| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PARP2 ( IC50 = 1 nM ); PARP1 ( IC50 = 2 nM ); TNKS1 ( IC50 = 50 nM ); TNKS2 ( IC50 = 50 nM )
Stenoparib (E7449) is a dual inhibitor of PARP1/2 and tankyrase1/2 (TNKS1/2, also known as PARP5a/5b) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
E7449 是一种有效的 PARP1 和 PARP2 抑制剂，还抑制 TNKS1 和 TNKS2，使用 32P-NAD+ 作为底物，对 PARP1、PARP2、TNKS1 和 TNKS2 的 IC50 值分别为 2.0、1.0、~50 和~50 nM。 E7449 对 PARP3 或 PARP 6-16 无明显抑制作用。 E7449 将 PARP1 捕获到受损 DNA 上，并影响同源重组 (HR) 之外的 DNA 修复途径。 E7449 最有效地抑制 HR 通路成分（BRCA1 和 2、CtIP、Rad54）缺陷的细胞。 E7449 (10 μM) 抑制 SW480 细胞中的 Wnt 信号传导[1]。
司替帕利布（E7449）可抑制PARP酶活性，并将PARP1捕获到受损DNA上（该机制可增强细胞毒性）。除同源重组外，其他DNA修复通路缺陷的细胞对E7449敏感，其对野生型DT40细胞的IC50为3.2μmol/L。在结肠癌细胞系SW480中，E7449通过稳定axin和TNKS蛋白抑制Wnt/β-catenin信号通路，导致β-catenin不稳定并显著改变Wnt靶基因表达（10μmol/L E7449处理24小时可改变axin2、总β-catenin、活性β-catenin和cyclin D1的蛋白水平；3/30μmol/L E7449处理72小时可改变17/30个Wnt相关基因的表达）。此外，E7449在体外能增强化疗药物（替莫唑胺、卡铂）的细胞毒性，且BRCA1突变的乳腺癌细胞系MDA-MB-436对E7449最敏感，增殖受其显著抑制 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠黑色素瘤 B16-F10 同种移植模型中，E7449 在 100 mg/kg 剂量下可适度抑制肿瘤生长，并通过与替莫唑胺 (TMZ) 联合口服 10、30 和 100 mg/kg 剂量显着增强抑制作用。 E7449（30 或 100 mg/kg，口服）抑制 PARP，显示出抗肿瘤活性，并且在 BRCA 突变异种移植模型中具有良好的耐受性，没有任何明显的体重减轻或死亡。 E7449（30、100 或 300 mg/kg，口服）以剂量依赖性方式抑制毛发再生长，并阻断 C57BL/6 小鼠中的 Wnt 信号传导。 E7449（100 mg/kg，口服）与 MEK 抑制剂联合在 Wnt1 皮下模型（最初从 Wnt1 (int-1) 转基因小鼠中分离出的乳腺肿瘤）中表现出抗肿瘤活性[1]。
司替帕利布（E7449）在BRCA缺陷的MDA-MB-436人乳腺癌异种移植模型中具有显著的单药抗肿瘤活性：每日口服给药连续28天，在第83天可显著抑制肿瘤生长（与载体组相比P<0.05）。单次给药30mg/kg或100mg/kg的E7449，在1-36小时内可抑制MDA-MB-436肿瘤组织中的PARP活性（通过检测PAR水平）；在NCI-H460人肺癌异种移植模型中，E7449（1-100mg/kg）呈剂量依赖性抑制肿瘤组织中的PARP活性（给药后15分钟至36小时）。在B16-F10小鼠黑色素瘤同基因移植模型中，E7449与替莫唑胺联用可增强抗肿瘤效果（第14、20天与替莫唑胺单药相比P<0.05）；在MX-1人乳腺癌原位模型中，E7449（100mg/kg）与卡铂（60mg/kg，单次静脉注射）联用增强抗肿瘤活性（第19天与E7449第4天给药+卡铂第3天给药组相比P<0.05）。 在Wnt1皮下移植模型中，司替帕利布（E7449）单药无抗肿瘤活性，但与MEK抑制剂E6201联用可产生协同的肿瘤生长抑制效果。E7449（30、100、300mg/kg）呈剂量依赖性抑制脱毛后C57BL/6雌性小鼠的Wnt信号介导毛发生长。在肿瘤组织中观察到E7449对Wnt靶基因的药效学影响，CAR2、FZD9、LEF1和VIL1的表达发生改变 [1] |
| 酶活实验 |
