MRK-016 HCl

EC50: 3 nM (GABAA α5)[1] Ki: 0.83 nM (Human GABAA α1β3γ2), 0.85 nM (Human GABAA α2β3γ2), 0.77 nM (Human GABAA α3β3γ2), 1.4 nM (Human GABAA α5β3γ2)[1]

mk-016 的市场 α5 的 ec50 为 3 nm，人权 α1β3η2、营销 α3β3η2、市场 α3β3γ22 和市场 α5β3γ2 的 kis 分别为 0.83、0.85、0.77 和 1.4 NM，mk-016 是一种选择性口服生物利用度 Verse 激动剂市场α5受体。作为 α5 亚型的完全反向激动剂，MRK-016 对 GABAA α4β3γ2 亚型表现出非常低的亲和力 (Ki 395 ± 173 nM)，并且对 GABAA α6β3γ2 受体 (Ki > 4000 nM) 基本上没有活性。 1]在 400 nM 时，MRK-016 对 α4β3γ2 市场的影响可以忽略不计。在小鼠海马切片中，MRK-016 (100 nM) alao 增强了长时程增强作用[2]。

在小鼠体内，连续 20 天，口服 30 mg/kg 剂量的 MRK-016 没有引起癫痫发作，也没有使 ip 注射 10 mg/kg 戊四唑引起的惊厥恶化。在大鼠中，当 MRK-016 占据超过 95% 的苯二氮卓类 (BZ) 结合位点的剂量时，MRK-016 并未表现出明显的类焦虑作用。在大鼠中，MRK-016（0.3、1 和 3 mg/kg，口服）剂量依赖性地增强海马依赖性记忆任务表现[1]。在大鼠中，MRK-016（0.3–30 mg/kg，口服）可产生出色的受体占据率。当以 0.3、1 或 3 mg/kg 口服剂量给药时，Morris 水迷宫的延迟匹配位置版本表现出认知增强活性。用 MRK -016（1、3 或 10 mg/kg ip）处理的小鼠不会产生引火物[2]。在小鼠中，MRK-016（3 mg/kg，腹膜内注射）可预防 LPS 引起的学习和记忆缺陷[3]。

化合物13（MRK-016）在所有四种BZ敏感的GABAA受体亚型上具有高的体外结合亲和力32，范围为0.8至1.4 nM。它对GABAAα4β3γ2亚型的亲和力非常弱（Ki 395±173 nM），对GABAAα6β3γ2中受体基本无活性（Ki>4000 nM）。此外，在147次放射性配体结合和酶测定中检测时，3313没有显示出明显的脱靶活性（IC50值>10μM）。表1所示的疗效值是使用稳定表达人GABAA受体亚型的小鼠成纤维细胞的全细胞膜片钳记录34确定的。32体外疗效是通过使用次最大（EC20）GABA浓度对GABA诱发电流的最大调制百分比来测量的。正值表示GABA诱导电流的增强（激动剂），而负值表示衰减（反向激动剂）。将13的值与临床化合物5、非选择性完全反向激动剂2、9和非选择性完全激动剂氯氮卓（CDZ；14）进行比较。13是α5-亚型的完全反向激动剂，对α1-、α2-和α3-亚型具有功能选择性。在表达α5β3γ2亚型的小鼠成纤维细胞L（tk-）中，13使GABA诱发电流衰减了55%（疗效=-55%），这与完全反向激动剂2基本相同（疗效=-157%），并且大于5产生的电流（疗效=-40%）。相比之下，α1-、α2-和α3-亚型的疗效要低得多，分别为-16%、+6%和-9%的疗效值在弱部分反向激动剂或拮抗剂的范围内。13在α1-和α3-亚型上的疗效与5的记录相当；而α2亚型13基本上是拮抗剂（疗效=+6%），5表现出部分激动作用（疗效=+16%）。事实上，在我们寻找一种在α5亚型具有完全反向激动作用，在其他GABAA受体亚型具有很少功能活性的化合物的过程中，吡唑三嗪13与临床化合物5相比具有更令人印象深刻的疗效。α5-亚型的EC50值为13，为3.0 nM，这补充了其1.4 nM的体外结合亲和力[1]。

