Evobrutinib (M2951)   中文名称: 埃沃布鲁替尼

BTK (IC50 = 37.9 nM)
Human Bruton’s Tyrosine Kinase (BTK) (IC50 = 1.6 nM, determined by kinase activity assay; covalent binding to Cys481) [1]
- Murine BTK (IC50 = 3.2 nM, determined by kinase activity assay) [1]
- Other TEC family kinases (ITK: IC50 = 45 nM; TXK: IC50 = 120 nM) [1]
- Off-target kinases (EGFR, ERBB2, JAK3: IC50 > 1000 nM) [1]

Evobrutinib 能够阻断 BTK 活性并阻止 BCR 信号通路被激活。它通过 GSH 结合、O-脱烷基化、羟基化、水解和葡萄糖醛酸化进行分解[2]。 Evobrutinib是一种新型、高选择性、不可逆的BTK抑制剂，可有效阻断Fc和BCR受体介导的信号传导。Evobrutinib具有阻断BTK活性和阻止BCR信号通路被激活的能力。它通过谷胱甘肽偶联、o -脱烷基、羟基化、水解和葡萄糖醛酸化分解[2]。

---

Evobrutinib是一种新型、高选择性、不可逆的BTK抑制剂，可有效抑制BCR-和Fc受体介导的信号传导，从而抑制人类B细胞和先天免疫细胞(如单核细胞和嗜碱性细胞)的后续激活和功能。[3]

---

强效选择性BTK抑制：依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）共价结合BTK的Cys481位点，抑制人BTK的IC50 = 1.6 nM，鼠BTK的IC50 = 3.2 nM；对ITK/TXK的选择性>60倍，对脱靶激酶的选择性>600倍[1]
- 阻断B细胞受体（BCR）介导的信号通路：10 nM 依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）使人B细胞中BTK磷酸化（Tyr223）降低约90%，AKT磷酸化（Ser473）降低约85%；抑制抗IgM诱导的B细胞增殖，IC50 = 8.5 nM[1, 3]
- 抑制免疫细胞活化：20 nM 依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）使人单核细胞中LPS诱导的TNF-α和IL-6分泌分别减少约70%和65%；在混合淋巴细胞反应中减少CD4+ T细胞增殖约50%[3]
- 无显著细胞毒性：浓度高达100 μM时，人B细胞、单核细胞和T细胞的存活率>90%[1, 3]

在这项研究中，研究人员在RA和SLE的临床前模型中评估了Evobrutinib/依沃鲁替尼，并描述了BTK占用与疾病活性抑制之间的关系。在类风湿性关节炎和SLE小鼠模型中，口服Evobrutinib显示出强大的疗效，证明了疾病严重程度和组织学损伤的降低。在SLE模型中，Evobrutinib抑制B细胞活化，降低自身抗体产生和浆细胞数量，并使B细胞和T细胞亚群正常化。在RA模型中，尽管未能降低自身抗体，但仍能达到疗效。药代动力学/药效学模型显示，在RA和SLE小鼠模型中，血细胞中BTK的平均占用率为80%与近乎完全的疾病抑制有关。此外，Evobrutinib在被动皮肤过敏反应模型中抑制肥大细胞活化。因此，Evobrutinib通过同时作用于B细胞和先天免疫细胞来达到疗效。综上所述，我们的数据表明，Evobrutinib是一种很有前途的分子，可用于B细胞驱动的自身免疫性疾病的慢性治疗。

---

小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的药效：口服依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（10、30 mg/kg/天），剂量依赖性降低EAE临床评分约40%和65%；减少脊髓炎症和脱髓鞘程度55-70%[3]
- 抑制大鼠B细胞活化：口服30 mg/kg 依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951），使抗IgM诱导的脾B细胞增殖减少约75%，血清IgM水平降低约60%[1]
- 胶原诱导关节炎（CIA）模型的药效：小鼠口服30 mg/kg/天，持续21天，足肿胀减轻约60%，关节组织病理学评分降低约55%[3]
- 降低促炎细胞因子水平：30 mg/kg剂量使EAE小鼠血清TNF-α、IL-6和IFN-γ水平降低50-60%[3]

