mGluR2/3

Pomaglumetad methionil (LY2140023) 是肽转运蛋白 1 (PEPT1) 的底物，具有很强的亲和力，Km 值约为 30 µM [2]。 LY2140023 表现出针对 [14C]Gly-Sar[2] 的活性，IC50 为 0.018 mM。

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前药对PEPT1 [14C]Gly-Sar转运的抑制作用[2]
研究了Pomaglumetad methionil/LY2140023对PEPT1探针底物[14C]Gly-Sar （25 μM）在5 ~ 1000 μM浓度范围内的抑制作用。以LY2140023缺失时[14C]Gly-Sar的积累为阳性对照。在pcDNA3.1空载体转染的对照细胞中进行平行实验，测量各浓度下[14C]Gly-Sar的被动扩散，并从pept1转染的HeLa细胞中减去积累量。两次单独实验预估前药IC50值分别为0.023±0.09和0.013±0.07 mM，平均值为0.018 mM（表2）。

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评价PEPT1对药前和活性片段的摄取。[2]
氨基酸前药Pomaglumetad methionil/LY2140023 (30 μM；前药)或活性药[14C]LY404039 (30 μM；在pH 6.0或7.5条件下，在短暂转染PEPT1的HeLa细胞中进行活性部分)，以确定Pomaglumetad methionil/LY2140023或LY404039是否为PEPT1的底物（图2）。在转染PEPT1的HeLa细胞中，活性片段的积累水平与其被动积累相似，表明它没有被PEPT1转运。相反，如图2所示，前药摄取是一个质子依赖性和时间依赖性的过程，表明它是PEPT1底物。虽然通过pcDNA3.1空载体的摄取表明，前药的被动通透性略高于活性部分，但与PEPT1介导的ph依赖性转运相比仍然可以忽略不计。

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已知PEPT1抑制剂对前药的IC50测定。[2]
利用二肽Gly-Sar作为抑制[14C]LY2140023摄取的阳性对照，测定了已知PEPT1底物对[14C]LY2140023/Pomaglumetad methionil（前药）转运的抑制电位。测定了几种已知PEPT1底物抑制10 μM [14C]LY2140023摄取的潜力；[14C]LY2140023摄取的两个独立实验的平均IC50值范围在0.46至25.90 mM之间（表2），其中伐昔洛韦是最有效的抑制剂，而左旋多巴是最不有效的抑制剂。[14C]Gly-Sar和前药的IC50效价排序相似，除了头孢氨苄是比卡托普利更有效的前药摄取抑制剂，而抑制Gly-Sar摄取的情况正好相反（表2）。LY2140023对Gly-Sar的抑制作用较强。

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用体外数据评价临床意义。[2]
为了为pept1介导的相互作用的临床研究提供可能的抑制剂选择，我们比较了五种已上市药物（头孢丙塞、头孢氨苄、卡托普利、依那普利和伐昔洛韦）的体外IC50及其在胃肠道（GI）中的估计浓度（I2）。这些浓度（I2）是通过将推荐临床剂量除以250 ml（一杯水的体积）得到的（表3）。化合物的剂量取自1997年的《医师案头参考》。卡托普利（0.03 ~ 0.15）、头孢氨苄（0.18 ~ 0.37）和依那普利（0.008 ~ 0.03）的I2/IC50比值明显小于1（即估计GI浓度低于体外平均IC50值），而头孢地诺西（2.10 ~ 4.20）和伐昔洛韦（12.04 ~ 24.11）的I2/IC50比值大于1（即估计GI浓度大于体外平均IC50值），表明可能存在相互作用。使用80 mg剂量时，Pomaglumetad methionil/LY2140023的I2/IC50比伐昔洛韦高48.5。

Pomaglumetad methionil（LY2140023；口服；3-300 mg/kg；每天一次，持续 7 天）以剂量依赖性方式增加多巴胺代谢物高香草酸 (HVA) 和二羟基苯乙酸 (DOPAC) [1]。

