In silico docking studies highlighted Lotusine's affinity for proteins involved in diabetes pathophysiology including: Glucose fructose 6 phosphate amidotransferase (PDB: 2zj4), Glycogen Synthase Kinase (PDB: 3f7z), aldose reductase (PDB: 3g5e), Glucokinase (PDB: 4ixc), Hydroxysteroid dehydrogenase (PDB: 4k11), Proliferator-activated receptor gamma (PPAR gamma, PDB: 3dzy), and Pyruvate dehydrogenase kinase (PDB: 4mp2). [2]

在HepG2细胞中，用25 mM和50 mM D-葡萄糖以及Lotusine（无论是否与D-葡萄糖联用）处理48和72小时后，细胞活力未受到显著影响，细胞活力维持在85-90%。Lotusine与25 mM D-葡萄糖联用可显著改善D-葡萄糖诱导的SOD活性降低[2]。Lotusine处理在48和72小时后可减轻25 mM D-葡萄糖诱导的CAT活性降低。与对照组相比，Lotusine 处理 48 小时后，CAT 活性显著升高 [2]。Lotusine 与 25 mM D-葡萄糖联合处理可提高 GPx 活性，在 50 µM 浓度下处理 48 小时和 72 小时后，GPx 活性均显著升高 [2]。Lotusine 可显著降低暴露于 25 mM D-葡萄糖的细胞中的 MDA 水平。在 HepG2 细胞中，用 50 mM D-葡萄糖处理 72 小时后，MDA 水平升高了 41%，而 GSH 水平降低了 50%。然而，补充了Lotusine的饮食治疗的大鼠表现出显著的保护作用，谷胱甘肽（GSH）水平升高[2]。Lotusine（200 μg/mL）抑制α-淀粉酶活性，抑制率为80.36%，IC50为30.60 μg/mL[2]。Lotusine（200 μg/mL）抑制α-葡萄糖苷酶活性，抑制率为82.6%，IC50为36.15 μg/mL[2]。Lotusine治疗显著改变了mRNA表达水平，其中IRS-1的表达显著升高，与二甲双胍的效果相当。 AKT-2 和 GLUT-4 mRNA 水平在 Lotusine 处理后也表现出显著变化 [2]。
在 H9c2 细胞中，用 10 和 50 µM Lotusine 预处理 24 小时，然后暴露于 1 µM 阿霉素 (DOX)，结果显示细胞活力接近对照组 (10 µM)，细胞增殖率在 SRB 和 MTT 检测中分别为 118.53±9.05% 和 110.36±1.35%。浓度为 100 µM 的 Lotusine 导致细胞活力显著降低（SRB 和 MTT 检测结果分别为 84.41±6.07% 和 79.84±11.20%）[3]。
在 H9c2 细胞中，用 10 和 50 µM 的 Lotusine 进行预处理，可通过提高 SOD 和 CAT 的抗氧化水平显著保护心肌细胞，而只有 50 µM 的浓度在 DOX 处理后提高了 GSH 含量。与单独使用阿霉素（DOX）处理的细胞相比，经Lotusine预处理的细胞显著降低了脂质过氧化（MDA含量）[3]。
在H9c2细胞中，经Lotusine预处理（10和50 µM）的细胞未显示明显的形态学变化（收缩、起泡、体积减小、脱落），并且与单独使用DOX处理的细胞相比，其细胞核排列完整（吉姆萨染色），而单独使用DOX处理的细胞则显示染色质浓缩的深染细胞核[3]。
在H9c2细胞中，经Lotusine预处理（10和50 µM）的细胞与对照细胞一样，未显示绿色荧光（DCFDA染色），而单独使用DOX处理的细胞则观察到强烈的绿色荧光（ROS）[3]。
在H9c2细胞中，经Lotusine预处理的细胞显示与单独使用阿霉素（DOX）处理的细胞相比，qPCR分析显示促凋亡基因Bax和凋亡执行蛋白caspase-3表达下调，抗凋亡基因Bcl-2表达上调；而单独使用DOX处理的细胞则显示Bcl-2表达下调（倍数变化0.61±0.11），Cas-3（倍数变化2.5±0.52）和Bax（倍数变化2.08±0.29）表达上调[3]。
在H9c2细胞中，即使暴露于DOX，经Lotusine预处理的细胞中caspase 3/7活性也出现下降。50 µM Lotusine处理组的发光值与未处理的对照组接近，而10 µM Lotusine预处理的细胞caspase活性显著升高[3]。