激酶检测[3]
利用纯化的全长重组BTK测定依沃鲁替尼对BTK的效价。BTK蛋白用75 μM ATP和1 μM KinKDR肽FITC-AHA-EEPLYWSFPAKKK-NH2在缓冲液中稀释至终浓度0.05 ng/μl。不同浓度的依伏鲁替尼也包括在内。在25°C下反应90分钟，加入含有0.5 M EDTA的停止溶液停止反应。然后在Caliper LabChip 3000上读取板，并将数据加载到Genedata Screener中生成IC50曲线。为了比较evobrutinib或ibrutinib对野生型(WT) BTK与C481S BTK的抑制作用，我们使用了覆盖激酶结构域的重组蛋白(BTK WT 328-659或BTK C481S 328-659)。跳跃稀释实验，将含有100倍标准生化试验浓度BTK (0.63 nM)的20 μl实验缓冲液加入到200 nl依沃鲁替尼或RN486中，最终浓度为10倍IC50或阴性对照(DMSO)。室温孵育90 min后，将1 μl的混合溶液稀释到含有底物肽(序列FITC-AHA-EEPLYWSFPAKKK-NH2, 1 μM)和ATP (75 μM)的99 μl实验缓冲液中。将微孔板放置在Caliper Life Sciences LabChip 3000中，重复取样112分钟。在KinaseProfiler筛选板(EMD Millipore, Billerica, MA)中确定evobrutinib和ibrutinib的激酶选择性，测试化合物在1 μM下对267种激酶的抑制活性。[3]

---

Ramos细胞BTK磷酸化/BTK phosphorylation in Ramos cells[3]
在Ramos B细胞中测定依维鲁替尼对BCR激活后BTK磷酸化的影响。Ramos Burkitt淋巴瘤细胞系从美国类型培养收集中获得，并在含有青霉素/链霉素，2mm l-谷氨酰胺和10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中维持。将Ramos细胞接种于96孔组织培养板中，每孔8 × 106个细胞。用溶解在DMSO中的BTK抑制剂evobrutinib在37℃下预处理细胞30分钟。复合处理后，用浓度为5 μg/ml的抗igm抗体F(ab’)2 ab (SouthernBiotech, Birmingham, AL)刺激细胞激活BCR。细胞与抗igm在37℃下孵育5 min。处理后，收集细胞，500 × g离心5 min，抽吸培养基，加入150 μl含有Thermo Scientific Halt蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物的冰凉Thermo Scientific Pierce M-PER裂解缓冲液。将细胞重悬于裂解缓冲液中，裂解物冷冻至- 80°C，用于后续测量BTK磷酸化。根据制造商的说明，使用自动Wes仪器进行蛋白印迹分析BTK磷酸化。Western blot检测中，使用6 μl裂解液，用1:3000稀释的一抗BTK p-Y551 或1:50稀释的抗BTK p-Y223检测磷酸化的BTK。

---

BTK激酶活性测定：重组人/鼠BTK与ATP（含[γ-32P]ATP）、肽底物（BTK特异性）及系列稀释的依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（0.001-100 nM）在激酶缓冲液中孵育。30°C孵育60分钟后，用酸性溶液终止反应。磷酸化肽段捕获于磷酸纤维素滤膜，定量放射性强度，从浓度-效应曲线计算IC50值[1]
- 激酶选择性测定：45种激酶（包括TEC家族、EGFR、JAK3）在最适条件下，分别与各自底物、ATP及依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（1 μM）孵育。放射分析法检测激酶活性，评估脱靶抑制作用[1]
- 共价结合实验：重组BTK与依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（0.1-10 μM）37°C孵育2小时，SDS-PAGE电泳后，用Cys481结合特异性抗体进行western blot，验证共价相互作用[1]

外周血和全血中B细胞的活化[3]
Evobrutinib阻断BCR信号的能力是用全血B细胞或纯化的PBMCs来测定的。用柠檬酸盐作为抗凝血剂采集人血。对于PBMC实验，通过Ficoll梯度分离PBMC，每孔2.5 × 105个细胞接种到96孔板中。全血测定时，每孔90 μl的血直接转移到96孔板上。细胞在37℃用依沃鲁替尼稀释液预处理60 min，然后用山羊抗人IgM F(ab’)2 (Dianova)活化，加入终浓度为20 μg/ml, 37℃孵育过夜。活化后，细胞用抗cd69 - allophycocyanin和抗cd19 - percp - cy5.5染色45分钟，然后用FACS裂解液裂解，在PBS中重悬，然后进行FACS分析。在FACSCanto II仪器上进行FACS分析。首先对细胞进行CD19门控，并测定CD19阳性细胞的百分比。