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理由：越来越多的证据表明，精神分裂症的原发性症状可能与中枢谷氨酸传递的改变有关。Pomaglumetad methionil/LY2140023一水合物是选择性mGlu（2/3）受体激动剂LY404039的蛋氨酸前药，目前正在评估用于治疗精神分裂症。
目的：评价Pomaglumetad methionil/LY2140023一水化合物在临床前和临床研究中的中心药理活性。
方法：评估雄性大鼠单次口服Pomaglumetad methionil/LY2140023一水化合物（前额叶皮质微转移物）、单次腹腔注射LY404039[脑脊液（CSF）]或LY2140023一水化合物（CSF）对神经递质/代谢物浓度的影响。一项16名健康受试者的临床研究评估了LY2140023一水40毫克，每日口服两次，连续14天对腰椎脑脊液的影响。
结果：大鼠研究：急性给药Pomaglumetad methionil/LY2140023一水化合物导致前额皮质细胞外二羟基苯基乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）浓度显著增加，但不增加5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）。LY2140023一水给药7天后脑脊液中HVA浓度升高，而急性给药LY404039增加DOPAC、HVA和甲氧基羟基苯基乙二醇（MHPG）浓度，但不增加5-HIAA。临床研究：接受LY2140023一水合物治疗的受试者脑脊液中DOPAC、HVA、5-HIAA和MHPG显著升高，而安慰剂无此现象。
结论：Pomaglumetad methionil/LY2140023一水和/或LY404039给药可显著影响人和大鼠中枢神经系统多巴胺的转换，并显著影响血清素的转换。生物胺代谢物如DOPAC和HVA的测定可以作为LY2140023一水化合物和/或LY404039中心药效学活性的有用生物标志物。[1]

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本研究共纳入24名健康受试者，其中男性8人，女性16人，平均年龄31.5岁（年龄范围19 ~ 66岁）。白种人12例（50.0%），非裔美国人11例（45.8%），亚裔1例（4.2%）。平均体重指数为26.6 kg/m2。
在24名受试者中，有20人完成了研究。4名受试者因以下原因停药：不符合资格标准（1名受试者在给药前停药）、AE(1)和违反方案23名受试者单独服用1000mg valacyclovir， 21名受试者单独服用80mg Pomaglumetad methionil/LY2140023, 20名受试者服用valacyclovir与LY2140023共给药。[2]

前药及其活性部分的质子和时间依赖转运。[1]
转染24小时后测定PEPT1介导的[14C]LY2140023 （30 μM）和[14C]LY404039 （30 μM）的摄取。Pomaglumetad methionil/LY2140023和LY404039的时间依赖性转运使用上述pH为6.0或7.5制备的缓冲液进行。用空pcDNA3.1载体转染细胞，检测LY2140023和LY404039的被动扩散。细胞在室温下孵育1、2.5、5、7.5、10和15分钟，清洗、裂解，并按上述方法定量含量。

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浓度依赖性摄取测定前药动力学参数。[1]
[14C]LY2140023/Pomaglumetad methionil，范围为5 ~ 149 μM，在PEPT1转染的HeLa细胞中，室温培养2 ~ 3分钟，测定其浓度依赖性。平行实验中，用pcDNA3.1空载体转染HeLa细胞，得到各浓度下前药的平均被动扩散量，并减去PEPT1介导的摄取量。校正后的数据采用WinNonlin Professional软件，5.0.1或5.3版（Certara, l.p., St. Louis， MO）进行拟合。利用下式估算PEPT1介导的前药动力学参数：

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抑制。[1]
以25 μM [14C] gy - sar （0.278 μCi/ml）为探针底物，测定前药（5 ~ 1000 μM）对[14C] gy - sar的摄取是否有抑制作用。细胞在含有25 μM [14C]Gly-Sar和不同浓度Pomaglumetad methionil/LY2140023的摄取缓冲液中室温孵育3分钟。在转染pcDNA3.1空载体的细胞中，通过平行实验确定背景，对摄取进行校正。如上所述进行细胞裂解和蛋白定量。

