Ion channel

与良性组织相比，前列腺癌组织中的Palmitoylcarnitine/棕榈酰肉碱/palcar水平明显更高。与正常PNT1A细胞相比，高水平的palcar与癌性PC3细胞中促炎细胞因子IL-6的基因表达和分泌增加有关。此外，我们发现高水平的棕榈酰肉碱诱导PC3细胞中的Ca2+快速内流，但在DU145、BPH‐1或PNT1A细胞中没有。在DHT的反应中也观察到这种Ca2+内流模式。通过使用全基因组阵列，我们证明了暴露于palcar或DHT的PNT1A细胞具有类似的生物反应。
这项研究表明，棕榈酰肉碱/palcar可能通过其对（i）促炎途径、（ii）Ca2+内流和（iii）DHT样作用的影响，成为前列腺癌症进展的潜在媒介。需要进一步的研究来探索这类化合物在生理和病理水平上是否具有不同的生物功能[1]。

棕榈酰-l-肉碱（PC）或L-palmitoylcarnitine/l-棕榈酰肉碱是一种缺血性代谢产物，可导致细胞Na+和Ca2+超载和心脏功能障碍。本研究确定雷诺嗪[（±）-1-哌嗪乙酰胺，N-（2,6-二甲基苯基）-4-[2-羟基-3-（2-甲氧基苯氧基）丙基]-]是否能减弱PC诱导的Na+电流和离体心脏的心室收缩功能障碍。PC/L-棕榈酰肉碱/L-palmitoylcarnitine（4μM，30分钟）使豚鼠离体心室肌细胞的晚期Na+电流增加了1034±349%；雷诺嗪（10μM）和河豚毒素（TTX，3μM）显著减弱了PC的这种作用。PC增加了左心室舒张末期压（LVEDP）、冠状动脉灌注压（CPP）、壁僵硬以及离体心脏的乳酸和腺苷释放。雷诺嗪（10μM）显著降低了PC诱导的LVEDP增加72±6%（n=6，p<0.001），降低了左心室壁硬度，并将PC诱导的CPP增加减弱了53±10%（n=6-7，p<0.05）。雷诺嗪（10μM）分别将PC诱导的乳酸和腺苷释放增加减少了70±8%和81±5%（n=6，两者p≤0.05）。TTX（2μM）显著（p<0.05）降低了PC诱导的CPP和LVEDP的增加。用自由基清除剂替隆（4,5-二羟基-1,3-苯二磺酸二钠盐）（1 mM）预处理分离的心肌细胞或心脏，显著降低了PC对晚期Na+电流和LVEDP增加的影响，但与雷诺嗪或TTX不同，替隆没有逆转PC引起的晚期Na+电流和LVEDP的增加。总之，雷诺嗪和TTX作为晚期Na+流的抑制剂，减轻了PC诱导的豚鼠分离心脏的心室收缩功能障碍和冠状动脉阻力的增加 [2]。

WST-1存活率测定[1]
使用WST-1存活率测定法测定对棕榈酰肉碱/Palmitoylcarnitine/palcar的细胞存活率。PNT1A和PC3细胞接种在96孔培养板中，最终体积为100 μl/孔培养基，在加湿气氛（37°C，5%CO2）中培养。使细胞粘附在板表面36 用palcar（0-100μM）或载体对照（DMSO）处理24小时前 hr。每剂palcar测试六次。向每个孔中加入WST-1试剂（10μl）并孵育30分钟 在加湿气氛（37°C，5%CO2）中至少。通过扫描多孔分光光度计对代谢活性细胞产生的甲赞染料进行定量，在450℃下测量吸光度 通过微孔板ELISA阅读器检测nm。

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测量棕榈酰肉碱/Palmitoylcarnitine对IL-6的分泌反应[1]
PNT1A、PC3和LnCaP细胞在用palcar（0-100μM）或载体对照（DMSO）处理24小时前生长至70-80%融合 在37°C、5%CO2的加湿环境中，持续1小时。然后收集上清液，并在-20°C下适当储存，直至分析。按照制造商的说明，使用市售ELISA试剂盒定量IL-6水平。

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测量IL-6基因表达[1]
PNT1A和PC3细胞在用Palmitoylcarnitine/棕榈酰肉碱/palcar（0-100μM）或载体对照（DMSO）处理前生长至70-80%融合。治疗进行了24天 在37°C、5%CO2的加湿环境中，持续1小时。按照制造商的程序，使用RNeasy迷你试剂盒提取总RNA。使用RNA Nanodrop 1000测定RNA的数量和质量。所有样本的260/280比值为1.9-2.1。使用Applied Biosystems OneStep Plus实时RT-PCR系统在总体积为20μm的96孔光学平板上进行实时RT-PCR，测量IL-6基因表达 μl/孔，由TaqMan 1步RT-PCR主混合试剂盒组成，20 ng总RNA和IL-6引物和探针：IL-6前向序列[5′-CTCTTCAGAACGAATTGACAAACAAAT-3100 μM，反向序列5′‐ATGTTACTCTTGTTACATGTCTTCTTTCT‑3100 μM和探针5′-TACATCCTCGACGGCATCTCAGCCC-3′，100 μM].进行了30次逆转录 在48°C下至少，扩增Taq激活10 在95°C下进行40次PCR变性循环，持续15分钟 在60°C下退火/延伸1秒 min。反应进行三次，并对照内源性看家基因18进行标准化 S核糖体RNA。基于标准曲线法定量mRNA的量和基因表达。

