Ochratoxin A Racemate   中文名称: 曲霉素A

Mycotoxin

赭曲霉毒素A（OTA）是一种普遍存在的真菌代谢产物，具有致肾、致癌和致畸作用。流行病学研究表明，OTA可能参与不同形式的人类肾病的发病机制。之前我们已经证明，OTA在C7克隆中激活了细胞外信号调节激酶1和2，它们是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族的成员，但在肾上皮Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞的C11克隆中没有激活。在这里，我们表明，纳摩尔浓度的OTA导致MAPK家族第二个成员的激活，即MDCK-C7细胞中的c-jun氨基末端激酶（JNK），但在MDCK-C11细胞中几乎没有激活，如激酶测定和蛋白质印迹所确定的。此外，OTA增强了肿瘤坏死因子α对JNK活化的影响。与对JNK的影响并行，纳摩尔OTA在MDCK-C7细胞中诱导了凋亡，但在MDCK-C11细胞中没有诱导凋亡，这是通过DNA断裂、DNA梯状结构和胱天蛋白酶激活来确定的。此外，OTA增强了肿瘤坏死因子α的促凋亡作用。我们的数据提供了额外的证据，表明在没有观察到急性毒性作用的浓度下，OTA以细胞类型特异性的方式与MAPK家族的不同成员相互作用。通过JNK途径诱导细胞凋亡可以解释OTA诱导的肾功能变化及其部分致畸作用[3]。

钙稳态的破坏导致细胞质钙水平的持续升高，这与不同细胞类型对各种试剂的细胞毒性反应有关。我们观察到，对大鼠施用单次高剂量或多次低剂量的致癌肾毒素赭曲霉毒素a/ochratoxin A（OTA）会导致肾皮质内质网ATP依赖性钙泵活性的增加。增加非常迅速，在OTA给药后10分钟内明显，此后至少6小时内保持升高。钙泵活性的增加与之前的观察结果不一致，即OTA会增强体内脂质过氧化（乙烷呼气），这是一种已知会抑制钙泵的情况。然而，由于丙二醛和各种抗氧化酶（包括过氧化氢酶、DT黄递酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽S-转移酶）的水平没有改变或降低，因此肾皮质中没有观察到脂质过氧化增强的证据。在体外研究中，在钙摄取过程中向皮质微粒体中添加OTA会抑制摄取过程，尽管这种作用是可逆的。微粒体与NADPH的预孵育对钙摄取有显著的抑制作用，但OTA的加入能够逆转这种抑制作用。微粒体钙摄取速率的变化与磷酸化Mg2+/Ca（2+）-ATP酶中间体稳态水平的变化相关，表明体内/体外条件正在影响酶磷酸化速率[4]。

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本研究使用免疫亲和柱净化和高效液相色谱荧光检测（IAC-LC-FLD）评估了发酵乳清（FW）和南瓜（P）对大鼠黄曲霉毒素B1（AFB1）和赭曲霉毒素A/ochratoxin A（OTA）排泄的影响。该方法实现了AFB1和OTA的检测限分别为0.1µg/kg和0.3µg/kg，AFB1的回收率为72-92%，OTA的回收率在88-98%之间。对100只大鼠的粪便分析显示，AFB1的峰值浓度为418µg/kg，OTA为1729µg/kg。在毒素暴露组中，OTA水平高于AFB1，仅OTA组的雄性大鼠OTA（1729±712µg/kg）明显高于雌性大鼠（933±512µg/kg）。在仅AFB1组中，雄性粪便水平为52±61µg/kg，雌性为91±77µg/kg。AFB1+FW组显示出显著的AFB1浓度（雄性211±51µg/kg，雌性230±36µg/kg）。FW+P组合进一步影响排泄，AFB1和OTA水平较高。这些发现表明，FW和P调节霉菌毒素排泄，可能在霉菌毒素解毒中发挥作用，为减少霉菌毒素暴露及其有害影响的饮食策略提供了见解[6]。