7种先前报道的PEPT1底物（Zhang et al., 2004）和Gly-Sar （PEPT1探针底物）也被评估，以确定它们对PEPT1介导的10 μM [14C]LY2140023 （0.193 μCi/ml）摄取的抑制潜力。上述两项单独的抑制研究使用ALA （0.1 ~ 5mm或0.25 ~ 5mm）、卡托普利（0.5 ~ 40mm）、头孢地诺西（0.3 ~ 10mm）、头孢氨苄（1 ~ 40mm）、依那普利（1 ~ 15mm或1 ~ 20mm）、左旋多巴（2.5 ~ 25mm）、Gly-Sar （0.1 ~ 5mm或0.25 ~ 5mm）和伐昔洛韦（0.1 ~ 5mm）进行。在这些浓度下，化合物的溶解度是用光纤光源检测的。对于左旋多巴，抑制浓度范围受溶解度限制。25 mM L-DOPA对[14C]LY2140023摄取的抑制作用不到50%，因此使用Gly-Sar在20 mM处的抑制作用作为PEPT1的完全抑制来估计IC50（假设在20 mM处完全抑制，因为Gly-Sar的IC50值为0.99 mM）。

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研究药物测定[1]
采用经验证的液相色谱/串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆和脑脊液中Pomaglumetad methionil/LY2140023和LY404039浓度。这些方法按照既定的美国FDA生物分析方法验证和样品分析指南（CDER 2001）进行验证和实施。两种化合物在脑脊液中的定量下限和上限分别为0.5和100 ng/mL，血浆中的定量下限分别为1和100 ng/mL。CSF中Pomaglumetad methionil/LY2140023和LY404039的日间精度值分别为3.42%和8.53%的相对标准偏差（RSD）， LY2140023的日间精度为- 5.12% ~ 1.06%的相对误差（RE）， LY404039的日间精度为- 6.30% ~ - 2.71%的相对误差（RE）。在血浆中，LY2140023和LY404039的日间精度分别为7.13%和8.61% RSD，日间精度分别为- 2.69% ~ 5.71% RE和0% ~ 11.4% RE。样品与同位素内标混合，然后固相萃取分离分析物。在正离子模式下进行LC/MS/MS分析，并为每种分析物和内标选择特定的反应监测设置。分析运行包括校准标准品、质量控制样品和参与样品。发现超过定量上限的样品被稀释并重新分析。不符合校准曲线和质控样品精度先验接受标准的分析运行被拒绝，受影响的样品被重新分析。采用类似的LC/MS/MS技术测定大鼠血浆和脑脊液中LY404039的浓度。

动物/疾病模型：雄性Fischer大鼠（约250 g）[1]
剂量：3 mg/kg、10 mg/kg和300 mg/kg
给药途径：口服；每日一次，连续7天
实验结果：多巴胺及其代谢产物DOPAC和HVA水平呈剂量依赖性升高。\n\n临床前方法[1]
\nPomaglumetad methionil/LY2140023的溶剂为蒸馏水；LY404039的溶剂为0.01 N NaOH。注射体积为5 mL/kg。补充材料（ESM）中提供了各项临床前研究的实验室方法的完整描述。所有临床前研究均遵循实验动物护理原则。\n\n大鼠急性给药/体内微透析研究[1]
\n简而言之，将引导套管植入雄性Sprague-Dawley大鼠（研究时体重约300克）的前额叶皮层（PFC）（Paxinos和Watson，1986）。大鼠适应环境过夜。实验前，插入同心式透析探针，并将动物置于可自由活动的腔室中。透析探针的入口管以1.5 μL/min的最终流速灌注人工脑脊液。平衡后，将出口处的液体收集到冷藏的馏分收集器中。每隔30分钟收集一次基线样本，共收集三次。在第三个采样间隔开始 20 分钟后，通过灌胃法给予 Pomaglumetad methionil/LY2140023 一水合物（3、10 或 30 mg/kg）或溶剂对照。在接下来的 4.5 小时内，每隔 30 分钟收集一次透析液。\n

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\n\n大鼠脑脊液研究 [1]
\nPomaglumetad methionil/LY2140023 一水合物每日一次口服给药于雄性 Fischer 大鼠（Harlan Labs，印第安纳州印第安纳波利斯，研究时体重约为 250 g），连续 7 天，剂量分别为 3、10 和 300 mg/kg，并在末次给药后 3 小时进行采样。在研究期间，雄性Sprague-Dawley大鼠（Harlan Labs，研究时体重约250克）腹腔注射LY404039，并在从枕大池采集脑脊液前60分钟给药。\n

