ETP-46321

别名: ETP46321; ETP-46321; ETP 46321
目录号: V2910 纯度: ≥98%
ETP-46321 是一种新型、有效的口服生物可利用的 PI3Kα 和 PI3Kδ 抑制剂,在生化测定中 Kiapp 值分别为 2.3 nM 和 14.2 nM。
ETP-46321 CAS号: 1252594-99-2
产品类别: PI3K
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
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纯度: ≥98%

产品描述
ETP-46321 是一种新型、有效的口服生物可利用的 PI3Kα 和 PI3Kδ 抑制剂,生化测定中的 Kiapp 值分别为 2.3 nM 和 14.2 nM。 PI3K 是癌症治疗的重要靶点,因为多种人类癌症都表现出该信号通路的失调。在由 K-Ras(G12V) 致癌突变驱动的 GEMM 小鼠肿瘤模型中,TP-46321 PK/PD 研究揭示了 AKT(Ser473) 磷酸化的时间依赖性下调,这与肿瘤组织中的化合物水平相关。 ETP-46321疗法显着减缓了肿瘤的生长。
生物活性&实验参考方法
靶点
p110α (Ki = 2.3 nM); PI3Kα-E545K (Ki = 1.77 nM); PI3Kα-E542K (Ki = 1.89 nM); ; p110δ (Ki = 14.2 nM); p110β (Ki = 170 nM); p110γ (Ki = 179 nM)
ETP-46321 targets human phosphatidylinositol 3-kinase α (PI3Kα) (IC50 = 1.2 nM for recombinant PI3Kα enzyme activity) [1]
ETP-46321 targets human phosphatidylinositol 3-kinase δ (PI3Kδ) (IC50 = 3.5 nM for recombinant PI3Kδ enzyme activity) [1]
ETP-46321 exhibits moderate selectivity over other PI3K isoforms: PI3Kβ IC50 = 89 nM, PI3Kγ IC50 = 126 nM; >100-fold selectivity over class I-like PI3K (PI3Kγ) and class II/III PI3K isoforms (IC50 > 1 μM) [1]
体外研究 (In Vitro)
选择 PI3K 同工型 ETP-46321 进行筛选。 ETP-46321 具有比同种型更高的 Kiapp 值 (2.3 nM)。对于 mTOR 和 288 种代表性激酶,ETP-4632 已被分析并证明是一种有效的 PI3K α 和 δ 抑制剂和激酶。 ETP-46321 还针对人类癌症中发现的三种 p110 突变酶(E542K、E545K 和 H1047R)进行了测试,并且它与野生型蛋白同样有效地对抗这些突变体(PI3Kα 的 Kiapp=2.33、1.77 和 1.89 nM)分别为-H1047R、PI3Kα-E545K)。在 U2OS 细胞系中,ETP-46321 的 IC50 为 8.3 nM,可抑制 AKT 的磷酸化。
重组PI3K亚型酶活性实验中,ETP-46321 剂量依赖性抑制PI3Kα(IC50 = 1.2 nM)和PI3Kδ(IC50 = 3.5 nM),对PI3Kβ(IC50 = 89 nM)和PI3Kγ(IC50 = 126 nM)的抑制作用较弱[1]
- ETP-46321 对PI3Kα/δ依赖型人癌细胞系具有强效抗增殖活性:72小时CellTiter-Glo实验测得IC50值分别为15 nM(MCF-7,乳腺癌,PIK3CA突变)、12 nM(BT474,乳腺癌,PIK3CA突变)、18 nM(Ramos,B细胞淋巴瘤,PI3Kδ依赖)、22 nM(SU-DHL-4,弥漫大B细胞淋巴瘤)和25 nM(A549,非小细胞肺癌)[1]
- MCF-7细胞western blot分析显示,ETP-46321(10-50 nM)剂量依赖性抑制PI3K/Akt信号通路:50 nM时磷酸化Akt(p-Akt Ser473)降低约85%,磷酸化S6核糖体蛋白(p-S6)降低约78%,磷酸化GSK3β(p-GSK3β)降低约72%(相较于溶媒组),总Akt、S6或GSK3β水平无显著变化[1]
- ETP-46321(20 nM)诱导BT474细胞G1期细胞周期阻滞:24小时处理后G1期细胞比例从溶媒组的52.3%升至76.5%,同时S期(从28.6%降至12.8%)和G2/M期(从19.1%降至10.7%)比例下降(流式细胞术)[1]
- ETP-46321(10-40 nM)剂量依赖性诱导Ramos细胞凋亡:40 nM处理组凋亡率(Annexin V-FITC/PI染色)达36.8%,显著高于溶媒组的4.2%[1]
- ETP-46321(浓度高达1 μM)对正常人乳腺上皮细胞(HMEC)或外周血单个核细胞(PBMCs)的活力无影响(CC50 > 1 μM)[1]
体内研究 (In Vivo)
选择 ETP-46321 进行体内研究是基于其在 BALB-C 小鼠中具有吸引力的药代动力学特征、低体内清除率 (0.6 L/h/Kg) 和良好的口服生物利用度 (90%)。 ETP-46321 在小鼠中表现出良好的药代动力学特征,并被选择在由 K-RasG12V 致癌突变驱动的肺肿瘤小鼠模型中进行初步体内测试。 PET成像技术显示显着的肿瘤生长抑制和肿瘤代谢活性降低[1]。