总之，细胞在细胞裂解缓冲液（CLB：50 mM HEPES，pH 7.4，150 mM NaCl，1 mM MgCl2，1 mM EGTA，1 mM DTT，1 % TritonX-100、1 μg/mL 亮肽素、抑肽酶、胃酶抑素、PMSF），转染后 24 至 48 小时内用冰冷的 PBS 洗涤 3 次。裂解物在 100,000 g 下进行 30 分钟超速离心过程。裂解物澄清后，将其与预结合的 Protein A 磁珠和抗 GFP 抗体 (3E6) 在 4°C 下孵育一小时。在 CLB 中浸泡 1 分钟后，将珠子在含有 1 M NaCl 的 CLB 中洗涤 3 分钟，并在 PARP 反应缓冲液（PRB；50 mM Tris，pH 7.5，50 mM NaCl，0.5 mM DTT，0.1% TritonX）中洗涤 1 分钟。 -100、1 μg/mL 亮抑酶肽、抑肽酶和胃酶抑素）。在 25°C 下进行 30 分钟的 NAD+ 掺入反应在含有 10 μM NAD+ 并补充有 32P-NAD< 的 PRB 中进行support>+ 的比例为 1:20。对于低掺入信号的 PARP（PARP4、5a 和 16），NAD+ 掺入以 1:5 的比例在 25°C 下进行一小时。之后，将珠子再次悬浮在Laemmli样品缓冲液中，加热10分钟至65℃，用磁铁提取珠子，并将上清液点样到Whatman纸上。磷光成像用于分析样品[1]。
1. 肿瘤组织中PARP活性检测：制备MDA-MB-436或NCI-H460异种移植瘤组织裂解液，测定PAR水平以评估PARP活性；将PAR水平按蛋白浓度归一化，载体处理的对照组平均PAR水平设为100% PARP活性，利用所有对照重复的平均值计算各时间点司替帕利布（E7449）对PARP活性的抑制率，实验数据来自2次独立实验（每次设3个重复） [1] 2. DT40细胞中PARP1捕获实验：将DT40细胞用不同浓度的司替帕利布（E7449）处理30分钟（存在/不存在0.05% MMS），提取染色质结合蛋白，通过免疫印迹检测PARP1和组蛋白H3（染色质结合标记物），使用LI-COR Odyssey成像仪的Image Studio软件定量PARP1的信号强度，结果为3次独立实验的代表性数据 [1] |
| 细胞实验 |
在一组 32 个同基因 DT40 细胞系中进行增殖测定，其中每个细胞系都缺乏独特的 DNA 修复基因。将细胞接种并与不同浓度的测试化合物一起孵育 2-3 天（～ 8 个细胞周期）。使用 XTT 评估细胞生长，并使用 GraphPad Prism 5 软件版本 5.02 计算 IC50 值。每个实验一式两份进行，并且至少进行 3 次单独的实验。人乳腺癌细胞系 HCC1143、HCC70、HCC1806、MDA-MB-436、T47D、MDA-MB-157、MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-453、BT-20 和 Hs578T 是用过的。对于细胞系组检测，细胞在含有 10% FBS 的 RPMI 1640 或 DMEM 培养基中保存和检测。对于增殖测定，细胞以低密度铺板于 96 孔板中。添加不同浓度的E7449并将板孵育总共8天；第 4 天补充化合物和培养基。使用 CellTiter-Glo 细胞活力测定评估细胞生长。每个实验一式两份进行，并且至少进行 3 次单独的实验[1]。
1. DT40细胞系敏感性实验：用司替帕利布（E7449）处理32种同源重组的DNA修复突变DT40细胞系，测定IC50值（至少3次独立实验），并将IC50值归一化到野生型DT40细胞（3.2μmol/L），按DNA修复功能对各细胞系的敏感性分类 [1] 2. SW480细胞中Wnt信号相关蛋白检测：将SW480细胞用10μmol/L的司替帕利布（E7449）处理24小时，提取细胞裂解液进行SDS-PAGE和免疫印迹，检测axin2、总β-catenin、活性β-catenin和cyclin D1的蛋白水平（以tubulin为内参）；用Image Studio软件定量条带的荧光强度，计算目标蛋白与tubulin的比值，结果为多次独立实验的代表性数据 [1] 3. SW480细胞中Wnt靶基因表达分析：将SW480细胞用3μmol/L或30μmol/L的司替帕利布（E7449）（或XAV939/奥拉帕利）处理72小时，提取RNA并通过定制的TLDA进行基因表达谱分析；筛选出与DMSO对照组相比相对倍数变化≥1.5（P>0.05）的Wnt相关基因，进行层次聚类（曼哈顿距离）和完全连锁绘图 [1] 4. 乳腺癌细胞系增殖抑制实验：用司替帕利布（E7449）处理乳腺癌细胞系，评估增殖抑制效果（至少3次独立实验），确定各细胞系的敏感性（MDA-MB-436最敏感） [1] |
| 动物实验 |
替莫唑胺 (TMZ) 联合 B16-F10 同种异体移植模型：将 B16-F10 细胞 (2 × 10⁵) 皮下注射到雌性 C57BL/6 小鼠体内。接种疫苗一天后，开始药物治疗，并根据体重进行随机分组。TMZ 和替诺帕尼均每日口服一次，均以 0.5% 甲基纤维素溶液配制。从第 1 天到第 5 天，每天给予 50 mg/kg 的 TMZ，可单独使用或联合使用。在第 1 天到第 7 天，患者每日分别给予 10、30 和 100 mg/kg 的替诺帕尼联合 TMZ 治疗，以及 100 mg/kg 的替诺帕尼单药治疗。对照组使用 0.5% 甲基纤维素水溶液作为溶剂。接受联合治疗的动物在所有动物接受斯替诺巴利或载体剂量后接受替莫唑胺[1]。