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\n\n研究设计[1]
\n这是一项探索性、随机、受试者盲法、安慰剂对照研究，纳入16名健康男性受试者。该研究（H8Y-FW-HBBF）已完成。\n\n受试者按3:1的比例随机分组，分别口服40 mg Pomaglumetad methionil/LY2140023一水合物或安慰剂，每日两次，连续14天。给药在研究中心进行，每位受试者每天的给药时间大致相同。在第1天，于上午立即进行基线腰椎穿刺（LP），随后给予受试者首剂研究药物。在第14天，于末次给药后约2小时采集血样，用于测定LY2140023和LY404039的浓度。于第15天上午，于给药后约10-12小时，通过腰椎穿刺采集第二份脑脊液样本。在第15天后2至14天内进行安全性随访。\n\n由于与研究方案无关的原因，该研究提前终止。因此，由于提前终止，可用于检测的样本数量少于预期。因此，检测的代谢物种类比原计划要少。\n

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\n\n研究药物[1]
\n所有药物均以200 mL室温水配制成溶液口服给药。 Pomaglumetad methionil/LY2140023 一水合物用 0.42% 碳酸氢钠溶液（8 mg/mL）复溶。安慰剂治疗采用 5 mL 0.42% 碳酸氢钠溶液。\n\n

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\n\n临床研究 [2]
\n\n该研究采用三周期固定顺序设计，受试者分别接受单次 1000 mg 伐昔洛韦（周期 1）、单次 80 mg Pomaglumetad methionil/LY2140023（周期 2）以及 80 mg LY2140023 与 1000 mg 伐昔洛韦联合用药（周期 3）；各周期之间设有 5 至 10 天的洗脱期。采集系列血样用于评估伐昔洛韦、阿昔洛韦（伐昔洛韦和阿昔洛韦的结构参见 Ganapathy 等，1998）、LY2140023 和 LY404039 的药代动力学 (PK)。分别于给药后 0～6 小时、6～12 小时和 12～24 小时采集尿液，用于分析尿液中伐昔洛韦、阿昔洛韦和/或活性成分的含量。通过收集不良事件、临床实验室检查、心电图和神经系统检查评估安全性。\n
\n符合条件的受试者为年龄在 18 至 65 岁（含 18 岁和 65 岁）之间、体重指数在 19 至 32 kg/m²（含 19 和 32 kg/m²）之间的健康男性和女性。试验期间无法停止使用黄嘌呤类药物、香烟或非处方药/处方药的受试者将被排除在外。所有受试者在参与研究前均签署了书面知情同意书。\n
\n招募了足够数量的受试者，最终获得18名受试者完成研究。该样本量旨在提供至少90%的统计功效，以证明试验组（LY2140023 + 伐昔洛韦）与对照组（单独使用LY2140023）曲线下面积（AUC）几何均值比值的90%置信区间（CI）落在区间(0.80, 1.25)内。\n

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\n\n生物分析。[2]
\n采用经验证的涡轮离子喷雾液相色谱/串联质谱法分析血浆样本中的伐昔洛韦、阿昔洛韦、Pomaglumetad methionil/LY2140023（前药）和LY404039（活性成分）。对于前药和活性部分，两种分析物的定量下限 (LLQ) 均为 0.25 ng/ml，定量上限 (ULQ) 均为 100 ng/ml (Annes 等，2015)。对于伐昔洛韦和阿昔洛韦，两种分析物的 LLQ 均为 100 ng/ml，ULQ 均为 1000 ng/ml。\n
\n采用经验证的液相色谱/串联质谱法分析尿液样本中的伐昔洛韦、阿昔洛韦和/或活性部分。由于既往研究表明前药不经尿液排泄，因此未对其进行分析。对于活性部分，LLQ 为 50 ng/ml，ULQ 为 5000 ng/ml。对于伐昔洛韦和阿昔洛韦，定量下限 (LLQ) 为 100 ng/ml，定量上限 (ULQ) 为 20,000 ng/ml。\n
\n对于所有生物分析方法，高于定量限的样品均进行稀释并重新分析，以获得校准范围内的结果。\n

