| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| 1g |
|
||
| 2g |
|
||
| 5g |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
E3 ubiquitin ligase (CRBN, Cereblon) (binding Ki = 0.12 μM) [1]
Interleukin-1 receptor-associated kinase 4 (IRAK4) (degradation DC50 = 0.35 μM); Interleukin-1 receptor-associated kinase 1 (IRAK1) (degradation DC50 = 0.62 μM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. E3连接酶结合及IRAK降解: E3 ligase Ligand 4是选择性E3泛素连接酶（CRBN）结合配体，作为靶向IRAK1/4的PROTAC（蛋白水解靶向嵌合体）降解剂的核心组件。SPR实验显示其与人CRBN的结合Ki = 0.12 μM。在THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞）和原代人外周血单个核细胞（PBMCs）中，含E3 ligase Ligand 4的PROTAC通过泛素-蛋白酶体途径剂量依赖性降解IRAK4和IRAK1。THP-1细胞中IRAK4的DC50（诱导50%靶点降解的浓度）为0.35 μM，IRAK1为0.62 μM；5 μM浓度下达到最大降解效率（IRAK4>90%，IRAK1>85%）[1]
2. 抑制IRAK介导的信号通路: 含E3 ligase Ligand 4的PROTAC在LPS（脂多糖）刺激的THP-1细胞中，抑制IRAK4/1依赖的NF-κB激活。1 μM浓度下，NF-κB荧光素酶报告基因活性较溶媒对照组降低78 ± 5%，Western blot证实下游信号分子（p-IκBα、p-p65）磷酸化水平降低[1] 3. 抑制促炎细胞因子分泌: 在LPS刺激的THP-1细胞中，该PROTAC剂量依赖性抑制促炎细胞因子分泌，IL-6、TNF-α和IL-1β抑制的IC50分别为0.48 μM、0.55 μM和0.61 μM。2 μM浓度下，IL-6分泌降低82 ± 6%，TNF-α降低75 ± 4%，IL-1β降低70 ± 5%[1] 4. IRAK依赖型癌细胞的抗增殖活性: 在IRAK4扩增的弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系（OCI-Ly3、TMD8）中，含E3 ligase Ligand 4的PROTAC抑制细胞增殖，EC50分别为0.78 μM和0.95 μM。2 μM浓度下，细胞周期阻滞于G0/G1期（48 ± 4% vs. 溶媒对照组32 ± 3%），伴随周期蛋白D1（cyclin D1）表达降低[1] 5. 选择性特征: E3 ligase Ligand 4在浓度高达10 μM时，对其他E3连接酶（如VHL、MDM2、XIAP）无显著结合。该PROTAC在THP-1细胞中不降解脱靶激酶（如JAK2、MEK1、ERK2），表现出高靶点选择性[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. LPS诱导的小鼠急性炎症模型疗效: 雄性C57BL/6小鼠腹腔注射LPS（10 mg/kg）诱导急性炎症，LPS注射前30分钟，腹腔注射含E3 ligase Ligand 4的PROTAC（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg）。10 mg/kg和20 mg/kg剂量在LPS注射后6小时显著降低血清IL-6（抑制率分别为65 ± 7%和80 ± 6%）和TNF-α（抑制率分别为58 ± 5%和72 ± 4%）水平，未观察到体重显著变化或明显临床症状[1]
2. IRAK4扩增DLBCL异种移植模型的肿瘤生长抑制: 雌性NOD-SCID小鼠右侧胁腹皮下接种5×10⁶ OCI-Ly3细胞，肿瘤体积达100–150 mm³时，随机分为溶媒对照组和PROTAC治疗组（15 mg/kg、30 mg/kg，口服灌胃，每日一次，连续21天）。30 mg/kg剂量第21天肿瘤生长抑制（TGI）率为73 ± 6%，肿瘤组织分析证实IRAK4降解（降低>75%）和p-p65表达减少[1] 3. 体内药效学效应: 炎症模型中，20 mg/kg PROTAC剂量使小鼠脾脏和肝脏中IRAK4蛋白水平较溶媒对照组分别降低70 ± 5%和65 ± 4%，血清促炎细胞因子水平在给药后12小时仍维持抑制状态[1] |
| 酶活实验 |
1. CRBN结合实验（表面等离子体共振，SPR）:
- 通过胺偶联法将重组人CRBN蛋白固定于CM5传感芯片，运行缓冲液含HEPES、NaCl和Tween-20。 - 系列浓度的E3 ligase Ligand 4（0.01–10 μM）以30 μL/min流速在25°C下流经传感芯片。 - 实时记录结合响应值（共振单位，RU），注射后监测解离过程，传感图拟合至1:1结合模型计算解离常数（Ki）[1] 2. IRAK4泛素化实验: - HEK293T细胞共转染编码IRAK4、CRBN、泛素和含E3 ligase Ligand 4 PROTAC的质粒。 - 转染24小时后，用PROTAC（0.1–5 μM）处理细胞6小时，随后加入蛋白酶体抑制剂（10 μM）孵育2小时以积累泛素化蛋白。 - 抗IRAK4抗体免疫沉淀细胞裂解物中的IRAK4，Western blot（抗泛素抗体）检测泛素化IRAK4，证实E3 ligase Ligand 4存在下IRAK4的剂量依赖性泛素化[1] |
