rat mGluR5 ( Ki = 0.67 nM )
Negative allosteric modulator (NAM) of the metabotropic glutamate receptor subtype 5 (mGluR5) (IC50 = 2.4 ± 0.3 nM in functional assay; Ki = 0.00067 ± 0.00001 µM for rat mGluR5 binding)
Off-target binding observed at Prostaglandin Thromboxane A2 receptor (TXA2) (Ki = 2.02 ± 0.85 µM) and peripheral Monoamine oxidase-B enzyme (MAO-B) (Ki = 0.77 ± 0.16 µM) [1]

与mGluR5相比，MFZ 10-7对MAO-B（单胺氧化酶-B酶）和TXA2（血栓烷A2受体）的亲和力分别低约1150倍和3000倍[1]。

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在使用稳定表达大鼠mGluR5的HEK293细胞进行的体外功能实验中，MFZ 10-7抑制了Gq蛋白介导的细胞内信使肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）的产生（通过IP1积累来测量）。其反向激动作用的IC50为2.4 ± 0.3 nM，效力分别约为MPEP、MTEP和fenobam的13倍、46倍和188倍 [1]。
在使用大鼠脑膜和[3H]MPEP进行的竞争性放射性配体结合实验中，MFZ 10-7对mGluR5表现出高结合亲和力，Ki为0.00067 ± 0.00001 µM，分别比MTEP和fenobam高约63倍和330倍 [1]。
针对64个功能性受体/酶蛋白的广泛筛选显示，MFZ 10-7（在10 µM浓度下）仅与两个脱靶位点结合：TXA2受体和外周MAO-B酶。随后的Ki测定证实了相对于mGluR5，其对这两个位点的亲和力较低（选择性比率：对MAO-B约1150倍，对TXA2约3000倍） [1]。

MFZ 10-7可降低蔗糖自我调节幅度但对总蔗糖摄入量没有影响[1]。

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在雄性Long-Evans大鼠中，腹腔注射MFZ 10-7（3和10 mg/kg）能够剂量依赖性地抑制由单一剂量（0.5 mg/kg/输注）可卡因在FR2程序下维持的静脉自我给药行为 [1]。
在多剂量可卡因自我给药实验（0.03-1.0 mg/kg/输注）中，腹腔注射MFZ 10-7（3和10 mg/kg）使可卡因剂量-反应曲线下移，显著减少了在较低可卡因剂量（0.06、0.125和0.25 mg/kg/输注）下的输注次数。这表明可卡因的奖赏效能降低 [1]。
预处理给予MFZ 10-7（3和10 mg/kg，腹腔注射）能剂量依赖性地抑制由可卡因点燃注射（10 mg/kg可卡因，腹腔注射）引发的、已熄灭的药物寻求行为的复燃 [1]。
预处理给予MFZ 10-7（3和10 mg/kg，腹腔注射）能剂量依赖性地抑制在强制戒断21天后评估的、由环境线索诱导的可卡因寻求行为（渴求孵化） [1]。
在口服蔗糖自我给药实验中，腹腔注射MFZ 10-7（10 mg/kg）显著降低了每小时蔗糖输送的速率，但并未改变在限时90分钟、上限100次的测试阶段中动物获得的蔗糖奖励总数 [1]。
与MTEP不同，预处理给予MFZ 10-7（3和10 mg/kg，腹腔注射）对由蔗糖点燃引发的蔗糖寻求行为复燃没有产生统计学上的显著抑制 [1]。
给予MFZ 10-7（3和10 mg/kg，腹腔注射）并未显著改变未接触过药物的（drug-naïve）大鼠的基础自发活动，表明其对药物寻求行为的影响并非源于镇静或运动功能损伤 [1]。

使用放射性配体竞争结合实验测定测试化合物对mGluR5的结合亲和力。从雄性Sprague-Dawley大鼠的全脑（去除小脑）制备膜蛋白。结合反应在室温下于含50 mM Tris、120 mM NaCl、5 mM KCl（pH 7.4）的缓冲液中进行60分钟。每个反应包含4 nM [3H]MPEP、7.5 mg脑组织（原始湿重）以及不同浓度的测试化合物。使用100 µM MPEP定义非特异性结合。通过快速过滤和冷缓冲液洗涤终止孵育。通过液体闪烁计数测量滤膜结合的放射性。Ki值通过至少三次独立实验中进行的三次重复全剂量反应曲线确定 [1]。
为评估脱靶活性，还测定了化合物对单胺氧化酶-B（MAO-B）和血栓素A2受体（TXA2）的结合亲和力。这些特定实验的详细步骤未在手稿中提供，但通过合同研究进行 [1]。

