| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
1. Von Hippel-Lindau (VHL) E3 ubiquitin ligase (acts as the E3-recruiting moiety of the bifunctional molecule); bromodomain-containing protein 4 (BRD4, EC50 for protein degradation = 3 nM, the targeted protein for degradation) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. 蛋白降解活性:在HEK293T细胞中,E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14对BRD4表现出强效且选择性的降解活性;处理24 h后,导致50%目标蛋白降解的浓度(DC50)为3 nM,10 nM浓度下最大降解效率(Dmax)达>90%。在浓度高达100 nM时,对BRD2、BRD3等脱靶溴结构域蛋白无显著降解作用,证实了对BRD4的靶向选择性[1]
2. 细胞抗增殖活性:在依赖BRD4增殖的MV4-11急性髓系白血病细胞中,E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14处理72 h后对细胞活力的抑制IC50为12 nM;通过siRNA敲低VHL表达后,该抗增殖作用完全消失,验证其活性依赖于VHL介导的BRD4降解[1] 3. 体外机制验证:在无细胞泛素化实验体系中,E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14可在纯化的VHL复合物、E1酶、E2酶及泛素存在下,促进BRD4-泛素结合物的形成;10 nM浓度下,泛素化BRD4的生成量较对照组增加85%,证实其可桥接VHL与BRD4并诱导泛素化[1] |
| 酶活实验 |
1. 体外泛素化实验:构建包含纯化E1酶、E2酶、泛素、VHL E3连接酶复合物、重组BRD4蛋白及梯度浓度E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14(0.1-100 nM)的反应体系,加入ATP启动反应并于37℃孵育2 h,随后加入SDS-PAGE上样缓冲液终止反应。样品经SDS-PAGE电泳、转膜后,用抗BRD4和抗泛素抗体进行蛋白印迹检测,定量泛素化BRD4条带的灰度值,以此评估该偶联物的泛素化促进活性[1]
2. VHL结合实验:采用荧光偏振(FP)实验检测E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14的VHL配体结构域与VHL复合物的结合亲和力。将纯化的VHL复合物进行荧光探针标记,向体系中加入系列浓度的偶联物(终浓度范围0.01-1000 nM),室温孵育1 h后检测荧光偏振信号,通过拟合FP信号曲线计算得结合亲和力Kd=1.2 nM[1] |
| 细胞实验 |
1. BRD4降解检测实验:将HEK293T细胞以2×10^5个/孔的密度接种于6孔板,孵育24 h贴壁后,用不同浓度E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14(0.1-100 nM)处理24 h,同时设置载体对照组和VHL配体单独对照组。采用含蛋白酶抑制剂的裂解液提取细胞总蛋白,通过蛋白印迹实验检测BRD4、BRD2、BRD3及内参蛋白的表达水平,对BRD4的相对表达量进行灰度定量,计算DC50和Dmax值[1]
2. 细胞活力实验:将MV4-11细胞以5×10^3个/孔的密度接种于96孔板,贴壁12 h后,用系列浓度E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14(0.01-1000 nM)处理72 h;VHL敲低组细胞则在给药前48 h转染VHL靶向siRNA。向各孔加入细胞活力检测试剂并37℃孵育3 h,检测对应波长吸光度,计算相对于载体对照组的细胞活力,拟合量效曲线得到IC50值[1] 3. siRNA敲低验证实验:将HEK293T细胞接种于6孔板,细胞汇合度达50%时,用转染试剂将VHL特异性siRNA或阴性对照siRNA转入细胞。转染48 h后,用E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14(10 nM)处理细胞24 h,通过蛋白印迹实验检测VHL和BRD4的表达水平,证实VHL的缺失会消除该偶联物的BRD4降解作用[1] |
| 动物实验 |
1. 皮下异种移植瘤模型建立:将5×10^6个MV4-11细胞悬浮于PBS和基质凝胶(1:1,v/v)混合物中,皮下注射至NOD/SCID小鼠(6-8周龄,雌性)右侧腹部。待肿瘤生长至约150 mm³(接种后约10天)后进行分组治疗[1]
2. 给药方案:将小鼠随机分为三组(载体对照组、5 mg/kg E3连接酶配体-连接子偶联物14组、10 mg/kg E3连接酶配体-连接子偶联物14组),每组8只小鼠。将缀合物溶解于DMSO、PEG400和生理盐水(10:40:50,v/v/v)的混合溶剂中,制备给药溶液(DMSO最终浓度<1%)。药物通过腹腔注射给药,剂量为每克小鼠体重10 μL,每隔一天给药一次,共14天(共给药7次)。对照组注射相同体积的混合溶剂,但不含缀合物[1] 3. 样品采集和检测:给药期间,每3天记录小鼠体重和肿瘤体积(用游标卡尺测量,体积=长×宽²/2)。最后一次给药后,处死小鼠,解剖并称重肿瘤组织,取部分肿瘤组织进行蛋白质提取和Western blot分析,以检测BRD4的表达;另一部分组织用福尔马林固定,用于免疫组织化学染色,以评估肿瘤组织中泛素化蛋白的水平[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. E3连接酶配体-连接子缀合物14 (E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14) 是一种双功能蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC) 分子,由三个部分组成:VHL E3泛素连接酶结合配体、聚乙二醇 (PEG) 基连接子和BRD4结合配体 [1]
2. E3连接酶配体-连接子缀合物14 (E3 ligase Ligand-Linker Conjugates 14) 的作用机制是通过同时结合BRD4(靶蛋白)和VHL E3连接酶形成三元复合物,从而募集泛素化机制至BRD4,促进泛素链与BRD4的共价连接,最终导致BRD4通过26S蛋白酶体途径降解 [1] 3. E3连接酶配体-连接子缀合物14 是为治疗由 BRD4 信号异常驱动的血液系统恶性肿瘤(例如急性髓系白血病)而设计的,其连接子的长度和结构经过优化,以增强三元复合物的形成并提高靶标降解效率[1] |
| 分子式 |
C25H31F3N4O11
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|---|---|
| 分子量 |
620.529057741165
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| 精确质量 |
620.194
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| CAS号 |
1957236-21-3
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| PubChem CID |
121439766
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
213
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
15
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| 可旋转键数目(RBC) |
15
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| 重原子数目 |
43
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| 分子复杂度/Complexity |
892
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC(C(=O)O)(F)F.O=C1C(CCC(N1)=O)N1C(C2C=CC=C(C=2C1=O)OCC(NCCOCCOCCOCCN)=O)=O
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| InChi Key |
BLYRZYHKZRITLJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H30N4O9.C2HF3O2/c24-6-8-33-10-12-35-13-11-34-9-7-25-19(29)14-36-17-3-1-2-15-20(17)23(32)27(22(15)31)16-4-5-18(28)26-21(16)30;3-2(4,5)1(6)7/h1-3,16H,4-14,24H2,(H,25,29)(H,26,28,30);(H,6,7)
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| 化学名 |
N-[2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethyl]-2-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]oxyacetamide;2,2,2-trifluoroacetic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~80.58 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6115 mL | 8.0576 mL | 16.1153 mL | |
| 5 mM | 0.3223 mL | 1.6115 mL | 3.2231 mL | |
| 10 mM | 0.1612 mL | 0.8058 mL | 1.6115 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。