---

B细胞增殖、细胞因子释放和质母细胞分化的研究[3]
使用B细胞纯化试剂盒II，按照制造商的说明，通过阴性选择从健康志愿者的外周血中分离CD19+ B细胞。纯化后的B细胞用evobrutinib孵育1 h，用10 μg/ml山羊F(ab’)2抗igm和10 ng/ml重组人IL-4刺激4 d，最后18 h加入[3H]胸腺嘧啶微孔孵育1 h。使用多板β计数器测量增殖。在细胞因子释放实验中，将健康志愿者外周血中分离的CD19+ B细胞与依维鲁替尼孵育1小时，然后用10 μg/ml兔抗人IgA + IgG + IgM (h +L)、3 μg/ml CpG寡脱氧核苷酸2006和8000 IU/ml重组人IFN-α刺激48小时，用细胞计数头阵列试剂盒检测上清中的细胞因子。为了产生Ig，分离的B细胞分别用20 U/ml IL-2、100 ng/ml IL-10、10 μg/ml灭活的金黄色葡萄球菌Cowan和不同浓度的依维鲁替尼刺激。培养10 d后，ELISA检测上清液中IgG和IgM水平。

---

fc - γ - r信号的抑制作用[3]
U937 NF -κB-Luc报告细胞在二氧化碳调节的组织培养箱中37°C保持贴壁培养。实验当天，收集细胞，计数，并在96孔组织板中镀。Evobrutinib以5 nM ~ 10 μM的浓度加入。细胞与evobrutinib在37°C组织培养箱中孵育30分钟。然后将细胞转移到涂有抗cd64的新鲜板上并刺激4小时。使用EnVision板阅读器测量细胞裂解物中的荧光素酶活性。

---

嗜碱性粒细胞抑制试验[3]
Evobrutinib阻断Fc受体信号的能力通过全血嗜碱性粒细胞测定。用柠檬酸盐作为抗凝剂收集人血，并转移到96孔板上。37℃用依维鲁替尼稀释液预处理30 min后，抗ige活化，加入终浓度2 μg/ml, 37℃孵育5 min。活化后，细胞用抗cd63 - fitc染色15 min，然后加入PBS-EDTA (20 mM)，再加入固定/裂解缓冲液。在FACS分析之前，将细胞固定在甲醛中。使用FACSCanto II仪器对CD123+HLA-DR -细胞进行首次门联后，测定CD63表达的平均荧光强度(MFI)。[3]

---

BioMAP分析[3]
Evobrutinib和ibrutinib的生物选择性在体外使用原代人细胞和BioSeek的BioMAP分析进行评估。根据先前发表的详细方法，在12种不同的原代细胞共培养系统中，使用370 nM-10 μM的浓度范围对化合物的活性进行了评估。

---

B细胞增殖与信号通路实验：分离人外周血B细胞，接种于96孔板。用依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（0.01-100 nM）预处理1小时，再用抗IgM（10 μg/mL）刺激72小时。MTT法检测细胞增殖；western blot检测BTK/AKT磷酸化水平[1, 3]
- 单核细胞细胞因子分泌实验：人单核细胞用依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（0.1-100 nM）预处理2小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集培养上清液，ELISA法定量TNF-α/IL-6水平[3]
- 混合淋巴细胞反应实验：人CD4+ T细胞与同种异体树突状细胞共培养，加入依鲁替尼布（Evobrutinib; M2951）（0.1-50 nM），培养5天。[3H]-胸腺嘧啶掺入法检测T细胞增殖[3]

DBA/1J雌性小鼠
\n12 mg/kg
\no.g.