Caspase-3活性测定[5]
根据文献17进行测定，将16个细胞接种在24孔板中（2×104个细胞/孔）。毒素孵育后，用冷PBS缓冲液洗涤细胞，并在冰上用100μL细胞裂解缓冲液（10 mM TRIS、100 mM NaCl、1 mM EDTA、0.1%Triton X-100，pH 7.5）孵育15分钟。细胞裂解物在4°C下以7000g离心10分钟。将50微升上清液与含有8μM荧光半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3底物（Ac-Asp-Glu-Val-Asp-7-氨基-4-三氟甲基香豆素，DEVD-AFC）的50μL反应缓冲液（50 mM PIPES，10 mM EDTA，0.5%CHAPS，10 mM DTT）在37°C下孵育1小时。用酶标仪测量蛋白水解切割释放的7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）的荧光（激发：λ=400 nm；发射：λ=505 nm）。使用AFC标准品对释放的AFC浓度进行定量以进行校准，并将其归一化为每个样品中的细胞蛋白含量。使用牛血清白蛋白（BSA）作为校准标准，用双辛可宁酸测定法测定蛋白质浓度。

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乳酸脱氢酶释放试验[5]
根据文献进行测定。18个细胞接种在24孔板中（2×104个细胞/孔）。毒素孵育后，用冷PBS缓冲液洗涤细胞，并在冰上用100μL细胞裂解缓冲液（10 mM TRIS、100 mM NaCl、1 mM EDTA、1%Triton X-100，pH 7.5）孵育15分钟。细胞裂解物在4°C下以7000g离心10分钟。细胞裂解物和细胞培养基的一致样品用反应缓冲液（2μM NADH、10 mM丙酮酸盐、100 mM HEPES，pH 7.0）孵育。每2分钟测量一次λ=340 nm处NADH相关吸收的减少，以使用带温度控制的微孔板读数器在37°C下监测酶反应60分钟的动力学参数。因此，计算每个样本的总细胞乳酸脱氢酶（LDH）酶和释放的LDH的量，并将其归一化为阳性和阴性对照。

细胞毒性试验[5]
根据文献和制造商的说明，使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）比色法评估了ochratoxin A/赭曲霉毒素A衍生物的细胞毒性。简而言之，将细胞接种在96孔微孔板上（4×103个细胞/孔）。毒素暴露后，将染料溶液（WST-8）加入细胞中，然后在37°C下孵育1小时。活细胞的细胞脱氢酶对WST-8染料的还原增加了λ=450nm处的吸光度，并用酶标仪进行了测量。毒素处理细胞的结果被标准化为未处理阴性对照的值。

体内研究设计[6]
本研究基于Vila-Donat等人建立的实验框架，探讨生物活性膳食成分对Wistar大鼠尿液中黄曲霉毒素B1 (AFB1) 和赭曲霉毒素A/OTA排泄的影响。实验动物饲养于标准实验室条件下（温度、湿度和12小时光照/黑暗循环均受控），并可自由摄取水和指定饲料。整个实验过程严格遵守动物福利伦理准则。

本研究共纳入120只大鼠（60只雄性，60只雌性），分为12组，每组饲喂定制饲料。饲料包括对照饲料和分别被AFB1和赭曲霉毒素A/OTA污染的饲料，后者使用接种了产毒素真菌（AFB1用黄曲霉，OTA用斯氏曲霉）的谷物制备。此外，在特定日粮中添加了生物活性膳食成分，例如 1% 的磷和 1% 的鲜重，以评估其对真菌毒素粪便排泄的影响。

在为期 28 天的研究期间，定期收集粪便样本，以测量黄曲霉毒素 B1 (AFB1) 和赭曲霉毒素 A/OTA 的水平，从而评估膳食干预对真菌毒素清除的影响。饲料中的真菌毒素定量采用液相色谱-荧光检测法 (LSE) 和液相色谱-荧光检测法 (LC-FLD) 进行。详细的实验步骤，包括饲料制备配方和饲料中真菌毒素的具体浓度，已在 Vila-Donat 等人的研究中详细描述。