1. B16-F10 黑色素瘤同种移植模型：小鼠每天口服一次替莫唑胺，持续 5 天，同时每天口服一次斯替诺巴利（E7449），持续 5 天（另加 2 天单药 E7449）。监测肿瘤生长和体重，并采用单因素方差分析（ANOVA）和Dunnett多重比较检验分析统计学意义[1] 2. MX-1乳腺癌原位移植模型：小鼠于第3或4天接受单次静脉注射卡铂（60 mg/kg），并从第3或4天开始每日口服一次Stenoparib (E7449)（100 mg/kg）。记录肿瘤生长和体重，并采用单因素方差分析（ANOVA）确定统计学意义[1] 3. MDA-MB-436乳腺癌异种移植模型：荷MDA-MB-436肿瘤的小鼠连续28天每日口服一次Stenoparib (E7449)，以评估其抗肿瘤活性。为了检测PARP活性，小鼠单次接受E7449（30 mg/kg或100 mg/kg）给药，并在给药后1-36小时收集肿瘤进行PAR分析[1] 4. NCI-H460肺癌异种移植模型：小鼠单次口服Stenoparib (E7449)（1-100 mg/kg）或载体。在治疗后15分钟至36小时收集肿瘤，并通过ELISA检测PAR水平以评估PARP抑制情况[1] 5. 毛发再生抑制模型：C57BL/6雌性小鼠脱毛后，每日一次口服Stenoparib (E7449)（30、100、300 mg/kg），连续12天。通过拍照监测并记录毛发再生情况[1] 6. Wnt1皮下模型：荷瘤小鼠每日口服一次Stenoparib (E7449)（100 mg/kg）或Wnt-C59（10 mg/kg），以评估单药疗效。联合治疗中，每日口服一次E7449，并每4天静脉注射一次E6201（MEK抑制剂），连续3天。监测肿瘤生长和体重，并在治疗7天后收集肿瘤组织进行Wnt靶基因表达分析[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Stenoparib (E7449)未显示出其他TNKS抑制剂所报道的肠道毒性，总体毒性较低。在B16-F10模型中，E7449联合替莫唑胺治疗组在第7天观察到体重下降，但停药后恢复。在MX-1模型中，E7449联合卡铂治疗组未观察到明显的体重下降。在Wnt1模型中，E7449耐受性良好，毒性极低（以体重下降衡量）。E6201单药治疗导致体重下降（<10%），但治疗后恢复，与E7449联合治疗并未加剧这种体重下降[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
2X-121 正在进行临床试验 NCT03562832（研究 PARP 抑制剂 2X-121 在经 2X-121 药物反应组筛选的转移性乳腺癌患者中的抗肿瘤作用和耐受性）。
PARP/Tankyrase 抑制剂 2X-121 是一种口服小分子抑制剂，可抑制核酶聚（ADP-核糖）聚合酶 (PARP) 1 和 2，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，E7449 选择性地与 PARP 1 和 2 结合，从而阻止碱基切除修复 (BER) 途径对受损 DNA 的修复。该药物可增强单链和双链 DNA 断裂的积累，促进基因组不稳定，最终导致细胞凋亡。PARP 1/2 抑制剂 E7449 可能增强 DNA 损伤剂和放射疗法的细胞毒性。 PARP 催化核蛋白的翻译后 ADP 核糖基化，这些核蛋白发出信号并募集其他蛋白质来修复受损的 DNA。 Stenoparib (E7449) 是一种新型的 PARP1/2 和 TNKS1/2 双重抑制剂，它不仅通过抑制 PARP1/2 并将 PARP1 捕获在受损 DNA 上来损害 DNA 损伤修复，而且还通过抑制 TNKS1/2 来拮抗经典的 Wnt/β-catenin 信号通路 [1] Stenoparib (E7449) 在 BRCA 缺陷型异种移植瘤中具有单药抗肿瘤活性，并能增强化疗疗效；在Wnt依赖性肿瘤模型中，当与MEK抑制剂联合使用时，其抗肿瘤活性增强[1] Stenoparib (E7449)目前处于早期临床开发阶段，由于缺乏肠道毒性，与其他TNKS抑制剂相比具有安全性优势[1] |
| 分子式 |
C18H15N5O
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|---|---|---|
| 分子量 |
317.34
|
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| 精确质量 |
317.127
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| 元素分析 |
C, 68.13; H, 4.76; N, 22.07; O, 5.04
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| CAS号 |
1140964-99-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
135565981
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
381.4±34.0 °C at 760 mmHg
|
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| 闪点 |