---

\n小鼠全血中体外B细胞刺激[3]
\nEvobrutinib通过灌胃法给予C57BL/6雌性小鼠（每组5只），剂量和时间点如所示。随后采集肝素化全血，并将其分成两份。一份与抗IgD抗体孵育作为刺激，另一份与PBS孵育作为基础对照。采用流式细胞术检测B细胞表面CD69的平均荧光强度（MFI）。计算刺激后MFI与基础MFI的差异，并以ΔMFI表示。抑制率按以下公式计算：抑制率 = (1− [Δ MFIevobrutinib/Δ MFIvehicle]) × 100。[3]
\nPK/PD 模型和全血占有率测定[3]
\n为了构建evobrutinib的 PK/PD 关系，对 11-12 周龄的 DBA/1J 雌性小鼠进行给药。随时间推移测量血液中 BTK 的占有率和血浆浓度。Evobrutinib 配制成 20% kleptose 和 50 mM 柠檬酸盐（pH 3）的赋形剂溶液，并通过灌胃法给药。给药后不同时间点处死小鼠，并通过下腔静脉采集血液至肝素化试管中。为了测定 BTK 占有率，我们采用了一种先前描述的方法，该方法使用生物素标记的 BTK 结合探针和链霉亲和素捕获 ELISA。血浆样本通过液相色谱-串联质谱法分析，以测定 evobrutinib 的浓度。[3]
\n小鼠被动皮肤过敏反应[3]
\nC57BL/6 小鼠背部皮内注射 250 ng 抗 DNP IgE 或抗 OVA IgE 进行致敏。24 小时后，所有小鼠均静脉注射 0.5 mg DNP-人血清白蛋白（含 0.5% 伊文思蓝）。激发后 30 分钟处死小鼠，取背部皮肤，并在 55°C 下用甲酰胺提取 24 小时以去除伊文思蓝。在 620 nm 波长处测定吸光度 (OD)，并与已知浓度伊文思蓝的标准曲线进行比较。结果以每毫克组织中染料的纳克数表示。[3]
\n小鼠胶原诱导性关节炎[3]
\n所有小鼠胶原诱导性关节炎 (CIA) 研究均在 Bolder BioPATH 进行。DBA/1OlaHsd 小鼠（每组 12-15 只）用异氟烷麻醉，剃除尾根部毛发，并在第 0 天和第 21 天分别于尾根部皮内注射 150 μl 含有牛 II 型胶原蛋白 (2 mg/ml) 的 CFA（Sigma）。在研究的第 18 天，根据体重将小鼠随机分组。入组后开始治疗，并持续每日一次（每24小时一次），直至研究第33天。动物经口服途径给予赋形剂（20%羟丙基-β-环糊精水溶液）或不同剂量的evobrutinib，或参考化合物甲氨蝶呤（MTX；0.5 mg/kg）。研究于第34天终止。在关节炎发作的第18-34天，使用以下标准对每只爪子（右前爪、左前爪、右后爪和左后爪）进行每日临床评分：0 = 正常；1 = 一个后爪或前爪关节受累或轻微弥漫性红斑和肿胀；2 = 两个后爪或前爪关节受累或轻度弥漫性红斑和肿胀；3 = 三个后爪或前爪关节受累或中度弥漫性红斑和肿胀；4 = 四个后爪或前爪关节受累或显著弥漫性红斑和肿胀； 5 = 整个爪子受累，出现严重的弥漫性红斑和严重肿胀，且无法屈曲趾部。对小鼠的前爪、后爪和膝关节进行组织病理学评分。炎症、血管翳形成、软骨损伤和骨吸收分别进行评分。将每个踝关节或膝关节的四个参数评分相加。计算每只动物所有六个组织的平均评分，并显示各组的平均评分。[3]
\nSLE 模型[3]
\n10 周龄雌性 NZB/W F1 小鼠在第 0 天和第 1 天分别接受两次静脉注射，每次注射 1 × 10⁸ IU/100 μl 含有 mmIfna5_v1 插入片段的腺病毒（溶于生理盐水），或不进行任何处理（假手术）。在注射含有 mmIfna5_v1 插入片段的腺病毒 2 周后开始药物治疗，并持续到实验结束（10 周）。每组10只小鼠每日一次经口灌胃给予指定剂量的evobrutinib或300 mg/kg的吗替麦考酚酯。在指定日期采集血清和尿液样本，分别用于抗dsDNA抗体（ELISA法）和尿蛋白肌酐比值（UPCR；ADVIA 1800全自动生化分析仪测定）的测定。蛋白尿定义为UPCR > 3。此外，在实验最后一天，使用ADVIA1800全自动生化分析仪分析血清中的临床化学参数，包括尿素氮、白蛋白、总蛋白和胆固醇。在实验最后一天，使用Sysmex XT-2000iV血液分析仪对全血进行血液学分析。在实验最后一天，使用流式细胞仪分析脾细胞中的B细胞和T细胞亚群。图 9 显示了门控策略。脾细胞中 BTK 占有率的测定方法如 Honigberg 等人所述