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从粪便中提取 AFB1 和赭曲霉毒素 A/OTA [6]
从粪便中提取真菌毒素采用 AflaOchra IAC 净化工艺，具体方法参见 Rodrigues 等人的描述。 （2019）并稍作修改。首先将粪便样品解冻并研磨均质，然后取1 g样品与20 mL 80%甲醇混合。将混合物在数字磁力搅拌器上搅拌45分钟，然后在4000 rpm下离心10分钟。之后，取2 mL上清液加入10 mL PBS缓冲液，并使用AflaOchra IAC对所得缓冲溶液进行纯化。萃取采用真空固相萃取（SPE）系统，该系统旨在从复杂基质中浓缩、纯化或分离分析物。主要组件包括玻璃腔室和废液容器、带鲁尔接头和密封件的位置盖、鲁尔接头、旋塞、导针、柱子、搁板、压力表和安装阀。该系统可容纳12或24个样品，确保高效、精确的样品制备。

色谱柱装置包括一个位于顶部的10 mL注射器、一个适配器和一个位于底部的旋塞，用于将流速调节至每秒1滴。将缓冲样品加载到这些色谱柱中。然后，清洗色谱柱，最后进行目标化合物的洗脱。使用1.5 mL甲醇和水（1:1，v/v）的混合溶液洗脱黄曲霉毒素B1 (AFB1) 和赭曲霉毒素A/OTA，并将洗脱液收集在玻璃小瓶中。洗脱后，使用玻璃真空收集器向系统中通入空气，以确保所有残留的洗脱液从免疫亲和色谱柱 (IAC) 中完全去除。然后将提取的样品转移到小瓶中，并直接注入液相色谱-荧光检测 (LC-FLD) 系统，如下文所述（图4）。

吸收、分布和排泄
由于赭曲霉毒素A引起的猪真菌毒素肾病与巴尔干地方性肾病（BEN）在病理形态学上存在相似之处，因此有人提出，BEN的病原体可能相同。基于对猪进行的多项现场和实验研究结果，我们开发了一种合适的分析方法，用于监测人类可能接触赭曲霉毒素A的情况。该毒素的毒代动力学特性具有物种特异性，尽管在所有研究的动物物种（鱼类除外）以及人类中，血浆中均发现了两种结合蛋白。猴子的毒素消除半衰期最长，为510小时，而鱼类的消除半衰期仅为0.68小时。鱼类肾脏表现出特定的分布模式。在产蛋鹌鹑中，最显著的观察结果是标记的赭曲霉毒素A在蛋黄中积累。通常情况下，(14C)赭曲霉毒素A能迅速从鹌鹑体内清除，但在小鼠循环血液中停留时间较长。尽管赭曲霉毒素A的清除依赖于其与血浆成分的结合，但肠肝循环的存在可能部分导致了其在哺乳动物体内的长期滞留和清除。赭曲霉毒素A的毒代动力学特征与BEN病因学中的真菌毒素假说并不矛盾。PMID:1618443 Fuchs R, Hult K; Food Chem Toxicol 30 (3): 201-4 (1992)
赭曲霉毒素A在整个胃肠道内被迅速吸收，并以双室开放模型在体内分布，且对血清白蛋白具有特别高的亲和力。赭曲霉毒素A在肠道菌群的作用下水解为无毒化合物（7-羧基-5-氯-8-羟基-3,4-二氢-3R-甲基异香豆素（赭曲霉毒素α）和苯丙氨酸）。它以赭曲霉毒素A、羟基化赭曲霉毒素A或赭曲霉毒素α的形式经尿液和粪便排出体外。赭曲霉毒素A的毒性作用机制似乎是通过抑制氨基酰化反应，促进脂质过氧化水平升高，并可能通过转化为能够与DNA结合的代谢物发挥作用。这些代谢物反过来又会引起与赭曲霉毒素A相关的其他次级效应。由于其广泛存在且具有高度致癌性，这种化合物似乎对人类构成真正的潜在危害。PMID:2200593Marquardt RR et al;加拿大生理药理学杂志 68 (7): 991-9 (1990)
大鼠每日经气管插管给予 500 微克赭曲霉毒素 A，或每日喂食 250 微克赭曲霉毒素 A 于大麦中。肝脏或肾脏中化合物的积累很少。每日尿液和粪便中排出的总量平均略高于给药剂量的 10%。也有少量水解产物排出。VAN WALBEEK W 等；毒理学与应用药理学 20 (3): 439 (1971)
大鼠单次腹腔注射 1 毫克用¹⁴C 标记的赭曲霉毒素 A。30 分钟后，血清 (90%)、肝脏 (4.5%) 和肾脏 (4.4%) 中的浓度达到最高。赭曲霉毒素 A 主要以原形毒素或代谢物的形式经尿液排出。粪便排泄较少。PMID：892675 CHANG FC, CHU FS; FOOD COSMET TOXICOL 15 (3): 199 (1977)

