白分泌量减少 40% 以上。 LPS 激活后，DHQZ 36 逆转利什曼原虫感染细胞对 IL-6 释放的抑制[1]。

前鞭毛体药敏试验[1]
为了测定逆转录-2环素及其类似物对无菌寄生虫的EC50，使用了MTT细胞活力测定试剂盒。将早期固定相前鞭毛体以1x105个寄生虫/孔的比例接种在96孔组织培养板上，并在室温下在Retro-二环、DHQZ-36或DHQZ 36.1的存在下生长48小时，其中亚马逊乳杆菌处理的浓度范围为0-100μM，杜氏乳杆菌处理为0-200μM。灭活前鞭毛体的米替福辛处理浓度范围为0-100μM。通过以与每个实验中使用的最高药物浓度相等的DMSO浓度处理寄生虫，评估寄生虫对DMSO载体的敏感性。将前鞭毛体与MTT一起孵育2小时，并在570 nm波长和630 nm背景波长下读取甲赞产物，如Biotium方案所述。根据MTT标准曲线估算活寄生虫，该曲线由寄生虫的连续稀释制成，并将这些值与甲赞产品的相对量相关联。在GraphPad Prism 7中生成了与对照组相比的细胞存活率百分比与对数摩尔浓度的图。EC50是通过对生成的S形曲线进行非线性回归分析来计算的。使用多重t检验函数确定寄生虫生长差异的意义。在GraphPad Prism 7中使用双向方差分析和Holm-Sidak事后检验对每种浓度的时间点之间的统计显著性进行了多重比较

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催乳素恢复[1]
为了确定逆转录-2环及其SAR类似物对前鞭毛体寄生虫的抑制作用是否是短暂的，对前鞭毛进行了恢复实验。前鞭毛体以每孔1x105个寄生虫接种，并用0-100μM的浓度范围内的Retro-二环、DHQZ-36、DHQZ 36.1和米替福辛处理72小时。处理后，收集寄生虫并离心。用新鲜寄生虫培养基洗涤寄生虫中的药物，并将其重新悬浮在100μL新鲜寄生虫培养液中。在72小时的时间点，使用50μL的寄生虫进行MTT分析，另50μL用新鲜的寄生虫培养基接种在新的96孔板上。在进行MTT分析之前，让这些细胞生长48小时。通过将甲赞产品与时间0时产生的标准品与已知数量的寄生虫进行比较来估计细胞数量。然后将回收后48小时的Formazan产物与处理72小时时产生的量进行比较，以确定是否发生生长。实验重复至少三次，每种浓度重复三次。在GraphPad Prism 7中生成图表，并使用双向方差分析和Holm-Sidak事后检验进行多重比较，确定生长差异的显著性。

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RAW264.7感染的尿液巨噬细胞的药物治疗[1]
这些实验如前所述进行。简而言之，巨噬细胞被放置在含有无菌玻璃盖玻片的100毫米培养皿中，并在37°C、5%CO2的完全DMEM培养基中粘附过夜。巨噬细胞以1:10或1:20的比例感染中期静止期前鞭毛体24小时。然后洗涤盖玻片，用不同浓度的逆转录-2环素、DHQZ-36、DHQZ 36.1和miltefosine处理，如实验所述。一些盖玻片在DMSO中孵育作为载体对照。在34°C下与药物孵育24小时后，盖玻片在甲醇中固定5分钟，然后进行Giemsa染色。甲醇固定后，用Wright Giemsa染色剂以1:20的稀释度对感染的细胞进行染色15分钟，用NanoPure diH2O使其新鲜。然后用NanoPure diH2O洗涤细胞两次，并使其干燥1-2小时。盖玻片用二甲苯脱水1分钟，然后安装在玻片上的Permount中，以便在明场光学显微镜下观察。通过计数每张盖玻片上至少200个巨噬细胞来确定感染巨噬细胞的百分比和寄生虫的平均数量。在至少三个实验中进行了两次计数，并在GraphPad Prism中使用三参数剂量反应最佳拟合曲线确定了EC50值。在GraphPad Prism 7中使用单因素方差分析测量了经处理的感染细胞和对照之间的统计显著性。

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感染期间RAW264.7巨噬细胞的细胞因子分泌[1]
将巨噬细胞以5x105个细胞/mL的密度放置在6孔板中过夜以粘附。然后，如上所述，用固定的亚马逊乳杆菌前鞭毛体以1:20的比例感染细胞。24小时后，在添加100ng/ml或500ng/ml LPS和100ng/ml IFN-γ的完全DMEM中，用12.5、50或100μM的逆转录-2cycle、DHQZ-36、DHQZ 36.1或1、5或10μM的米替福辛处理感染的孔24小时。对照组单独用完全DMEM或LPS/IFN-γ治疗，不使用药物，或用不使用LPS/IFN-γ刺激的药物治疗。处理24小时后，从培养皿中收集培养基，并旋转以去除任何细胞碎片。然后，如前所述，在ELISA中评估上清液。

[1]. Structurally optimized analogs of the retrograde trafficking inhibitor Retro-2cycl limit Leishmania infections. PLoS Negl Trop Dis. 2017 May 15;11(5):e0005556.

在受感染的哺乳动物细胞中，利什曼原虫寄生于称为寄生泡（LPV）的特殊细胞器内。我们此前已证明，Retro-2（一种新型小分子逆行通路抑制剂）可降低实验性墨西哥利什曼原虫感染期间的LPV体积并减少寄生虫数量。本研究旨在确定，据报道在抑制逆行通路依赖性现象（例如，多瘤病毒感染细胞和志贺毒素在细胞内的转运）方面具有更强效力的Retro-2cycl结构类似物，是否也比母体化合物更能有效控制利什曼原虫感染。除了对LPV发育的影响外，我们还发现两种优化的Retro-2cycl类似物DHQZ 36和DHQZ 36.1分别以13.63±2.58μM和10.57±2.66μM的EC50值限制巨噬细胞中亚马逊利什曼原虫的感染，显著低于Retro-2cycl的EC50值40.15μM。此外，这些类似物还能逆转LPS激活后感染细胞中利什曼原虫诱导的IL-6释放抑制。更重要的是，我们发现与Retro-2cycl对利什曼原虫具有抑制作用不同，这些类似物能够在无菌培养中杀死利什曼原虫，这对于任何治疗利什曼原虫感染的药物来说都是一项理想的特性。综上所述，这些研究验证并扩展了已发表的Retro-2cycl的构效关系分析[1]。

C21H18F2N2OS

384.442230701447

384.11

C, 65.61; H, 4.72; F, 9.88; N, 7.29; O, 4.16; S, 8.34

1542098-94-1

1542098-94-1;

72720908

Solid powder

5

60.6

1

5

4

27

528

0

SVXVTSKHYHQIPJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H18F2N2OS/c1-2-16-8-10-19(27-16)20-24-18-9-7-15(23)11-17(18)21(26)25(20)12-13-3-5-14(22)6-4-13/h3-11,20,24H,2,12H2,1H3

2-(5-Ethyl-thiophen-2-yl)-6-fluoro-3-(4-fluoro-benzyl)-2,3-dihydro-1H-quinazolin-4-one

DHQZ-36; DHQZ 36; DHQZ 36; 1542098-94-1; 2-(5-ethylthiophen-2-yl)-6-fluoro-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-1,2-dihydroquinazolin-4-one; 2-(5-Ethylthiophene-2-yl)-6-fluoro-3-(4-fluorobenzyl)-2,3-dihydroquinazoline-4(1H)-one; CHEMBL3322091; SCHEMBL15616349; SLC09894; DHQZ36;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。