| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
ALKL1196 (IC50 = 15-43 nM); ALKG1269A (IC50 = 14-80 nM); ALK1151Tins (IC50 = 38-50 nM); ALKG1202R (IC50 = 77-113 nM); ALKWT (IC50 <0.07 nM); ALKL1996M (IC50 = 0.6 nM); ALKG1269A (IC50 = 0.9 nM); ALK1151Tins (IC50 = 0.1 nM); ALKL1152R (IC50 <0.1 nM); ALKS1206Y (IC50 = 0.2 nM); ALKC1156Y (IC50 <0.1 nM); ALKF1174L (IC50 <0.1nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：PF-06463922 表现出针对 ALK 和大量 ALK 临床突变的显着细胞活性，IC50 范围为 0.2 nM-77 nM。 PF-06463922 显着抑制含有 SLC34A2-ROS1 融合的 HCC78 人 NSCLC 细胞和表达人 CD74-ROS1 的 BaF3-CD74-ROS1 细胞的细胞增殖并诱导细胞凋亡。 PF-06463922 还显示出有效的生长抑制活性，并诱导含有非突变 ALK 或突变 ALK 融合的 NSCLC 细胞凋亡。 激酶测定：重组人野生型和突变 ALK 激酶结构域蛋白（氨基酸 1093-1411）在-house使用杆状病毒表达，通过MgATP自磷酸化预激活，并使用微流体迁移率变化测定法测定激酶活性。反应含有 1.3 nM 野生型 ALK 或 0.5 nM 突变型 ALK（适合反应 1 小时后肽底物产生 15-20% 磷酸化）、3 μM 5-FAM-KKSRGDYMTMQIG-CONH2）、5 mM MgCl2 和25 mM Hepes（pH 7.1）中 ATP 的 Km 水平。动力学和晶体学研究显示该抑制剂具有 ATP 竞争性。 Ki 值是通过将转化率 (%) 拟合到竞争性抑制方程来计算的。 ROS1 酶的测定方法如上所述，但使用 0.25 nM 重组人 ROS1 催化结构域（氨基酸 1883-2347）。使用 206 激酶组评估激酶抑制剂的选择性。细胞测定：将细胞接种在含有 10% FBS 的生长培养基中的 96 孔板中，并在 37°C 下培养过夜。第二天，将连续稀释的 Lorlatinib 或适当的对照添加到指定孔中，并将细胞在 37°C 下孵育 72 小时。进行 CellTiter-Glo 测定以确定相对细胞数。 IC50值通过使用四参数分析方法的浓度-响应曲线拟合来计算。
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| 体内研究 (In Vivo) |
如前所述，LSL-FIG-ROS1；Cdkn2a−/−；LSL-Luc 小鼠通过颅内立体定向注射 Adeno-Cre 启动 GBM 肿瘤的从头发生。如下所述，使用 BLI 监测肿瘤发展。一旦肿瘤达到给定大小 (107 p-1·s-1·cm-2·sr-1)，动物将被随机纳入载体对照或使用指定剂量的 Lorlatinib 进行 3、7 或 14 天治疗。药物通过皮下植入的 Alzet 渗透泵给药。治疗后，处死小鼠，对 GBM 肿瘤进行显微解剖，并将组织在液氮中快速冷冻。剩余的大脑进行组织学处理。在大鼠中，PF-06463922 显示出低血浆清除率、中等分布体积、合理的半衰期、p-糖蛋白 1 介导的外排倾向低以及 100% 的生物利用度。在体内，PF-06463922 通过抑制 ROS1 磷酸化和下游信号分子，以及抑制肿瘤中的细胞周期蛋白 Cyclin D1，在表达人 CD74-ROS1 和 Fig-ROS1 的 NIH3T3 异种移植模型中显示出细胞减灭性抗肿瘤功效。在体内，PF-06463922还在携带表达EML4-ALK、EML4-ALK-L1196M、EML4-ALK-G1269A、EML4-ALK-G1202R或NPM-ALK的肿瘤异种移植物的小鼠中表现出显着的抗肿瘤活性。
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| 酶活实验 |
微流体迁移率变动测定用于测量重组人野生型和突变型 ALK 激酶结构域蛋白（氨基酸 1093-1411）中的激酶活性，这些蛋白是通过杆状病毒表达和 MgATP 自磷酸化内部产生的。反应含有 3 μM 5-FAM-KKSRGDYMTMQIG-CONH2)、5 mM MgCl2、1.3 nM 野生型 ALK 或 0.5 nM 突变型 ALK（适合在反应 1 小时后产生 15-20% 的肽底物磷酸化），以及25 mM Hepes（pH 7.1）中的 ATP 浓度（Km）。动力学和晶体学研究的结果表明该抑制剂具有 ATP 竞争性。将转化率 (%) 拟合到竞争性抑制方程即可得出 Ki 值。检测 ROS1 酶的程序与检测 ALK 的程序相同，不同之处在于使用 0.25 nM 重组人 ROS1 催化结构域（氨基酸 1883-2347）。 206 激酶组用于评估激酶抑制剂的选择性。