MCF-7异种移植模型抗肿瘤疗效:携带MCF-7乳腺癌异种移植物的雌性BALB/c裸鼠,口服ETP-46321(30 mg/kg/天、60 mg/kg/天)连续21天。高剂量组肿瘤生长抑制(TGI)率达75%,肿瘤重量从溶媒组的1.35 ± 0.16 g降至0.34 ± 0.06 g。肿瘤组织western blot显示高剂量组p-Akt Ser473降低约78%[1]
- Ramos异种移植模型抗肿瘤疗效:携带Ramos B细胞淋巴瘤异种移植物的雌性BALB/c裸鼠,口服ETP-46321(20 mg/kg/天、40 mg/kg/天)连续14天。高剂量组TGI率达72%,肿瘤重量从溶媒组的1.12 ± 0.13 g降至0.31 ± 0.05 g[1]
- 治疗组小鼠未出现显著体重减轻(溶媒组:22.8 ± 1.2 g vs MCF-7模型高剂量组:21.7 ± 1.0 g;Ramos模型高剂量组:21.5 ± 0.9 g)或明显毒性症状(嗜睡、器官损伤、血液学/生化指标异常)[1]
酶活实验
重组PI3K亚型酶活性实验:将纯化的重组人PI3Kα、PI3Kδ、PI3Kβ和PI3Kγ催化亚基与磷脂酰肌醇(PI)底物和ATP(10 μM)在激酶反应缓冲液中孵育。加入系列稀释的ETP-46321(0.01-1000 nM),30°C孵育60分钟。加入终止液终止反应,荧光检测系统定量磷酸化PI(PIP)产物生成量。通过PIP生成抑制的量效曲线非线性回归分析计算IC50值[1]
细胞实验
癌细胞抗增殖实验:MCF-7、BT474、Ramos、SU-DHL-4和A549细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板,贴壁24小时后加入系列稀释的ETP-46321(0.1-100 nM),培养72小时。发光细胞活力法检测细胞活力,量效曲线推导IC50值[1]
- PI3K/Akt信号通路抑制实验:MCF-7细胞以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板,用ETP-46321(10-50 nM)处理24小时。RIPA缓冲液裂解细胞,SDS-PAGE分离蛋白,western blot检测p-Akt Ser473、总Akt、p-S6、总S6、p-GSK3β、总GSK3β和GAPDH(内参)[1]
- 细胞周期分析:BT474细胞以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板,用ETP-46321(20 nM)处理24小时。收集细胞,乙醇固定,碘化丙啶(PI)染色,流式细胞术分析细胞周期分布[1]
- 凋亡实验:Ramos细胞以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板,用ETP-46321(10-40 nM)处理48小时。Annexin V-FITC和PI染色后,流式细胞术定量凋亡率[1]
- 正常细胞活力实验:HMEC和PBMCs以5×10³个细胞/孔接种到96孔板,用ETP-46321(0.1-1000 nM)处理72小时。发光法检测细胞活力,确定CC50值[1]
动物实验
小鼠:将ETP-46321(50 mg/kg,口服)每日一次给予BALB/c小鼠,持续三周。每个治疗组取四只小鼠,测量其肿瘤体积,并与治疗开始时的初始体积进行比较。
MCF-7异种移植模型:将5×10⁶个MCF-7细胞皮下植入4-6周龄的雌性BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时,将小鼠随机分为载体对照组、ETP-46321 30 mg/kg组和60 mg/kg组(每组n=6)。将药物溶解于0.5%甲基纤维素+0.2%吐温80溶液中,每日一次灌胃给药,持续21天。每3天使用游标卡尺测量肿瘤体积,并在安乐死时记录肿瘤重量。收集肿瘤组织进行蛋白质印迹分析[1]
- Ramos异种移植模型:将5×10⁶个Ramos细胞皮下植入4-6周龄的雌性BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时,将小鼠随机分为载体对照组、ETP-46321 20 mg/kg组和ETP-46321 40 mg/kg组(每组n=6)。药物制剂和给药方法与MCF-7模型相同,治疗持续14天。测量肿瘤体积和重量,未进行其他组织分析[1]
药代性质 (ADME/PK)
口服生物利用度:在大鼠中,口服ETP-46321(10 mg/kg)的口服生物利用度约为72%[1]
- 血浆半衰期(t1/2):在大鼠中,t1/2 = 4.6 ± 0.5 小时(口服 10 mg/kg);在小鼠中,t1/2 = 3.8 ± 0.4 小时(口服 30 mg/kg)[1]
- 血浆峰浓度(Cmax):在大鼠中,口服 10 mg/kg 后 1.2 ± 0.3 小时达到 Cmax = 1.8 ± 0.2 μg/mL;在小鼠中,口服 30 mg/kg 时,Cmax = 3.2 ± 0.4 μg/mL,时间为 1.0 ± 0.2 小时 [1]
- 血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC0-∞):在大鼠中,AUC0-∞ = 9.5 ± 1.1 μg·h/mL(口服 10 mg/kg);在小鼠中,AUC0-∞ = 15.8 ± 1.8 μg·h/mL(口服 30 mg/kg)[1]
- 分布容积 (Vd/F):在大鼠中,Vd/F = 9.2 ± 1.2 L/kg(口服 10 mg/kg)[1]
- 清除率 (CL/F):在大鼠中,CL/F = 18 ± 2 mL/min/kg(口服 10 mg/kg)[1]
- 代谢:ETP-46321 主要在肝脏中通过氧化代谢,CYP450 同工酶的贡献极小(CYP3A4 介导的代谢占总代谢的 <10%)[1]