184.5±25.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.9 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.731
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| LogP |
1.12
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| tPSA |
69.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
586
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1C2C([H])=C([H])C([H])=C3C=2C(=NN1[H])N=C(C([H])([H])N1C([H])([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C1([H])[H])N3[H]
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| InChi Key |
JLFSBHQQXIAQEC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H15N5O/c24-18-13-6-3-7-14-16(13)17(21-22-18)20-15(19-14)10-23-8-11-4-1-2-5-12(11)9-23/h1-7H,8-10H2,(H,22,24)(H,19,20,21)
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| 化学名 |
11-(1,3-dihydroisoindol-2-ylmethyl)-2,3,10,12-tetrazatricyclo[7.3.1.05,13]trideca-1,5(13),6,8,11-pentaen-4-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1512 mL | 15.7560 mL | 31.5119 mL | |
| 5 mM | 0.6302 mL | 3.1512 mL | 6.3024 mL | |
| 10 mM | 0.3151 mL | 1.5756 mL | 3.1512 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Figure 1E7449 traps PARP onto DNA and affects DNA repair pathways beyond HR.Oncotarget.2015 Dec 1;6(38):41307-23. |
|---|
 E7449 potentiates antitumor activity of temozolomide and carboplatin.Oncotarget.2015 Dec 1;6(38):41307-23. |
 Antitumor activity and PARP inhibition by E7449 in a BRCA mutant xenograft model.Oncotarget.2015 Dec 1;6(38):41307-23. |
 E7449 inhibits Wnt signalingin vitro: effects of E7449 treatment on Wnt proteins in SW480 cells by western blot analysis.Oncotarget.2015 Dec 1;6(38):41307-23. |
|---|
 E7449 inhibits Wnt signalingin vitro: effects of E7449 treatment on expression of Wnt-related genes in SW480 cells.
Dose-dependent PARP inhibition by E7449 in tumor tissue from NCI-H460 human lung cancer xenografts. |
 E7449 dose-responsively inhibits re-growth of hair, a Wnt-mediated pathway, in mice.
Antitumor effect of E7449 in combination with MEK inhibitor in Wnt-dependent model.Oncotarget.2015 Dec 1;6(38):41307-23. |
PARP1-IN-42
RBN012811
PARP1-IN-43
TNKS-IN-4
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