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| 细胞实验 |
在 96 孔板中，将细胞接种在含有 10% FBS 的生长培养基中，并在 37°C 下孵育整晚。第二天将连续稀释的 Lorlatinib 或合适的对照添加到指定的孔中后，将细胞在 37°C 下孵育 72 小时。为了确定相对细胞数，进行了 CellTiter-Glo 测定。使用四参数分析方法来拟合浓度-响应曲线并确定IC50值。
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| 动物实验 |
如前所述，在LSL-FIG-ROS1;Cdkn2a−/−;LSL-Luc小鼠中，通过颅内立体定向注射腺病毒-Cre诱导新生胶质母细胞瘤（GBM）的发生。生物发光成像（BLI）用于追踪肿瘤的发展，具体方法将在下文讨论。当肿瘤达到特定大小（107 p⁻¹·s⁻¹·cm⁻²·sr⁻¹）时，将动物随机分配至载体对照组或接受为期3天、7天或14天的lerlatinib治疗组，治疗剂量按规定剂量进行。药物通过皮下植入的Alzet渗透泵给药。治疗结束后，对GBM肿瘤进行显微解剖，将组织快速冷冻于液氮中，然后处死小鼠。剩余的脑组织用于组织学分析。
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| 参考文献 |
J Med Chem.2014 Jun 12;57(11):4720-44;Clin Cancer Res.2012 Sep 1;18(17):4570-9.
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| 其他信息 |
尽管克唑替尼在间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 阳性非小细胞肺癌患者中展现出显著疗效，但治疗过程中最终仍会出现疾病进展。耐药患者样本显示ALK激酶结构域存在多种点突变，包括L1196M门控突变。此外，部分患者还因脑转移而出现疾病进展。通过基于结构的药物设计、亲脂性优化和基于物理性质的优化，我们制备了一系列高效的ALK大环抑制剂，这些抑制剂具有良好的吸收、分布、代谢和排泄 (ADME) 特性、较低的P-糖蛋白1介导的外排倾向以及良好的被动渗透性。这些结构独特的环状抑制剂对野生型ALK和临床报道的ALK激酶结构域突变均具有抑制作用。我们克服了合成过程中的诸多挑战，并利用新型转化方法，使这些大环化合物能够应用于药物研发。这项工作促成了化合物 8k (PF-06463922) 的发现，该化合物兼具广谱活性、中枢神经系统 ADME 特性以及高度激酶选择性。[1]
致癌基因 ROS1 融合（图-ROS1）于二十多年前首次在胶质母细胞瘤细胞中被发现。近年来，ROS1 基因重排在多种人类癌症中被发现，包括肺腺癌、胆管癌、卵巢癌、胃腺癌、结直肠癌、炎性肌纤维母细胞瘤、血管肉瘤和上皮样血管内皮瘤，这为 ROS1 作为一种有吸引力的癌症靶点提供了更多证据。第一代 Met/ALK/ROS1 抑制剂 XALKORI®（克唑替尼）在 ROS1 融合阳性的非小细胞肺癌中展现出良好的临床疗效。但与XALKORI耐药患者中观察到的获得性ALK继发性耐药突变类似，在一名ROS1阳性非小细胞肺癌（NSCLC）患者中也发现了ROS1激酶结构域突变体——ROS1G2032R，该患者对XALKORI产生了耐药性。因此，迫切需要开发能够克服此类耐药性的药物。PF-06463922是一种新型的口服ATP竞争性ROS1/ALK小分子抑制剂，对ROS1激酶具有极高的抑制活性。 PF-06463922 以平均 Ki < 0.005 nM 的浓度抑制重组 ROS1 的催化活性，并在 IC50 值介于 0.1 nM 至 1 nM 之间，抑制了一系列携带致癌 ROS1 融合变体（包括 CD74-ROS1、SLC34A2-ROS1 和 Fig-ROS1）的细胞系中的 ROS1 自磷酸化。此外，PF-06463922 在亚纳摩尔至低纳摩尔浓度下抑制了携带 SLC34A2-ROS1 融合基因的 HCC78 人非小细胞肺癌细胞和表达人 CD74-ROS1 的 BaF3-CD74-ROS1 细胞的增殖并诱导了细胞凋亡。在经基因工程改造表达耐XALKORI突变体CD74-ROS1G2032R的BaF3细胞中，PF-06463922对ROS1G2032R细胞活性或细胞增殖均表现出纳摩尔级的抑制效力。体内实验表明，在表达人CD74-ROS1和Fig-ROS1的NIH3T3异种移植瘤模型中，PF-06463922在低纳摩尔浓度下即可展现出显著的细胞减灭抗肿瘤疗效。PF-06463922的抗肿瘤疗效呈剂量依赖性，并与ROS1磷酸化及其下游信号分子pSHP1、pSHP2和pErk1/2的抑制以及肿瘤细胞周期蛋白Cyclin D1的抑制密切相关。据我们所知，PF-06463922 是首个报道的 ROS1 抑制剂，能够在预测的药理学相关浓度下阻断耐药的 ROS1G2032R 突变体。我们的数据表明，PF-06463922 在治疗 ROS1 融合阳性癌症方面具有巨大潜力，包括因获得性 ROS1G2032R 突变而从 XALKORI 治疗中复发的患者。[2] |