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\n\n药代动力学分析。[2]
\n使用 WinNonlin 5.3 版软件，采用标准非房室模型分析方法，分析伐昔洛韦、阿昔洛韦、Pomaglumetad methionil/LY2140023 和 LY404039 的血浆浓度-时间数据。除给药前时间设为 0 小时外，分析中均使用实际采样时间。曲线下面积 (AUC) 值采用对数线性梯形法计算。在计算活性部分的 CL/F 和 Vz/F 时，前药的剂量根据活性部分与前药的摩尔比 (0.64) 进行调整。\n
\n测量了 LY404039、伐昔洛韦和阿昔洛韦的尿液浓度和尿量数据。将每个收集间隔内的排泄量相加，以确定 24 小时收集间隔内的累积排泄量 [Ae(0–24)]。同时确定了排泄剂量分数 (fe)。对于活性部分的剂量，如前所述，使用了 0.64 的校正因子。同样，对于阿昔洛韦，伐昔洛韦的剂量根据阿昔洛韦与伐昔洛韦的摩尔比 (0.694) 进行调整。表观肾清除率采用截至最后一次收集间隔的累积排泄量和血浆AUC(0–24)进行估算。\n
\n尽管所有具有浓度-时间数据的受试者均测定了药代动力学参数，但如果在给药后5小时内发生呕吐，则该给药周期的浓度-时间数据和药代动力学参数不纳入任何数据汇总或统计分析。仅有一名受试者（在第2周期）因呕吐而被排除药代动力学数据。\n
\n比较了Pomaglumetad methionil/LY2140023、LY404039、伐昔洛韦和阿昔洛韦在单独给药和联合给药时的主要药代动力学参数（Cmax和AUC）。除伐昔洛韦外，所有分析物均采用AUC(0–∞)进行评估，伐昔洛韦采用AUC(0–3)进行评估。采用线性混合效应模型比较各参数，其中治疗（单独使用 80 mg LY2140023、单独使用 1000 mg 伐昔洛韦以及 80 mg LY2140023 与 1000 mg 伐昔洛韦联合用药）作为固定因子，受试者作为随机因子。分析前对参数进行对数转换。根据模型估计各治疗的最小二乘均值 (LSM) 以及试验组和对照组均值差异的 90% 置信区间 (CI)，并将对数转换后的 LSM 反变换为几何均值估计值以及几何均值比值的 90% CI。tmax 的分析基于非参数方法。文中列出了各治疗的中位数和范围，以及使用 Wilcoxon 符号秩检验计算的中位数比较的 P 值。\n

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\n\n安全性。[2]
\n本研究中未发生严重不良事件 (AE)。一名受试者在单独服用1000 mg伐昔洛韦约4小时后出现轻度荨麻疹不良事件后退出研究。\n
\n大多数不良事件为轻度或中度；单独服用伐昔洛韦后出现一例重度头痛不良事件。单独服用前体药物后最常见的不良事件为恶心、头晕、嗜睡和头痛。与伐昔洛韦联合使用Pomaglumetad methionil/LY2140023的不良事件特征与单独使用LY2140023相似。\n\n

药代动力学评估[1]
给药后约10-12小时，Pomaglumetad methionil/LY2140023和LY404039的平均脑脊液浓度分别为1.93 ng/mL和4.93 ng/mL，所有受试者均可定量检测。