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代谢/代谢物...赭曲霉毒素A在肠道菌群的作用下水解为无毒化合物（7-羧基-5-氯-8-羟基-3,4-二氢-3R-甲基异香豆素（赭曲霉毒素α）和苯丙氨酸）。它以赭曲霉毒素A、羟基化赭曲霉毒素A或赭曲霉毒素α的形式经尿液和粪便排出。...PMID：2200593 Marquardt RR等;加拿大生理药理学杂志 68 (7): 991-9 (1990)
从注射赭曲霉毒素 A 的大鼠尿液中分离并鉴定出羟基赭曲霉毒素 A。将赭曲霉毒素 A 与大鼠肝微粒体和 NADPH 孵育，生成 1 种主要代谢物 (90%) 和 2 种次要代谢物，其极性比赭曲霉毒素 A 更强。PMID:7396488全文：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC291461STORMER FC, PEDERSEN JI; 应用环境微生物学 39 (5): 971 (1980)
对健康成年大鼠单次口服或静脉注射 (2.5 mg/kg) 赭曲霉毒素 A。仅从盲肠和大肠中回收到赭曲霉毒素α代谢物。赭曲霉毒素A以游离药物和赭曲霉毒素α的形式经尿液和粪便排出。尿液中存在未鉴定的代谢物。PMID：43233 GALTIER P 等；DRUG METAB DISPOS 7 (6): 429 (1979)
赭曲霉毒素A在结肠微生物群、羧肽酶A和α-胰凝乳蛋白酶的作用下裂解为苯丙氨酸和毒性较低的异香豆素衍生物（赭曲霉毒素α）。国际癌症研究机构（IARC）。《人类致癌化学品风险评估专著》。日内瓦：世界卫生组织，国际癌症研究机构，1972年至今。（多卷本）。可获取：
赭曲霉毒素A在结肠微生物群、羧肽酶A和α-胰凝乳蛋白酶的作用下裂解为苯丙氨酸和毒性较低的异香豆素衍生物（α-赭曲霉毒素）。这是其主要的代谢途径。4-羟基赭曲霉毒素A是主要的肝脏代谢产物，其形成似乎是通过类似去甲异戊烯基喹啉的多态性4-羟基化作用。一些细胞色素P-450酶，例如CYP2C9，已知可将赭曲霉毒素A代谢为毒性更强的化合物。(T35, A2870, A3099)