| 细胞实验 |
1. IRAK降解Western blot实验:
- THP-1细胞以2×10⁶个细胞/孔接种到6孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养。 - 加入系列浓度的含E3 ligase Ligand 4 PROTAC（0.05–10 μM），37°C、5% CO₂孵育24小时。 - 收集细胞，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，BCA法定量蛋白浓度。 - 等量蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗IRAK4、抗IRAK1、抗CRBN和抗GAPDH（内参）抗体孵育，密度测定法定量条带强度，基于IRAK1/4蛋白水平的量效曲线计算DC50值[1] 2. NF-κB报告基因实验: - 稳定转染NF-κB荧光素酶报告质粒的THP-1细胞以5×10⁴个细胞/孔接种到96孔板。 - 细胞经PROTAC（0.01–5 μM）预处理2小时后，用LPS（1 μg/mL）刺激6小时。 - 荧光素酶活性检测试剂盒测量发光强度，计算相对于溶媒处理（LPS刺激）细胞的抑制百分比，确定IC50[1] 3. 细胞因子分泌ELISA实验: - 从健康供体分离原代人PBMCs，以1×10⁵个细胞/孔接种到96孔板。 - 细胞经PROTAC（0.1–5 μM）预处理2小时后，用LPS（1 μg/mL）或IL-1β（10 ng/mL）刺激24小时。 - 收集细胞上清液，商用ELISA试剂盒定量IL-6、TNF-α和IL-1β浓度，IC50定义为抑制50%细胞因子分泌的浓度[1] 4. 癌细胞增殖实验: - OCI-Ly3和TMD8细胞以3×10³个细胞/孔接种到96孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养。 - 加入PROTAC（0.05–10 μM），37°C、5% CO₂孵育72小时。 - 比色法检测细胞活力，从量效曲线计算EC50值[1] |
| 动物实验 |
1. LPS诱导的急性炎症小鼠模型：
- 将雄性C57BL/6小鼠（6-8周龄，20-25 g）随机分为4组（每组n=8）：载体对照组、PROTAC 5 mg/kg组、PROTAC 10 mg/kg组和PROTAC 20 mg/kg组。 - 将含有E3连接酶配体4的PROTAC溶解于DMSO和生理盐水的混合溶液中（最终DMSO浓度≤5%），并在LPS（10 mg/kg，腹腔注射）刺激前30分钟进行腹腔注射。 - LPS注射6小时后，处死小鼠，并通过心脏穿刺采集血液。离心分离血清，并用ELISA法定量检测细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）水平。收集脾脏和肝脏组织，用于IRAK4/1蛋白水平的Western blot分析[1] 2. IRAK4扩增的DLBCL异种移植模型： - 将5×10⁶个OCI-Ly3细胞皮下注射到雌性NOD-SCID小鼠（6-8周龄，18-22 g）右侧腹部。 - 当肿瘤体积达到100-150 mm³（移植后7-10天）时，将小鼠随机分为载体对照组和PROTAC治疗组（每组n=8：15 mg/kg，30 mg/kg）。 - PROTAC溶于0.5%甲基纤维素溶液中，每日灌胃一次，持续21天。载体对照组仅灌胃0.5%甲基纤维素溶液。 - 每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）。第21天，将小鼠安乐死，切除肿瘤并称重，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹（IRAK4/1、p-p65）和组织病理学分析[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 吸收：在 CD-1 小鼠中，口服含有 E3 连接酶配体 4 的 PROTAC（30 mg/kg）后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.1 μM，达峰时间 (Tmax) 为 1.8 小时。与静脉给药数据相比，口服生物利用度为 38 ± 4% [1]。
2. 分布：小鼠体内表观分布容积 (Vd/F) 为 4.2 L/kg，表明其组织分布广泛。该化合物能渗透到炎症组织（例如，LPS刺激的脾脏）和肿瘤组织中，给药后2小时，组织与血浆的浓度比分别为3.1:1（脾脏）和2.8:1（肿瘤）[1] 3. 代谢：E3连接酶配体4主要在肝脏中通过细胞色素P450 3A4 (CYP3A4) 和葡萄糖醛酸化代谢。在人肝微粒体中，体外代谢半衰期为3.7小时。已鉴定出两种主要的无活性代谢物（羟基化和葡萄糖醛酸化衍生物）[1] 4. 排泄：在小鼠中，PROTAC的血浆消除半衰期(t1/2)为5.9 ± 0.6小时。口服给药后72小时内，68%的剂量经粪便排出（42%为原形PROTAC，26%为代谢物），22%经尿液排出（主要为代谢物）[1] 5. 血浆蛋白结合率：在0.1–10 μM的浓度范围内，PROTAC在人血浆中的血浆蛋白结合率为91 ± 2%（通过平衡透析法测定）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：含有E3连接酶配体4的PROTAC在正常人肝细胞（HepG2）和原代PBMC中显示出较低的细胞毒性，CC50值>20 μM，因此对IRAK依赖性癌细胞具有较高的治疗指数（>40）[1]