| 分子式 |
C23H23FN6O4
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|---|---|
| 分子量 |
466.464927911758
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| 精确质量 |
466.176
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| CAS号 |
1924207-18-0
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| 相关CAS号 |
2135926-03-1;2306217-6 (hydrate) ;1924207-18-0 (PF-06463922 acetate); 1454846-35-5;
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| PubChem CID |
124203822
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| tPSA |
147Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
0
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
731
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
FC1C=CC2C(N(C)CC3C(=C(C#N)N(C)N=3)C3=CN=C(C(=C3)O[C@H](C)C=2C=1)N)=O.OC(C)=O
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| InChi Key |
BLNAIBLTPYGILH-RFVHGSKJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H19FN6O2.C2H4O2/c1-11-15-7-13(22)4-5-14(15)21(29)27(2)10-16-19(17(8-23)28(3)26-16)12-6-18(30-11)20(24)25-9-12;1-2(3)4/h4-7,9,11H,10H2,1-3H3,(H2,24,25);1H3,(H,3,4)/t11-;/m1./s1
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| 化学名 |
acetic acid;(16R)-19-amino-13-fluoro-4,8,16-trimethyl-9-oxo-17-oxa-4,5,8,20-tetrazatetracyclo[16.3.1.02,6.010,15]docosa-1(22),2,5,10(15),11,13,18,20-octaene-3-carbonitrile
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| 别名 |
Lorlatinib acetate; PF-06463922 acetate; 1924207-18-0; TE9WI16FEU; 2H-4,8-Methenopyrazolo(4,3-H)(2,5,11)benzoxadiazacyclotetradecine-3-carbonitrile, 7-amino-12-fluoro-10,15,16,17-tetrahydro-2,10,16-trimethyl-15-oxo-, (10R)-, acetate; acetic acid;(16R)-19-amino-13-fluoro-4,8,16-trimethyl-9-oxo-17-oxa-4,5,8,20-tetrazatetracyclo[16.3.1.02,6.010,15]docosa-1(22),2,5,10(15),11,13,18,20-octaene-3-carbonitrile; UNII-TE9WI16FEU; PF 06463922 acetate; .
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1438 mL | 10.7190 mL | 21.4381 mL | |
| 5 mM | 0.4288 mL | 2.1438 mL | 4.2876 mL | |
| 10 mM | 0.2144 mL | 1.0719 mL | 2.1438 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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