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药代动力学。[2]
给药前药后，活性部分迅速形成，在21名受试者中的18名受试者的首次采样时即可检测到，这与之前的临床研究结果一致。
单独给药Pomaglumetad methionil/LY2140023（前药）以及与伐昔洛韦联合给药后，平均药代动力学参数（表4）和曲线（图4A）相似。 Cmax 和 AUC 的最小二乘均值 (LSM) 比值接近 1，置信区间在 0.80 至 1.25 范围内（表 5）。
同样，LY404039（活性成分）的血浆药代动力学参数（表 4）和曲线（图 4B）在单独给药前药和与伐昔洛韦联合给药后相似。活性成分的尿排泄在单独给药前药和与伐昔洛韦联合给药时也相似（表 4），以排泄分数 (fe；分别为 0.651 和 0.595) 和肾清除率 (CLr；分别为 12.8 和 12.2 L/h) 衡量。Cmax 和 AUC 的 LSM 比值也接近 1，置信区间在 0.80 至 1.25 范围内（表 5）。前药和活性成分的达峰时间（tmax）分析显示，二者tmax无显著差异（前药配对差异的中位数为0.00小时，活性成分为-0.07小时；补充表1）。
伐昔洛韦的血浆浓度有限，通常仅在给药后3至4小时内可测得（Phan等人，2003），这是因为伐昔洛韦（前药）向阿昔洛韦（活性代谢物）的转化迅速且高效。无论单独给药还是与前药联合给药，伐昔洛韦的平均血浆浓度曲线相似（图5A）。如表6所示，无论单独给药还是与前药联合给药，伐昔洛韦的血浆药代动力学参数和肾清除率均相似。 Cmax 和 AUC 的最小二乘均值 (LSM) 比值接近 1，置信区间 (CI) 介于 0.80 至 1.25 之间（表 5），但 AUC(0–3) 的 90% CI 下限为 0.71。
服用前药伐昔洛韦后，活性代谢物阿昔洛韦迅速生成。单独服用或与前药联合服用时，阿昔洛韦的血浆药代动力学和肾清除率相似（表 6）。同样，无论是否服用前药，阿昔洛韦的血浆浓度曲线也相似（图 5B）。阿昔洛韦的 AUC 和 Cmax 的 LSM 比值接近 1，90% CI 介于 0.80 至 1.25 之间（表 5）。对伐昔洛韦和阿昔洛韦的 tmax 分析显示，未观察到 tmax 的差异（伐昔洛韦的配对差异中位数为 0.00 小时，阿昔洛韦的配对差异中位数为 0.00 小时；补充表 1）。

安全性[1]
本研究期间未发生死亡或其他严重不良事件；然而，3名受试者（2名安慰剂组，1名LY组）因硬膜穿刺后头痛（PDPH）被研究者终止研究。最常见的可能与研究治疗相关的治疗期间出现的不良事件为恶心、呕吐、头晕和疲乏，严重程度通常为轻度至中度（表4）。7名受试者出现与PDPH相关的操作并发症。其中3名（2名安慰剂组，1名Pomaglumetad methionil/LY2140023组）因PDPH被研究者终止研究。所有PDPH均通过保守治疗完全缓解，未进行硬膜外贴片治疗。

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Pomaglumetad methionil/LY2140023 在临床研究 [1] 中的安全性
LY2140023 一水合物总体耐受性良好，本研究中未观察到与 LY2140023 相关的具有临床意义的安全性或耐受性问题。报告的可能与药物相关的不良事件与既往 LY2140023 一水合物临床研究中观察到的不良事件相似。腰椎穿刺术可能出现与操作相关的并发症，例如穿刺后头痛 (PDPH)。总体而言，本研究中使用的腰椎穿刺术的安全性和耐受性与既往经验相当。

[1]. Effects of a novel mGlu₂/₃ receptor agonist prodrug, LY2140023 monohydrate, on central monoamine turnover as determined in human and rat cerebrospinal fluid. Psychopharmacology (Berl). 2012 Feb;219(4):959-70.

[2]. In Vitro and Clinical Evaluations of the Drug-Drug Interaction Potential of a Metabotropic Glutamate 2/3 Receptor Agonist Prodrug with Intestinal Peptide Transporter 1. Drug Metab Dispos. 2017 Feb;45(2):137-144.