使用稳定表达大鼠mGluR5的HEK293细胞评估mGluR5 NAMs的体外功能效力（IC50）。该实验测量了化合物对Gq蛋白介导信号传导的激动剂非依赖性（反向激动）抑制。细胞与系列稀释的测试化合物（终浓度从10 pM到10 µM）在37°C下孵育1小时，孵育体系中含有LiCl以捕获肌醇磷酸盐。孵育后裂解细胞。使用竞争性免疫分析法（IP One ELISA）定量D-肌醇1磷酸（IP1，IP3的降解产物）的积累。该法使用抗IP1单克隆抗体和IP1-辣根过氧化物酶偶联物。测量光密度，各处理组的IP1水平均一化至仅含溶媒的对照值。IC50值根据至少三次独立实验计算 [1]。

For cocaine and sucrose self-administration studies, male Long-Evans rats were housed individually on a reverse light-dark cycle. For cocaine studies, rats were surgically implanted with an intravenous catheter into the right external jugular vein under anesthesia. Catheters were flushed daily with an antibiotic/heparin solution. Self-administration training and testing occurred in operant chambers. For cocaine, rats learned to press a lever for intravenous cocaine infusions (delivered over 4.65 sec) paired with a light+tone cue. Training progressed from FR1 to FR2 schedules until stable responding was achieved. For multi-dose testing, a session consisted of sequential components with different cocaine doses (0, 0.03, 0.06, 0.125, 0.25, 0.5, 1.0 mg/kg/infusion). For single-dose testing, sessions lasted 3 hours with a maximum of 50 infusions. Sucrose self-administration followed similar procedures, except no surgery was involved, and lever presses delivered 0.1 mL of 5% sucrose solution into a food tray along with the cue. Sucrose sessions were 90-min long and capped at 100 deliveries. Test compounds (MFZ 10-7 or MTEP) or vehicle were administered intraperitoneally 15 minutes prior to the start of a self-administration session [1].
For reinstatement experiments, after stable self-administration, animals underwent extinction training where lever presses no longer resulted in drug/sucrose or cue presentation. Extinction continued until seeking behavior was extinguished. On test days, animals were pretreated with vehicle or test compound (i.p.) and then given a non-contingent "priming" injection of cocaine (10 mg/kg, i.p.) or non-contingent deliveries of sucrose (x5) to trigger reinstatement. Animals were then placed back into the operant chamber, and lever presses (under extinction conditions) were recorded for a set period [1].
For the incubation of craving (cue-induced seeking) experiment, after stable cocaine self-administration, rats underwent 21 days of forced abstinence in their home cages. On test days, they were pretreated with vehicle or test compound (i.p.) and then placed into the former self-administration context. Lever presses (under extinction conditions, with no drug or discrete cues available) were recorded for 3 hours as a measure of cue-induced seeking [1].
For locomotor activity tests, drug-naïve rats were habituated to locomotor chambers. Baseline activity was recorded for 1 hour before i.p. injection of vehicle or test compound. Locomotor activity (distance traveled) was then recorded for an additional 3 hours [1].
MFZ 10-7 was suspended in 1% Tween 80 and water for intraperitoneal administration in all behavioral experiments [1].

[1]. A novel mGluR5 antagonist, MFZ 10-7, inhibits cocaine-taking and cocaine-seeking behavior in rats. Addict Biol.

MFZ 10-7（3-氟-5-((6-甲基吡啶-2-基)乙炔基)苯甲腈）是一种新型、高效且选择性的mGluR5受体负变构调节剂(NAM)。它是作为MPEP的类似物开发的，旨在克服早期mGluR5 NAM（如MPEP和MTEP）的脱靶效应和半衰期短等限制其转化应用潜力的问题[1]。
该研究提供了支持mGluR5在可卡因奖赏和复吸中发挥作用的证据。 MFZ 10-7在减轻大鼠可卡因摄入、觅药行为和线索诱发的渴求方面具有显著疗效，且不抑制一般的运动功能，这表明mGluR5仍然是成瘾药物研发的一个可行靶点[1]。
与MTEP相比，MFZ 10-7在选择性抑制可卡因觅药行为方面显示出更宽的治疗窗口，因为在有效抑制可卡因觅药行为的剂量下，它未能显著减弱蔗糖诱发的复吸行为[1]。
作者认为，MFZ 10-7可作为一种有价值的新型体外和体内工具化合物，用于进一步研究mGluR5在成瘾及相关疾病中的作用[1]。

C15H9FN2

236.24

236.075

1224431-15-5

MFZ 10-7 hydrochloride; 1779796-36-9

90488944

Light yellow to yellow solid powder

2.8

36.68

1

3

2

19

397

0

WRHOKQFFLQKKNL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H9FN2.ClH/c1-11-3-2-4-15(18-11)6-5-12-7-13(10-17)9-14(16)8-12;/h2-4,7-9H,1H3;1H

3-fluoro-5-[2-(6-methylpyridin-2-yl)ethynyl]benzonitrile;hydrochloride

MFZ 10-7; MFZ10-7

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~17.9 mg/mL (~75.6 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。