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3-叔丁基-7-（5-甲基异恶唑-3-基）-2-（1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基甲氧基）-吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪（MRK-016）是一种吡唑三嗪，对天然大鼠脑和重组人含α1-、α2-、α3-和α5-的GABAA受体的苯二氮卓结合位点的亲和力为0.8至1.5 nM。它对α5亚型具有选择性的反向激动作用，这种α5反向激动作用大于原型α5-选择性化合物3-（5-甲基异恶唑-3-基）-6-[（1-甲基-1,2,3-三唑-4-羟基）甲氧基]-1,2,4-三唑并[3,4-a]酞嗪（α5IA）。与其更大的α5反向激动作用一致，MRK-016在小鼠海马脑片中的长期增强作用比α5IA[2]更大。

Consistent with its greater α5 inverse agonism, MRK-016 increased long-term potentiation in mouse hippocampal slices to a greater extent than α5IA. MRK-016 gave good receptor occupancy after oral dosing in rats, with the dose required to produce 50% occupancy being 0.39 mg/kg and a corresponding rat plasma EC50 value of 15 ng/ml that was similar to the rhesus monkey plasma EC50 value of 21 ng/ml obtained using [11C]flumazenil positron emission tomography. In normal rats, MRK-016 enhanced cognitive performance in the delayed matching-to-position version of the Morris water maze but was not anxiogenic, and in mice it was not proconvulsant and did not produce kindling. MRK-016 had a short half-life in rat, dog, and rhesus monkey (0.3–0.5 h) but had a much lower rate of turnover in human compared with rat, dog, or rhesus monkey hepatocytes. Accordingly, in human, MRK-016 had a longer half-life than in preclinical species (∼3.5 h). Although it was well tolerated in young males, with a maximal tolerated single dose of 5 mg corresponding to an estimated occupancy in the region of 75%, MRK-016 was poorly tolerated in elderly subjects, even at a dose of 0.5 mg, which, along with its variable human pharmacokinetics, precluded its further development.[2]

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In this study, researchers tested the ability of the inverse benzodiazepine agonist, MRK-016 (MRK) to protect against LPS-induced deficits in memory acquisition and consolidation, using a contextual fear conditioning (CFC) paradigm. In Experiment One, mice received lipopolysaccharide (LPS) and/or MRK injections prior to CFC training, and were then tested 24h after training. In Experiment Two, animals received similar treatment injections immediately after training, and were tested 24h later. Additionally, hippocampal samples were collected 4h after LPS injections and immediately after testing, to evaluate brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and insulin-like growth factor 1 (IGF-1) mRNA expression. Results indicate that MRK can protect against LPS-induced learning/memory decrements in both paradigms. We also found, in both paradigms, that animals treated with LPS/Saline expressed significantly less BDNF mRNA when compared to Saline/Saline-treated animals 4h after LPS administration, but that MRK did not restore BDNF expression levels. Further, treatment administrations had no effect on IGF-1 mRNA expression at any collection time-point. In summary, MRK-016 can protect against LPS-induced deficits in memory acquisition and consolidation, in this hippocampus-dependent paradigm, though this protection occurs independently of recovery of BDNF expression.[3]

[1]. Chambers MS, et al. An orally bioavailable, functionally selective inverse agonist at the benzodiazepine site of GABAA alpha5 receptors with cognition enhancing properties. J Med Chem. 2004 Nov 18;47(24):5829-32.
[2]. Atack JR, et al. In vitro and in vivo properties of 3-tert-butyl-7-(5-methylisoxazol-3-yl)-2-(1-methyl-1H-1,2,4-triazol-5-ylmethoxy)-pyrazolo[1,5-d]-[1,2,4]triazine (MRK-016), a GABAA receptor alpha5 subtype-selective inverse agonist. J Pharmacol Exp Ther. 2009 Nov;331(2):470-84.
[3]. Eimerbrink MJ, et al. Administration of the inverse benzodiazepine agonist MRK-016 rescues acquisition and memory consolidation following peripheral administration of bacterial endotoxin. Behav Brain Res. 2015 Jul 15;288:50-3

C17H20N8O2-HCL

405

368.171

C, 55.43; H, 5.47; N, 30.42; O, 8.69

783331-24-8

6918583

White to off-white solid powder

2.092

109.05

0

8

5

27

518

0

CN1N=CN=C1COC1=NN2C(C3=NOC(C)=C3)=NN=CC2=C1C(C)(C)C

QYSYOGCIDRANAR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H20N8O2/c1-10-6-11(23-27-10)15-21-19-7-12-14(17(2,3)4)16(22-25(12)15)26-8-13-18-9-20-24(13)5/h6-7,9H,8H2,1-5H3

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。