| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5641μg(100mM*100μL in water) |
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| 28205μg(100mM*500μL in water) |
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| 11282μg(100mM*200μL in water) |
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| 56411μg(100mM*1mL in water) |
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| 靶点 |
Nucleobase-modified nucleotide for synthesis of mRNA
N1-Methylpseudouridine-5′-triphosphate targets RNA polymerases, serving as a substrate for incorporation into mRNA during in vitro transcription using T7 RNA polymerase. Once incorporated into mRNA, N1-methylpseudouridine replaces uridine and modifies the molecular properties of the RNA. This modification reduces the activation of Toll-like receptors (TLRs) and other innate immune sensors, thereby decreasing the immunogenicity of the mRNA. The compound also enhances mRNA stability and translational efficiency, improving protein expression from the mRNA. Its ability to modulate the immune recognition of mRNA makes it a valuable tool for developing mRNA-based therapeutics and vaccines. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
信使RNA（mRNA）作为一种治疗手段，在基因治疗领域正日益受到关注。人们认识到核碱基修饰能够显著增强mRNA的特性，例如降低其免疫原性并提高RNA分子的稳定性（Kariko范式），这一认识是推动基因治疗革命的关键。本研究发现，单独或联合使用N(1)-甲基假尿苷（m1Ψ）修饰和/或与5-甲基胞苷（m5C）修饰的mRNA，在转染细胞系或小鼠后，其报告基因表达水平分别比目前最先进的假尿苷（Ψ）和/或m5C/Ψ修饰的mRNA平台高出约44倍（与双修饰mRNA相比）或约13倍（与单修饰mRNA相比）。研究人员发现，与(m5C/)Ψ修饰的mRNA相比，(m5C/)m1Ψ修饰的mRNA在体外转染后可降低细胞内固有免疫原性并提高细胞活力。(m5C/)m1Ψ修饰的mRNA表达蛋白质能力的增强可能至少部分归因于其逃避内体Toll样受体3 (TLR3)激活和下游固有免疫信号传导的能力增强。据信，本文提出的(m5C/)m1Ψ-mRNA平台有望成为修饰mRNA疗法领域的新标准[1]。
在体外，N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸被用作T7 RNA聚合酶催化的体外转录反应的底物。修饰的核苷酸被掺入mRNA转录本中，取代尿苷。经修饰的mRNA在细胞实验中显示出免疫原性降低，表现为TLR激活减少和I型干扰素等促炎细胞因子生成减少。与未修饰的mRNA相比，修饰的mRNA还表现出更高的稳定性和翻译效率，从而导致更高的蛋白质表达水平。该化合物的活性通常通过检测转染修饰mRNA的细胞中报告基因的表达、细胞因子的产生和细胞活力来评估。详细的质量控制数据可从商业供应商处获取。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸酯用于生产基于mRNA的疫苗和治疗药物。含有这种修饰核苷酸的mRNA已被证明能在动物模型和人体中诱导强烈的免疫反应，并降低不良反应。这种修饰降低了mRNA的免疫原性，从而实现了更高且更持久的蛋白质表达。这对于COVID-19 mRNA疫苗的研发至关重要，这些疫苗通过引入N1-甲基假尿苷来提高疗效和安全性。该化合物的体内疗效通常通过测量动物模型中的抗原特异性抗体反应、T细胞反应以及对感染性病原体的保护作用来评估。该化合物不直接给药，而是用于mRNA治疗药物的生产。
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| 酶活实验 |
体外mRNA脂质体转染和萤火虫荧光素酶活性检测[1]
将mRNA与Lipo 2 K按1:2的比例（μg mRNA: μl Lipo 2 K）混合于Opti-MEM I培养基中。室温下孵育30分钟使复合物形成。使用Zetasizer Nano ZS，通过动态光散射和激光多普勒电泳测定RNA/脂质复合物的平均流体动力学尺寸和zeta电位，方法如前所述。将1 μg复合物化的mRNA加入预先接种于24孔板的细胞中进行转染。4小时后，移除复合物和Opti-MEM I培养基，并更换为含血清的ATCC推荐培养基。转染24小时后，用100 μl 1×被动裂解缓冲液裂解细胞，并根据制造商的说明书使用萤火虫荧光素酶检测试剂盒测定萤火虫荧光素酶活性。使用 GloMax 发光仪测量生物发光。 酶联免疫吸附试验 (ELISA)[1] 除非另有说明，否则在 mRNA 转染 24 小时后收集细胞培养上清液，并储存在 -80 °C 直至进行 ELISA 检测。人干扰素-β (IFN-β) 和趋化因子 (C-C 基序) 配体 5 (CCL5；也称为 RANTES) 的 ELISA 试剂盒分别购自 BioLegend 和 Life Technologies。