链脲佐菌素（STZ，50 mg/kg）诱导的糖尿病大鼠，在接受含乐信（Lotusine，50 mg/kg）的饲料喂养四周后，其生长指标显著改善，包括体重增加（BWG）高于糖尿病对照组。乐信治疗组（G3）大鼠的体重增加最高（77.8±0.5 g）；STZ+乐信联合治疗组（G4）的体重增加分别比对照组和G2组（未治疗的糖尿病组）高出13%和45%[2]。膳食中添加乐信显著恢复了糖尿病大鼠血清、肝脏和胰腺中维生素C和维生素E的水平，使其接近正常值[2]。乐信显著提高了肝细胞蛋白含量至11.6 mg/g，与格列本脲治疗组相比，相对增幅达21%[2]。

α-淀粉酶抑制 (AAI) 测定：将 5 µL 猪胰酶溶液和 15 µL 溶于磷酸盐缓冲液（浓度为 1.56 - 200 μg/mL）的 Lotusine 混合，室温孵育 10 分钟。然后加入 20 µL 淀粉溶液，37°C 孵育 30 分钟。加入 10 µL 1M HCl 和 75 µL 碘试剂终止反应。在 540 nm 处测定吸光度。以阿卡波糖作为阳性对照，PBS 作为阴性对照。抑制率的计算公式为：抑制率 (%) = [Abs(对照) - Abs(样品)] / Abs(对照) × 100 [2]。
α-葡萄糖苷酶抑制试验：将含有 5 µL Lotusine（1.56 - 200 μg/mL）和 20 µL α-葡萄糖苷酶溶液（50 μg/mL）的反应混合物置于 96 孔板中，加入 10 µL 对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷 (PNP-GLUC, 10 mM) 和 60 µL 67 mM KH2PO4 缓冲液（pH 6.8），于 37°C 孵育 20 分钟。加入 25 µL 100 mM 碳酸钠 (Na2CO3) 终止反应，并在 405 nm 处测定吸光度。表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）被用作阳性对照[2]。