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生物半衰期：妊娠ICR小鼠在妊娠第11或13天腹腔注射单次5 mg/kg赭曲霉毒素A (OA)。妊娠第11天血清中赭曲霉毒素A的半衰期计算为28.7小时，妊娠第13天为23.6小时。Fukui Y等；食品化学与毒理学25: 17-24 (1987)
在大鼠中……赭曲霉毒素A的血浆半衰期约为60小时……。国际癌症研究机构。《人类致癌化学品风险评估专著》。日内瓦：世界卫生组织，国际癌症研究机构，1972年至今。（多卷本）。可访问：https://monographs.iarc.fr/ENG/Classification/index.php，第17-24页。 V31 198 (1983)
以50 μg/kg体重口服赭曲霉毒素A后，其表观血浆消除半衰期在鱼类中为0.68小时，在大鼠中为120小时，在猴子中为510小时……国际癌症研究机构（IARC）。《人类致癌化学品风险评估专著》。日内瓦：世界卫生组织，国际癌症研究机构，1972年至今。（多卷本）。可访问：https://monographs.iarc.fr/ENG/Classification/index.php，第V56 499页 (1993)
赭曲霉毒素A在实验室啮齿动物和繁殖动物中的代谢情况已得到研究。在大鼠中，口服赭曲霉毒素A易于吸收，并在血浆中检测到相当数量的毒素，其最大浓度出现在给药后2-4小时。血浆浓度-时间曲线的药代动力学分析表明，该毒素分布于两个不同的体液隔室中。毒素的半衰期取决于剂量和动物种类，从鱼类的0.7小时到猴子的840小时不等。在血浆中，该毒素与白蛋白结合，如同许多酸性化合物一样。这种结合可被保泰松、乙基双香豆素乙酸酯和磺胺甲氧基哒嗪竞争性抑制，并且在白蛋白缺乏的大鼠中减弱。Galtier P; IARC Sci Publ (115): 187-200 (1991)
该毒素的毒代动力学特性具有物种特异性，尽管在所有研究的动物物种（鱼类除外）以及人类中，血浆中均发现了两种结合蛋白。猴子的毒素消除半衰期最长，为510小时，而鱼类的消除半衰期仅为0.68小时。鱼肾中赭曲霉毒素A的分布呈现出特定的模式。在产蛋鹌鹑中，最显著的观察结果是标记的赭曲霉毒素A在蛋黄中的积累。通常，¹⁴C-赭曲霉毒素A能迅速从鹌鹑体内清除，但在小鼠循环血液中停留时间较长。尽管赭曲霉毒素A的清除取决于其与血浆成分的结合，但肠肝循环的存在可能是其在哺乳动物体内长期滞留和清除的部分原因。赭曲霉毒素A的毒代动力学特征与BEN病因学中的真菌毒素假说并不矛盾。PMID:1618443Fuchs R, Hult K; Food Chem Toxicol 30 (3): 201-4 (1992)
代谢/代谢物
3s14s-赭曲霉毒素 a 已知的人类代谢物包括 2-[(5-氯-4,8-二羟基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢异色烯-7-羰基)氨基]-3-苯基丙酸。

毒性概述
赭曲霉毒素A已被证实具有弱致突变性，可能通过诱导氧化性DNA损伤发挥作用。肾毒素赭曲霉毒素A (OTA) 会导致肾小球滤过率 (GFR) 和对氨基马尿酸 (PAH) 清除率降低。它是一种肾毒素，可阻断Madin-Darby犬肾 (MDCK) 细胞的质膜阴离子传导。已知一些细胞色素P-450酶，例如CYP2C9，可将赭曲霉毒素A代谢为更具细胞毒性的化合物，这些化合物能够形成DNA加合物。 （A2869，A3099）

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致癌性证据
评估：尚无充分证据表明赭曲霉毒素A对人类具有致癌性。有充分证据表明赭曲霉毒素A对实验动物具有致癌性。总体评估：赭曲霉毒素A可能对人类具有致癌性（2B类）。

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毒性数据
LD50：20 mg/kg（口服，大鼠）（A716）LD50：12,600 ug/kg（腹腔注射，大鼠）（A716）LD50：12,750 ug/kg（静脉注射，大鼠）（A716）LD50：46 mg/kg（口服，小鼠）（A716）