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测量Ca2+内流[1]
将人前列腺细胞（PNT1A、BPH‐1、DU145、PC3）培养至70-80%融合，然后用胰蛋白酶收获。添加10%FBS的培养基中的细胞悬浮液在1500℃下离心 转速为3 在室温下保持min。将细胞沉淀重新悬浮在添加了10%FBS的培养基中，然后孵育1小时 在37°C和5%CO2下放置1小时。对细胞进行计数，FURA-2AM的最终浓度为250 将nM加入细胞悬浮液中（1× 106 细胞/ml）30 在37°C和5%CO2下的最低温度。洗涤后，将细胞（100μl）接种在底部透明的黑色96孔板中，并立即用赋形剂对照、组胺（0-20μM）、Palmitoylcarnitine/棕榈酰肉碱（0-50μM）或DHT（0-1μM）处理。在510处使用荧光板阅读器测量荧光动力学 nm（激发）和340和380 每10纳米（发射） 5秒间隔 最小Ca2+内流以荧光比表示。

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微阵列分析[1]
将PNT1A细胞培养至70-80%融合，然后用DMSO、Palmitoylcarnitine/棕榈酰肉碱（0-5μM）和DHT（10nM）处理8小时 在37°C和5%CO2下放置1小时。按照制造商的说明，使用RNeasy Mini试剂盒提取RNA。使用Nanodrop 1000分光光度计定量RNA。使用安捷伦生物分析仪分析RNA质量。按照Affymetrix方案，在诺丁汉拟南芥储备中心使用AffymetrixGeneChip人外显子1.0ST阵列进行基因表达谱分析。使用R/Bioconductor 32和aroma.affymetrix软件包33分析数据。数据经过稳健的多重平均（RMA）背景校正和分位数归一化。为了获得基因水平的总结，对数据应用了线性探针水平模型。为了进行注释，使用了aroma.affymetrix网站上提供的当前自定义CDF文件，其中包含核心探针集（18708个转录物簇；284258个探针集）。随后使用limma 34进行统计数据分析以鉴定差异表达的基因。在不同的Benjamini和Hochberg调整的P值下，基因被鉴定为差异表达。为了确定差异表达基因列表中最常见的通路，使用注释、可视化和综合发现数据库v6.7进行功能分析。

本研究旨在确定雷诺嗪[(+/-)-1-哌嗪乙酰胺，N-(2,6-二甲基苯基)-4-[2-羟基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-]是否能减弱L-棕榈酰肉碱(PC)诱导的离体心脏Na⁺电流和心室收缩功能障碍。PC/L-棕榈酰肉碱(4 μM，30 min)可使豚鼠离体心室肌细胞的晚期Na⁺电流增加1034 ± 349%；雷诺嗪(10 μM)和河豚毒素(TTX，3 μM)均能显著减弱PC的这种作用。 PC/L-棕榈酰肉碱可增加离体心脏的左心室舒张末期压力（LVEDP）、冠状动脉灌注压（CPP）、心室壁僵硬度以及心脏乳酸和腺苷的释放[2]。

小鼠皮下注射LD50 1 gm/kg Acta Biologica et Medica Germanica., 26(1237), 1971 [PMID:5153312]

[1]. Accumulation of Palmitoylcarnitine and Its Effect on Pro-Inflammatory Pathways and Calcium Influx in Prostate Cancer. Prostate. 2016 Oct;76(14):1326-37.

[2]. The Late Na+ Current (INa) Inhibitor Ranolazine Attenuates Effects of Palmitoyl-L-Carnitine to Increase Late INa and Cause Ventricular Diastolic Dysfunction. J Pharmacol Exp Ther. 2009 Aug;330(2):550-7.

总之，这些研究结果揭示了非癌性前列腺组织和癌性前列腺组织中palcar水平的显著差异，凸显了palcar谱分析作为前列腺癌相关代谢紊乱生物标志物的潜在应用价值。体外实验表明，高浓度的palcar与IL-6和Ca2+内流的诱导相关。后者在DHT刺激下也观察到。此外，全基因组芯片分析显示，与DHT类似，低水平的palcar与非癌性前列腺细胞中许多基因表达的改变相关。由于DHT是一种与前列腺生长相关的激素，palcar的DHT样作用可能提示palcar在诱导前列腺癌进展中发挥潜在作用。[1]

C23H46NO4+.CL-

436.06864

435.311

6865-14-1

28330-02-1; 2364-67-2; 6865-14-1; 18877-64-0; 1935-18-8

363417

White to off-white solid powder

2.564

63.6

1

5

20

29

404

0

CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CC(=O)[O-])C[N+](C)(C)C.Cl

GAMKNLFIHBMGQT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H45NO4.ClH/c1-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-18-23(27)28-21(19-22(25)26)20-24(2,3)4;/h21H,5-20H2,1-4H3;1H

(3-carboxy-2-hexadecanoyloxypropyl)-trimethylazanium;chloride

palmitoyl-dl-carnitine chloride; 6865-14-1; (+/-)-Palmitoylcarnitine chloride; Palmitoylcarnitine (chloride); Palmityl dl-carnitine chloride; 3-carboxy-n,n,n-trimethyl-2-(palmitoyloxy)propan-1-aminium chloride; Palmitoyl carnitine hydrochloride; Palmitoylcarnitine chlorid;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~50 mg/mL (~114.66 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。