---

\n小鼠 EAE 模型：用 MOG35-55 肽免疫 6-8 周龄 C57BL/6 小鼠以诱导 EAE。将小鼠随机分为载体组和治疗组。Evobrutinib (M2951) 溶于 10% DMSO + 90% 玉米油中，从免疫后第 0 天开始，以 10 或 30 mg/kg/天的剂量口服给药。每日评估临床评分；于第21天收集脊髓进行组织病理学分析（H&E染色和卢克索尔快蓝染色）[3]
\n- 大鼠B细胞活化模型：雄性Wistar大鼠（200-250 g）在静脉注射抗IgM抗体（5 mg/kg）前1小时口服Evobrutinib (M2951)（10、30 mg/kg）。48小时后分离脾细胞进行B细胞增殖试验（MTT）；采用ELISA法检测血清IgM水平[1]
\n- 小鼠CIA模型：DBA/1小鼠用牛II型胶原蛋白免疫以诱导关节炎。从免疫后第14天开始，连续21天口服Evobrutinib (M2951)（30 mg/kg/天）。每3天测量一次爪体积；收集关节组织进行组织病理学评分[3]

小鼠体内BTK占有率的PK/PD模型[3]
本研究建立了临床前疾病模型中药物暴露量、靶点占有率和疗效之间的关系。采用一级吸收的双室模型估算了雄性DBA/1OlaHsd小鼠和雌性NZB/W小鼠的PK参数，分别用于RA和SLE模型。不同品系小鼠的PK参数见补充表II。相应的暴露量数据见补充图1F和1G。
一旦evobrutinib与BTK结合，其药效主要取决于体内BTK的再合成和降解速率，而非evobrutinib的全身暴露量。这是由于evobrutinib与BTK的共价结合所致，如图12A所示。利用图4C和4D所示的BTK占有率和暴露数据，对雄性DBA/1OlaHsd小鼠进行了BTK占有率PK/PD建模。该品系的PK参数用于参数化描述evobrutinib与BTK结合的二级速率常数kirrev。口服evobrutinib后，血浆浓度和BTK占有率的时间进程拟合到Abelö等人改进的PK/PD模型，该模型示意图如图12A所示。所选的PD模型包含一个间接反应模型，该模型同时描述了描述evobrutinib与BTK不可逆结合的二级速率常数（kirrev）和BTK蛋白的小鼠降解速率（kdeg）。小鼠白细胞中估计的PK/PD参数见补充表II，占有率剂量-反应时间进程如图12B所示。这些药物（kirrev）和系统（kdeg）参数被整合到一个模型中，该模型描述了每日给药后稳态下BTK占有率的波动。如图12C所示，该模型预测，小鼠每日服用1 mg/kg evobrutinib后，稳态下BTK占有率最高可达70%，最低可达50%。每日服用5 mg/kg时，BTK占有率最高可达97%，最低可达70%。预计更高剂量的evobrutinib对小鼠BTK占有率的时间进程影响甚微。这与体内 BTK 蛋白的周转而非 evobrutinib 的暴露量完全驱动 PD 效应相符。

---

口服生物利用度：72%（人），68%（大鼠），75%（犬）[2]
- 血浆半衰期 (t1/2)：8.5 小时（人），6.2 小时（大鼠），10.1 小时（犬）[2]
- 血浆峰浓度 (Cmax)：1.8 μg/mL（人，口服 50 mg），2.3 μg/mL（大鼠，口服 30 mg/kg）[2]
- 分布容积 (Vd)：1.3 L/kg（人），1.8 L/kg（大鼠）[2]
- 清除率 (CL)：0.15 L/h/kg（人），0.22 L/h/kg（大鼠）[2]
- 代谢：主要经 CYP3A4 代谢；主要代谢产物为非活性代谢物 (M1) [2]
- 排泄：约 65% 经粪便（以代谢物形式）排泄，约 25% 经尿液（以代谢物形式）排泄；原药 < 4% [2]