2. 急性体内毒性：在CD-1小鼠和Sprague-Dawley大鼠中，单次口服剂量高达200 mg/kg的PROTAC不会引起死亡或严重的临床症状。小鼠剂量≥100 mg/kg时可观察到轻微的短暂性腹泻，24小时内即可缓解[1] 3.亚慢性毒性：大鼠连续四周口服PROTAC（每日15 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg），未发现体重、食物摄入量或实验室参数（肝功能：ALT、AST；肾功能：肌酐、BUN；血液学：血红蛋白、白细胞计数）发生显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏）的组织病理学检查未见异常病变[1] 4. 药物相互作用潜力：E3连接酶配体4在治疗浓度（≤2 μM）下不抑制或诱导主要细胞色素P450酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 药物分类和作用：E3连接酶配体4是一种合成的小分子配体，靶向E3泛素连接酶CRBN，专门设计为IRAK1/4降解复合物PROTAC的组成部分。其作用机制是将CRBN募集到PROTAC-IRAK1/4复合物中，启动IRAK1/4的泛素化和蛋白酶体降解[1]。
2. 作用机制：作为PROTAC的组成部分，E3连接酶配体4介导CRBN（E3连接酶）、IRAK1/4（靶蛋白）和PROTAC之间三元复合物的形成。这会触发IRAK1/4的多聚泛素化，最终导致其被26S蛋白酶体降解。 IRAK1/4 的降解抑制下游 NF-κB 信号通路，减少促炎细胞因子的分泌，并抑制 IRAK 依赖性癌细胞的增殖 [1] 3. 治疗潜力：基于 E3 连接酶配体 4 的 PROTAC 已被开发用于治疗 IRAK 介导的疾病，包括炎症性和自身免疫性疾病（例如，类风湿性关节炎、脓毒症）以及 IRAK 扩增的癌症（例如，弥漫性大 B 细胞淋巴瘤、骨髓瘤）。它们降解 IRAK1/4（而不仅仅是抑制其活性）的能力使其比传统的激酶抑制剂具有潜在优势，包括克服耐药性 [1] 4. 专利背景：该配体已在美国专利申请 US20190192668A1 中公开，该申请专注于开发用于治疗的 IRAK 降解剂。该专利强调了其对 CRBN 的高选择性、强大的 IRAK 降解活性和良好的药代动力学特性 [1] 5. 开发优势：与其他 E3 连接酶配体相比，E3 连接酶配体 4 表现出更高的 CRBN 结合亲和力、更强的 PROTAC 稳定性以及更低的脱靶效应，这支持了其在开发有效的 IRAK 靶向疗法方面的应用 [1] |
| 分子式 |
C13H9FN2O4
|
|---|---|
| 分子量 |
276.2200
|
| 精确质量 |
276.055
|
| CAS号 |
835616-60-9
|
| PubChem CID |
11859051
|
| 外观&性状 |
Off-white to gray solid powder
|
| 密度 |
1.570±0.06 g/cm3(Predicted)
|
| LogP |
0.44
|
| tPSA |
87.04
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
507
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
CRAUTELYXAAAPW-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H9FN2O4/c14-7-3-1-2-6-10(7)13(20)16(12(6)19)8-4-5-9(17)15-11(8)18/h1-3,8H,4-5H2,(H,15,17,18)
|
| 化学名 |
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-fluoroisoindole-1,3-dione
|
| 别名 |
E3 ligase Ligand 4
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~300 mg/mL (~1086.09 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6203 mL | 18.1015 mL | 36.2030 mL | |
| 5 mM | 0.7241 mL | 3.6203 mL | 7.2406 mL | |
| 10 mM | 0.3620 mL | 1.8102 mL | 3.6203 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Thalidomide-pyrrolidine
OICR-41103N
CDK12-Cyclin K ligand-1
(S,S,S)-AHPC-Me
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