ELISA 检测按照制造商的建议进行，如前所述。 蛋白质浓度测定[1] 使用 Pierce™ Micro BCA™ 蛋白质测定试剂盒测定细胞裂解液的蛋白质浓度。使用被动裂解缓冲液裂解细胞后，按照制造商的标准操作流程进行后续步骤，并将裂解液用水稀释（1:10）。 N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸的体外转录实验通常使用编码报告基因或抗原的模板DNA、T7 RNA聚合酶以及包含ATP、GTP、CTP和修饰的UTP的NTP混合物。反应在合适的缓冲液中于37°C下进行2-4小时。所得mRNA经纯化后，通过琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳分析其完整性和产量。修饰核苷酸的掺入效率通过质谱分析或酶解后进行HPLC分析来评估。对于功能性实验，使用脂质体转染试剂将修饰的mRNA转染到细胞中，并通过Western印迹、ELISA或流式细胞术检测蛋白质表达。免疫原性是通过测量报告细胞系中的细胞因子产生或 TLR 激活来评估的。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
如上所述，将哺乳动物细胞用1 μg未修饰或修饰的RNA转染至24孔板中。转染24小时后，根据制造商的方案，使用MTT增殖试验检测mRNA转染细胞的活力。 TLR3免疫染色和流式细胞术[1] mRNA转染24小时后，收集细胞，用不含钙镁的磷酸盐缓冲液（DPBS，不含钙镁）洗涤，并在室温下用1×固定缓冲液孵育1小时。固定后的细胞用1×透化缓冲液洗涤两次，重悬于1×透化缓冲液中，并在黑暗中与藻红蛋白（PE）标记的抗TLR3抗体孵育30分钟。然后用PBS洗涤细胞两次以去除任何未结合的抗体，并重悬于PBS中。使用 BD Accuri™ C6 流式细胞仪通过流式细胞术测量荧光信号。数据采用 CFlow Plus 分析软件进行分析。活细胞根据前向/侧向散射面积设门，单细胞根据前向散射宽度设门。PE 染料的平均荧光强度 (MFI)（激发激光：488 nm，发射滤光片：585/40 nm）基于活单细胞群体计算。 对于体外细胞实验，将含有不同浓度（通常为 0.1 至 10 µg/mL）的 N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸的 mRNA 转染至 HEK293T、HeLa 或树突状细胞等细胞中。转染后 6-48 小时，通过蛋白质印迹、ELISA 或流式细胞术评估蛋白质表达。通过ELISA或qRT-PCR检测I型干扰素（IFN-α、IFN-β）和促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）的产生来评估免疫原性。使用TLR报告基因细胞系检测TLR激活。使用MTT或CellTiter-Glo法评估细胞活力。作为对照，细胞也转染了含有尿苷的未修饰mRNA。所有实验均包含适当的对照（未修饰mRNA、载体），并重复三次。 |
| 动物实验 |
小鼠实验[1]
7周龄Balb/c小鼠饲养于独立通风笼中，光照周期为12:12小时（暗/光）。小鼠可自由摄取食物和水。在皮内（id）或肌肉内（im）注射过程中，使用异氟烷持续麻醉小鼠。将20 μg mRNA与Lipo 2 K以1:1（μg mRNA: μl Lipo 2 K）的比例混合，并重悬于PBS缓冲液中，然后皮内或肌肉注射至胫前肌。 萤火虫荧光素酶表达的体内成像[1] 使用体内生物发光成像系统IVIS Lumina II，测量小鼠体内萤火虫荧光素酶的表达水平，直至注射的mRNA信号达到背景水平。小鼠腹腔注射（ip）50 mg/kg D-荧光素，注射后10分钟测量生物发光强度。采集参数设置为：光圈：1，像素合并：8，自动曝光。 在体内疗效研究中，使用动物模型评估含有N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸的mRNA疫苗的免疫原性和保护效力。小鼠或非人灵长类动物接种编码SARS-CoV-2刺突蛋白或流感血凝素等抗原的mRNA-LNP（脂质纳米颗粒）制剂。mRNA通过肌内或皮内注射给药，剂量范围为每只动物1至100 µg。通过ELISA检测抗原特异性抗体反应，并通过噬斑减少中和试验或假病毒中和试验评估中和抗体滴度。 T细胞反应通过ELISpot或细胞内细胞因子染色进行评估。对感染性病原体攻击的保护作用通过测量病毒载量和存活率进行评估。所有动物实验均按照机构指南进行。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸酯的药代动力学特性通常不作为直接治疗药物进行评估，因为它是一种用于mRNA合成的核苷酸底物。一旦被整合到mRNA中并制成脂质纳米颗粒，mRNA-LNP制剂的药代动力学特性就取决于纳米颗粒的特性，而非核苷酸本身。肌内注射或静脉注射后，mRNA会分布到包括肝脏、脾脏和淋巴结在内的组织中。mRNA在细胞质中翻译成蛋白质，最终被细胞核酸酶降解。随着mRNA的清除，修饰后的核苷酸本身不会在体内持续存在。该化合物仅供研究使用，不得直接用于患者。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸的毒理学研究主要集中在mRNA脂质纳米颗粒（mRNA-LNP）制剂领域。由于该修饰核苷酸本身是一种天然存在的修饰核苷，因此被认为毒性较低。在含有N1-甲基假尿苷的mRNA-LNP制剂的临床前毒理学研究中，这些制剂显示出良好的安全性，在治疗剂量下未观察到显著不良反应。局部注射部位反应和短暂的炎症反应可能出现，这与mRNA疫苗的药理活性相符。该化合物不具有遗传毒性或致癌性。含N1-甲基假尿苷的mRNA的安全性已在COVID-19疫苗的临床试验中得到广泛评估，并支持其在mRNA疗法中的应用。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸是一种修饰核苷酸，用于合成治疗药物和疫苗研发所需的mRNA。该核苷酸的引入可降低mRNA的免疫原性，并提高其稳定性和翻译效率。它是基于mRNA的COVID-19疫苗的关键成分。该化合物本身并未获批作为治疗药物，而是用作mRNA治疗药物生产的原料。它以高纯度（≥99%）的科研试剂形式提供，可用于科研和生产。