细胞活力检测（MTT）：将HepG2细胞（12 x 10^3 个细胞/孔）接种于96孔板中，分别在37°C下用25 μM和50 μM D-葡萄糖和/或25 μM Lotusine处理48小时和72小时。处理后，将细胞置于含0.5 mg/ml MTT的无血清培养基中孵育3.5小时。用100 μL DMSO溶解甲臜晶体后，在570/650 nm处测定吸光度。细胞活力以处理组细胞吸光度与未处理组细胞吸光度的比值表示[2]。
脂质过氧化抑制活性（MDA测定）：将经D-葡萄糖和/或Lotusine处理的HepG2细胞裂解液（100 μL）与0.25 mol/L HCl、15%三氯乙酸和400 μL含0.375% TBA的TBA试剂混合。95℃加热30分钟后快速冷却，混合物在4℃下以8000 x g离心15分钟。取上清液，在532 nm处测定其粉红色吸光度[2]。
抗氧化酶活性测定：采用硝基蓝四唑（NBT）法测定SOD活性。GPx和CAT活性测定方法如前所述。采用总蛋白测定法（Bio-Rad BSA）检测蛋白水平[2]。
GSH 浓度测定：测定血清以及肝脏和胰腺组织匀浆上清液中的 GSH 浓度。硫醇试剂（DTNB，Ellman 试剂）与游离巯基反应生成黄色复合物，在 412 nm 处测定吸光度[2]。
实时荧光定量 PCR：使用 TRIzol 试剂提取总 RNA。使用 RT² SYBR Green 混合液进行 qRT-PCR 反应。PCR 程序：95°C 预变性 4 分钟，然后进行 35 个循环，每个循环包括 95°C 变性 90 秒、52°C 退火 30 秒和 72°C 延伸 90 秒，最后 72°C 延伸 10 分钟。使用IRS-1、Akt-2、GLUT-4和GAPDH（内参）的引物。采用2-ΔΔCT法计算相对基因表达变化[2]。
阿霉素（DOX）和洛图辛（Lotusine）对H9c2细胞的细胞毒性试验（MTT法）：将约6000个细胞接种于96孔板的每个孔中。12小时后，用不同浓度的阿霉素（0.10、0.50、1.00、2.50、5.0和10 μM）和洛图辛（10、50、100、250、500和1000 μM）处理细胞，并在37℃下孵育1天。然后，加入90 μL不含FBS的DMEM培养基和10 μL MTT试剂（5 mg/mL），避光孵育4小时。将生成的甲臜晶体溶解于0.1 mL DMSO中，并在570 nm处读取吸光度值[3]。
体外Lotusine对H9c2细胞的心脏保护活性：将细胞预先用10、50和100 μM的Lotusine处理24小时。孵育后，弃去培养基，加入1 μM的DOX溶液，继续孵育24小时。采用 MTT 和 SRB（磺基罗丹明 B）法评估细胞活力[3]。
H9c2 细胞总蛋白和内源性抗氧化剂水平的测定：用 Lotusine（10、50 和 100 μM）预处理细胞，并用 DOX（1 μM）处理后，用预冷的裂解缓冲液（1% Triton-X 100、50 mM 氯化钠、10 mM Tris-HCl、1 mM 苯甲基磺酰氟、5 mM EDTA、0.1% β-巯基乙醇，pH 7.5）裂解细胞。将匀浆后的细胞悬液离心（4°C，5000 rpm，10 分钟）。以牛血清白蛋白（BSA）为标准，通过上清液测定总蛋白含量[3]。
H9c2细胞中酶促抗氧化剂（CAT、SOD）和谷胱甘肽（GSH）的测定：CAT活性通过H₂O₂还原为水和氧气来测定；反应混合物由2 mM H₂O₂溶于100 mM磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中，与细胞匀浆混合，并在240 nm处记录吸光度。SOD活性通过酶对NBT还原的抑制活性来测定。GSH通过NADPH在含有DTNB的反应混合物中的反应来测定，并在412 nm处记录吸光度[3]。
H9c2细胞中脂质过氧化（LPO）测定：将细胞（6.0 x 10⁻³）用Lotusine（10、50和100 μM）预处理，然后暴露于1 μM阿霉素（DOX）。用预冷的细胞裂解缓冲液裂解细胞，并在 4°C 下超声处理 30 秒。将匀浆与 1 mL 10% 三氯乙酸 (TCA) 混合，在 4°C 下以 3000 rpm 离心 10 分钟。收集上清液，加入 1 mL 0.67% 叔丁醇 (TBA) 溶液，并在沸水浴中孵育 20 分钟。加入正丁醇和吡啶的混合物（比例为 15:1），并离心。用正丁醇层测定 532 nm 处的吸光度值 [3]。
H9c2 细胞核异常的形态学检查：将细胞接种于玻璃盖玻片上。进行洛图辛 (Lotusine) 预处理（10 和 50 μM）和阿霉素 (DOX) (1 μM) 处理 24 小时。使用吉姆萨染色法检测细胞核异常，并在明场显微镜下观察[3]。
H9c2细胞内活性氧（ROS）检测：将细胞（-6 x 10^-3）接种于玻璃盖玻片上，预先用Lotusine（10和50 μM）处理，然后暴露于阿霉素（DOX，1 μM）。处理后的细胞在37°C下避光孵育30分钟，加入20 μM DCFDA，用PBS洗涤，并在荧光显微镜下观察[3]。
H9c2细胞基因表达qPCR分析：使用TRIzol试剂提取总RNA。使用SuperScript™ III第一链合成系统进行cDNA合成。使用Power SYBR™ Green PCR Master Mix进行qPCR分析。使用Bcl-2、Bax、Cas-3和β-肌动蛋白（管家基因）的引物[3]。
H9c2细胞中Caspase 3/7活性检测：将约6000个H9c2细胞接种于96孔板中，并用Lotusine（10和50 μM）预处理24小时，然后用DOX（1 μM）处理24小时。使用商业试剂盒进行Caspase-Glo 3/7活性检测。在不同时间间隔（0、15、30和45分钟）使用发光仪测量相对光单位（RLU）或亮度[3]。