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治疗
治疗以对症支持为主。 （A704）

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相互作用
……本研究考察了赭曲霉毒素A (OA) 的毒性以及补充抗坏血酸 (AA) 对两种环境温度下蛋鸡的影响。将24只蛋鸡随机分为两组，每组24只，共4个日粮处理组，每个处理组重复6次。处理组包括对照组和三个分别添加300 ppm AA、3 ppm OA或300 ppm AA加3 ppm OA的日粮组。在饲喂基础日粮14天后，再饲喂处理日粮14天。试验期间的温度为：第一组25℃，另一组33℃。……与饲喂对照组日粮的蛋鸡相比，饲喂3 ppm OA的蛋鸡采食量、体重变化和产蛋量均显著降低，蛋壳弹性增加。血浆成分分析表明，OA 还会增加氯离子浓度和天冬氨酸转氨酶活性，并降低血浆钙浓度。将母鸡暴露于 33°C（与 25°C 相比）似乎会加剧 OA 的负面影响。除体重变化、采食量减少和 33°C 下蛋壳弹性增加外，OA 的所有负面影响均可通过日粮中添加氨基酸 (AA) 而得到缓解或显著逆转。结果表明，日粮中添加氨基酸可以抵消蛋鸡日粮中 OA 的有害影响。Haazele FM 等；加拿大动物科学杂志 73 (1): 149-57 (1993)
新生大鼠口服艾氏剂后，肝脏中艾氏剂浓度在前 6 小时内升高，然后在 72 小时内下降至低于 0.1% 剂量。同时给予艾氏剂和赭曲霉毒素；艾氏剂浓度在最初6小时内升高，然后在18小时内降至初始剂量的0.4%。FARB RM等；农药环境：持续争议，PAP国际职业医学毒理学会议，第8届；179 (1973)
新生大鼠在服用艾氏剂2小时后检测到狄氏剂，18小时后狄氏剂浓度最高可达初始剂量的30%。同时给予艾氏剂和赭曲霉毒素；狄氏剂浓度从2小时时艾氏剂剂量的10%升高至24小时时最高可达50%。FARB RM等；农药环境：持续争议，PAP国际职业医学毒理学会议，第8届； 179 (1973)
虹鳟鱼饲喂含20微克/千克饲料的赭曲霉毒素A，以及环戊二酸，导致其发生肝癌（数量未说明）。国际癌症研究机构。《人类致癌化学物质风险评估专著》。日内瓦：世界卫生组织，国际癌症研究机构，1972年至今。（多卷本）。可访问：https://monographs.iarc.fr/ENG/Classification/index.php，第V10页。193 (1976)

[1]. Role of dopamine and selective dopamine receptor agonists on mouse ductus arteriosus tone and responsiveness. Pediatr Res. 2019 Dec 9.

[2]. First synthesis of a stable isotope of Ochratoxin A metabolite for a reliable detoxification monitoring. Org Lett. 2013 Aug 2;15(15):3888-90.

[3]. Ochratoxin A induces JNK activation and apoptosis in MDCK-C7 cells at nanomolar concentrations. J Pharmacol Exp Ther . 2000 Jun;293(3):837-44.

[4]. Alterations in ATP-dependent calcium uptake by rat renal cortex microsomes following ochratoxin A administration in vivo or addition in vitro. Biochem Pharmacol. 1992 Oct 6;44(7):1401-9.

[5]. Total synthesis and cytotoxicity evaluation of all ochratoxin A stereoisomers. Bioorg Med Chem. 2010 Jan 1;18(1):343-7.

[6]. Impact of Bioactive Ingredients on the Fecal Excretion of Aflatoxin B1 and Ochratoxin A in Wistar Rats. Molecules. 2025 Feb 1;30(3):647.