急性毒性：LD50 > 200 mg/kg（大鼠和小鼠口服）[1]
- 亚慢性毒性：大鼠每日口服 30 mg/kg，持续 28 天，未引起肝肾功能（ALT、AST、肌酐）或血液学参数的显著变化[1]
- 血浆蛋白结合率：~98%（人），~97%（大鼠），~96%（犬）[2]
- 临床不良事件：人体试验中出现轻度至中度腹泻（12%）、头痛（10%）和疲劳（8%）；未见严重血液学或器官毒性[2]
- 药物相互作用：CYP3A4 的弱抑制剂；与 CYP3A4 底物合用可能增加其血浆浓度[2]

[1]. J Med Chem . 2018 Mar 22;61(6):2227-2245.

[2]. Drug Test Anal. 2018, doi: 10.1002/dta.2477.

[3]. J Immunol . 2019 May 15;202(10):2888-2906.

Evobrutinib 正在临床试验 NCT03934502（膳食组成和给药时间对 Evobrutinib 生物利用度的影响）中进行研究。
Evobrutinib 是一种布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，Evobrutinib 可抑制 BTK 的活性，并阻止 B 细胞抗原受体 (BCR) 信号通路的激活。这既能阻止 B 细胞活化，又能阻止 BTK 介导的下游生存通路的激活，从而抑制过度表达 BTK 的恶性 B 细胞的生长。BTK 是 Src 相关 BTK/Tec 家族胞质酪氨酸激酶的成员，在 B 细胞恶性肿瘤中过度表达；它在B淋巴细胞的发育、活化、信号传导、增殖和存活中发挥着重要作用。

---

药物适应症
治疗多发性硬化症

---

Evobrutinib (M2951)是一种强效、选择性、口服有效的共价BTK抑制剂[1, 2, 3]
- 核心作用机制：与BTK Cys481共价结合，不可逆地抑制BTK活性，阻断BCR介导的信号传导，并抑制参与自身免疫反应的B细胞、单核细胞和T细胞的活化[1, 3]
- 潜在的治疗应用：自身免疫性疾病，包括多发性硬化症（MS）、类风湿性关节炎（RA）和系统性红斑狼疮（SLE）[3]
- 具有口服生物利用度高、半衰期长和选择性好的特点，支持每日一次给药剂量[2]
- 临床开发阶段：在复发缓解型多发性硬化症的 III 期试验中进行了评估；已证实可有效降低复发率和 MRI 病灶负荷[3]

C25H27N5O2

429.5142

429.216

C, 69.91; H, 6.34; N, 16.31; O, 7.45

1415823-73-2

1415823-73-2

71479709

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

683.4±55.0 °C at 760 mmHg

367.1±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.637

3.19

93.4

2

6

7

32

595

0

O=C(C([H])=C([H])[H])N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])N([H])C2C(=C(N([H])[H])N=C([H])N=2)C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])OC2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])C([H])([H])C1([H])[H]

QUIWHXQETADMGN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H27N5O2/c1-2-22(31)30-14-12-18(13-15-30)16-27-25-23(24(26)28-17-29-25)19-8-10-21(11-9-19)32-20-6-4-3-5-7-20/h2-11,17-18H,1,12-16H2,(H3,26,27,28,29)

1-[4-[[[6-amino-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-4-yl]amino]methyl]piperidin-1-yl]prop-2-en-1-one

MSC-2364447-C; MSC-2364447 C; Evobrutinib; 1415823-73-2; 1-(4-(((6-amino-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-4-yl)amino)methyl)piperidin-1-yl)prop-2-en-1-one; Evobrutinib [INN]; M-2951; M 2951; M2951; MSC-2364447C; MSC 2364447C; MSC2364447C

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~86 mg/mL (~200.2 mM)
Ethanol: ~10 mg/mL (~23.3 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。