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| 分子式 |
C10H17N2O15P3
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|---|---|
| 分子量 |
498.1677
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| 精确质量 |
497.984
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| CAS号 |
1428903-59-6
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| 相关CAS号 |
N1-Methylpseudouridine;13860-38-3;N1-Methylpseudouridine-5′-triphosphate trisodium;N1-Methylpseudouridine-5′-triphosphate tetralithium
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| PubChem CID |
90456815
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| 序列 |
RNA1{[*P(=O)(O)OP(=O)(O)OP(=O)(O)O |$_R2;;;;;;;;;;;;|]R([*c1cn(c(=O)[nH]c1=O)C |$_R1;;;;;;;;;$|])}$$$$
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| 短序列 |
P-P-P-m1Yra-Ribf
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| 外观&性状 |
Colorless to light yellow liquid
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| 密度 |
2.010±0.06 g/cm3
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| LogP |
-6.5
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| tPSA |
259
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
7
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
15
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
884
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
P(=O)(O[H])(OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O[H])OC([H])([H])C1([H])C([H])(C([H])(C([H])(C2C(N([H])C(N(C([H])([H])[H])C=2[H])=O)=O)O1)O[H])O[H]
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| InChi Key |
OLRONOIBERDKRE-XUTVFYLZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C10H17N2O15P3/c1-12-2-4(9(15)11-10(12)16)8-7(14)6(13)5(25-8)3-24-29(20,21)27-30(22,23)26-28(17,18)19/h2,5-8,13-14H,3H2,1H3,(H,20,21)(H,22,23)(H,11,15,16)(H2,17,18,19)/t5-,6-,7-,8+/m1/s1
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| 化学名 |
[[(2R,3S,4R,5S)-3,4-dihydroxy-5-(1-methyl-2,4-dioxopyrimidin-5-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate
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| 别名 |
n1-methylpseudouridine-5'-triphosphate; 1428903-59-6; 1-Methylpseudouridine-5'-triphosphate; N1-.Pseudo.utp; 5ENC36P33M; N1-Methylpseudouridine-5 inverted exclamation marka-triphosphate; ((2R,3S,4R,5S)-3,4-Dihydroxy-5-(1-methyl-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahydropyrimidin-5-yl)tetrahydrofuran-2-yl)methyl tetrahydrogen triphosphate; 1-Methylpseudo-UTP;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0073 mL | 10.0367 mL | 20.0735 mL | |
| 5 mM | 0.4015 mL | 2.0073 mL | 4.0147 mL | |
| 10 mM | 0.2007 mL | 1.0037 mL | 2.0073 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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