本研究使用了200只体重为160±20 g的雄性Wistar（Sprague Dawley）大鼠。大鼠饲养于温度23℃、相对湿度20-50%的条件下，光照/黑暗周期为12小时[2]。
糖尿病的诱导方法为：对禁食过夜的大鼠进行单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）。STZ溶液用0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 4.5）配制，剂量为50 mg/kg体重，并置于冰上保存。STZ注射后6小时，给予大鼠5%葡萄糖溶液，持续12小时。高血糖状态在3天后得到确认，空腹血糖（FBG）≥ 250 mg/dL，餐后血糖（PPG）≥ 350 mg/dL [2]。
200只大鼠被分为4组，每组10只，每个处理重复5次。第1组（对照组）给予生理盐水补充，并喂以基础饲料，持续4周。第2组（糖尿病对照组）给予链脲佐菌素（STZ）50 mg/kg体重，持续4周。第3组（格列本脲治疗糖尿病组）给予格列本脲50 mg/kg体重，并喂以正常对照饲料，持续4周。第4组给予洛特辛50 mg/kg体重。所有组均喂以正常对照饲料，持续4周[2]。
实验结束时，采用颈椎脱臼法处死大鼠。通过心脏穿刺采集血样，待其凝固后，以3,000 xg离心10分钟。倾出血清并储存于-80°C。取出肝脏和胰腺，用冰冷的蔗糖溶液（250 mM）洗涤，并在磷酸盐缓冲液（50 mM，pH 7.4）中匀浆，得到最终浓度为10% (w/v) 的匀浆液。将匀浆液在4°C下以10,000 xg离心30分钟，取上清液用于后续检测[2]。

在HepG2细胞中，用Lotusine（25 μM和50 μM，含或不含D-葡萄糖）处理48和72小时后，细胞活力未受到显著影响，维持在85-90%[2]。
在H9c2细胞中，Lotusine处理24小时的IC50值为701 μM。仅在250至1000 μM的高浓度下观察到细胞活力显著下降。较低浓度（10、50和100 μM）下的细胞活力接近对照组（高于95%）[3]。

[1]. Anti-lung cancer activity of lotusine in non-small cell lung cancer HCC827 via reducing proliferation, oxidative stress, induction of apoptosis, and G0/G1 cell cycle arrest via suppressing EGFR-Akt-ERK signalling. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2025;61(4):450-458.

[2]. Prophylactic Impacts of Lotusine Against Hyperglycaemia-Induced Oxidative Stress in Hepatic Cells Isolated from Diabetic Rats Via Irs-1/Pi3 K/Akt Pathway. Pak Vet J, 45(1): 124-137.

[3]. Lotusine, an alkaloid from Nelumbo nucifera (Gaertn.), attenuates doxorubicin-induced toxicity in embryonically derived H9c2 cells. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2020;56(5):367-377.

[4]. Lotusine ameliorates propionic acid-induced autism spectrum disorder-like behavior in mice by activating D1 dopamine receptor in medial prefrontal cortex. Phytother Res. 2024;38(2):1089-1103.

[5]. Lotusine G: a new cyclopeptide alkaloid from Zizyphus lotus. Fitoterapia. 2002 Feb;73(1):63-8.

莲花素属于异喹啉类化合物。据报道，莲花素存在于木兰（Magnolia officinalis）、小花木兰（Xylopia parviflora）和莲花（Nelumbo nucifera）中，相关数据可供参考。

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该研究得出结论，莲花素具有良好的耐受性和降血糖作用，表明其具有作为治疗2型糖尿病（T2DM）的有效抗糖尿病药物的潜力[2]。
这是首次报道使用莲花素在体外模型（H9c2细胞）中对阿霉素诱导的氧化应激进行心脏保护作用[3]。
在莲花素中发现的生物活性化合物可能被开发成潜在的治疗化合物，用于对抗导致慢性炎症发生和发展的酶/蛋白质，以及用于监测高血糖[2]。

C19H24NO3

314.176

6871-67-6

Lotusine hydroxide;3721-76-4

5274587

Typically exists as solid at room temperature

2.981

49.69

2

3

3

23

392

1

O(C([H])([H])[H])C1=C(C([H])=C2C([H])([H])C([H])([H])[N+](C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])(C([H])([H])C3C([H])=C([H])C(=C([H])C=3[H])O[H])C2=C1[H])O[H]

ZKTMLINFIQCERN-QGZVFWFLSA-O

InChI=1S/C19H23NO3/c1-20(2)9-8-14-11-18(22)19(23-3)12-16(14)17(20)10-13-4-6-15(21)7-5-13/h4-7,11-12,17H,8-10H2,1-3H3,(H-,21,22)/p+1/t17-/m1/s1

(1R)-1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-7-methoxy-2,2-dimethyl-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-ium-6-ol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。