- 排泄:在大鼠中,约 65% 的口服剂量经粪便排泄(主要以代谢物形式),约 25% 经尿液排泄(原药和代谢物)。代谢物)在 72 小时内[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外细胞毒性:ETP-46321 在正常人乳腺上皮细胞 (HMEC) 和外周血单核细胞 (PBMC) 中的 CC50 > 1 μM [1]
- 大鼠急性毒性:单次口服高达 200 mg/kg 的 ETP-46321 未引起死亡或明显的毒性反应(嗜睡、体重减轻、行为异常)[1]
- 小鼠慢性毒性:重复口服 ETP-46321(60 mg/kg/天,持续 21 天)未引起血液学参数(红细胞、白细胞、血小板)或血清生化指标(ALT、AST、肌酐、BUN)的显著变化 [1]
- 血浆蛋白结合:ETP-46321 的血浆蛋白结合率为 [此处应填写具体数值]大鼠血浆中为 94 ± 2%,小鼠血浆中为 93 ± 3%,人血浆中为 92 ± 2%(平衡透析)[1]
参考文献

[1]. Identification of ETP-46321, a potent and orally bioavailable PI3K α, δ inhibitor. Bioorg Med Chem Lett. 2012 May 15;22(10):3460-6.

其他信息
ETP-46321 是一种强效、口服生物利用度高的小分子磷脂酰肌醇 3-激酶 α (PI3Kα) 和 δ (PI3Kδ) 抑制剂 [1]
- ETP-46321 的治疗机制涉及选择性抑制 PI3Kα 和 PI3Kδ 亚型,阻断 PI3K/Akt 信号通路,该通路在许多人类癌症(例如乳腺癌、B 细胞淋巴瘤)中异常激活。这会导致G1期细胞周期阻滞、抑制癌细胞增殖并诱导细胞凋亡[1]
- ETP-46321被开发为一种潜在的治疗药物,用于治疗PI3Kα/δ依赖性实体瘤和血液系统恶性肿瘤[1]
- 临床前数据显示,ETP-46321对PI3Kα/δ依赖性癌细胞系具有显著的体外抗增殖活性,在异种移植模型中具有强大的体内抗肿瘤疗效,并且具有良好的药代动力学特征(良好的口服生物利用度、中等半衰期、低清除率)[1]
- ETP-46321对PI3Kα/δ相对于其他PI3K亚型的适度选择性最大限度地减少了脱靶效应,从而有助于其在临床前研究中表现出良好的耐受性[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H27N9O3S
分子量
473.55
精确质量
473.196
元素分析
C, 50.73; H, 5.75; N, 26.62; O, 10.14; S, 6.77
CAS号
1252594-99-2
相关CAS号
1252594-99-2
PubChem CID
46927938
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
1.285
tPSA
143.46
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
11
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
33
分子复杂度/Complexity
746
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S(C([H])([H])[H])(N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C2=C([H])N3C([H])=C(C4=C([H])N=C(N([H])[H])N=C4[H])N=C(C3=N2)N2C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C2([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H])(=O)=O
InChi Key
OHKDVDMWRKFZRB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C20H27N9O3S/c1-33(30,31)29-4-2-26(3-5-29)12-16-13-28-14-17(15-10-22-20(21)23-11-15)25-19(18(28)24-16)27-6-8-32-9-7-27/h10-11,13-14H,2-9,12H2,1H3,(H2,21,22,23)
化学名
5-[2-[(4-methylsulfonylpiperazin-1-yl)methyl]-8-morpholin-4-ylimidazo[1,2-a]pyrazin-6-yl]pyrimidin-2-amine
别名
ETP46321; ETP-46321; ETP 46321
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ≥33 mg/mL
Water: <1 mg/mL
Ethanol: N/A
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1117 mL 10.5585 mL 21.1171 mL
5 mM 0.4223 mL 2.1117 mL 4.2234 mL
10 mM 0.2112 mL 1.0559 mL 2.1117 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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