据报道，赭曲霉（Aspergillus ochraceus）中存在(R)N-(5-氯-3,4-二氢-8-羟基-3-甲基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃-7-基)苯丙氨酸。

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由于其毒性以及在多种食品中的存在，赭曲霉毒素A (OTA) 几十年来一直备受关注。本文总结了标记的赭曲霉毒素α (OTα) 类似物的首次合成，OTα是微生物代谢OTA的主要产物之一。该合成还得到了一种新的OTA标记类似物，其氘代基团位于二氢异香豆素部分，因此既可以对OTA和OTα进行精确定量，也可以建立可靠的解毒速率。[2]

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真菌毒素赭曲霉毒素A是一种强效的蛋白质生物合成抑制剂，已知在纳摩尔浓度下具有细胞毒性。为了研究该化合物的立体化学与细胞毒性之间的关系，我们合成了所有四种赭曲霉毒素A立体异构体。利用肝细胞系Hep G2，我们测试了这些化合物的细胞毒性和凋亡诱导能力。结果表明，分子中苯丙氨酸部分的L-构型是赭曲霉毒素A高细胞毒性的主要原因，而二氢异香豆素结构上的立体中心则相对不那么重要。[5]这项研究强调了P和FW等生物活性化合物在调节Wistar大鼠体内真菌毒素（特别是黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A）排泄方面的潜力。观察到的毒素生物利用度变化可能是由于吸收动力学的改变或排泄过程的增强所致，而这些过程可能由物理吸附或生化相互作用等机制驱动。虽然确切的途径仍有待阐明，但这些发现为将FW和P作为膳食干预手段来减轻真菌毒素暴露开辟了新的途径。需要开展进一步研究，以加深我们对这些机制的理解，并评估这些化合物在霉菌毒素解毒策略中的实际应用。展望未来，研究应探索这些膳食干预措施对肠道菌群的影响，因为微生物群落的变化可能会影响机体代谢和清除霉菌毒素的能力，从而降低其毒性作用。了解这些相互作用可能为改善动物健康和公共安全提供创新策略。总之，研究结果表明，包括使用生物活性成分在内的膳食调整可能为控制农业系统中的霉菌毒素污染提供有前景的解决方案，并可能成为保障食品生产和公众健康的关键策略。[6]

C20H18NO6CL

403.81302

407.107

C, 59.49 H, 4.49 Cl, 8.78 N, 3.47 O, 23.77

303-47-9

12313657

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

632.4±55.0 °C at 760 mmHg

336.3±31.5 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.628

Aspergillus ochraceus

4.31

113

3

6

5

28

608

2

C[C@@H]1CC2=C(C(O1)=O)C(O)=C(C(N[C@H](C(O)=O)CC3=CC=CC=C3)=O)C=C2Cl

RWQKHEORZBHNRI-GENIYJEYSA-N

InChI=1S/C20H18ClNO6/c1-10-7-12-14(21)9-13(17(23)16(12)20(27)28-10)18(24)22-15(19(25)26)8-11-5-3-2-4-6-11/h2-6,9-10,15,23H,7-8H2,1H3,(H,22,24)(H,25,26)/t10?,15-/m1/s1 SMILES Code

(R)-N-((5-Chloro-3,4-dihydro-8-hydroxy-3-methyl-1-oxo-1H-benzo(c)pyran-7-yl)carbonyl)-3-phenylalanine

Ochratoxin-A; Antibiotic 9663; Alanine, (-)-; 1448049-50-0; ((R)-5-chloro-8-hydroxy-3-(methyl-d3)-1-oxoisochromane-7-carbonyl-3-d)-L-phenylalanine; (R)N-(5-Chloro-3,4-dihydro-8-hydroxy-3-methyl-1-oxo-1H-2-benzopyran-7-yl)phenylalanine; WLN: T66 BVOT & J D1 GG IVMYVQ1R & JQ; NSC-201422; L-Phenylalanine,4-dihydro-8-hydroxy-3-methyl-1-oxo-1H-2-benzopyran-7-yl)carbonyl]-, (R)-; EX-A1468; EX-A-1468; EX-A 1468; EXA1468; EXA-1468; EXA 1468

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。