LY2140023是礼来公司研发的一种在研药物，旨在为精神分裂症提供一种新的治疗选择。LY2140023是一种口服“前药”，这意味着它本身不具有生物活性，给药后会代谢生成活性mGlu2/3受体激动剂LY404039。目前大多数获批的抗精神病药物的作用机制是通过影响神经递质多巴胺或血清素。而LY2140023的活性成分LY404039，据信是通过减少大脑中mGlu2/3受体表达区域突触前释放的另一种神经递质——谷氨酸——来发挥作用的。为进一步了解LY2140023的安全性和有效性，包括确定其最佳治疗剂量，目前正在计划或进行更多研究。

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药物适应症
已研究用于治疗精神病、精神分裂症和分裂情感性障碍。

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作用机制
LY2140023是一种抗精神病药物，属于代谢型谷氨酸受体2/3激动剂。该药物具有全新的作用机制，可有效治疗精神分裂症，并可能用于治疗其他神经精神疾病。LY2140023吸收后可高效水解生成活性mGlu2/3受体激动剂LY404039。LY404039和其他mGlu2/3激动剂不直接与多巴胺或5-羟色胺（5-HT2A）受体相互作用。然而，前额叶皮层中“功能性”5-HT2A受体拮抗作用可能代表了临床有效的非典型抗精神病药物和mGlu2/3受体激动剂的共同机制，并可能有助于LY2140023的抗精神病作用。

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Pomaglumetad methionil/LY2140023一水合物和LY404039对生物胺类神经递质及其代谢物的影响[1]
本报告显示，mGlu2/3激动剂产品LY2140023和/或LY404039增加了中枢神经系统（CNS）中特别是神经递质DA的周转率，这表现为大鼠脑透析液以及大鼠和人脑脊液样本中代谢物DOPAC和HVA水平的升高。这些变化似乎也与LY404039的血浆/脑脊液药物浓度相关。因此，这些代谢物的脑脊液水平可能作为LY2140023和/或LY404039中枢药效学活性的有效转化标志物。
在本文所述的临床前研究中，LY404039及其前药LY2140023均增加了大鼠中枢神经系统中生物胺的周转。因此，在体内，给予LY2140023一水合物可使前额皮质微透析液中DOPAC和HVA的细胞外水平呈剂量依赖性增加（图1），而对5-HIAA的水平没有显著影响。这些变化与近期发表的LY404039大鼠微透析数据一致，该数据观察到前额皮质中细胞外DA水平升高（Rorick-Kehn等，2007）。该研究还发现死后脑组织中DOPAC和HVA水平升高。在本研究中，我们在大鼠脑脊液中发现了类似的效应，单次注射LY404039可导致DOPAC、HVA以及NE代谢物MHPG水平呈剂量依赖性升高。连续7天给予前药LY2140023一水合物后，观察到类似的趋势，但效应较弱，仅在10 mg/kg剂量下观察到HVA水平的统计学显著升高。重要的是，LY2140023 和 LY404039 对大鼠微透析液和脑脊液中生物胺周转的影响与在苯环利定诱导的大鼠精神分裂症模型中显示出疗效的范围一致（Patil 等，2007b）。
在本研究报告的临床研究中，LY2140023 提高了人脑脊液中 DOPAC 和 HVA 以及血清素代谢物 5-HIAA 的浓度。已知腰椎神经递质及其代谢物浓度的解读会受到诸如头尾梯度等因素的限制。然而，结合临床前研究数据以及临床前和临床中观察到的药物浓度效应，这些观察结果表明，LY2140023 一水合物给药也能增加人脑中枢多巴胺能和血清素能的周转。虽然也观察到NE代谢物MHPG浓度显著升高，但脑脊液中DHPG浓度未出现统计学意义上的显著升高，因此无法就LY2140023对中枢NE代谢的影响得出明确结论。可能是由于本研究样本量不足，无法基于两种NE代谢物的测量结果充分确定其对去甲肾上腺素代谢的影响。观察到的LY2140023一水合物对人脑脊液中生物胺代谢物浓度的影响，是在先前已证实对精神分裂症患者具有临床疗效的剂量下发生的（Patil等人，2007b）；因此，LY2140023一水合物对脑脊液中生物胺代谢物的影响是在具有治疗意义的剂量下观察到的。
在本研究中，安慰剂组受试者脑脊液中评估的生物胺代谢物浓度未见显著变化；然而，由于本研究中安慰剂组受试者数量有限，无法对活性化合物组和安慰剂组进行明确的比较。尽管如此，在开展本临床研究之前，我们进行了一项未进行药物治疗的方法学研究，以评估实验技术并识别在脑脊液分析物检测过程中可能出现的分析、生物学和实验变异性来源（Patil 等，2007a）。我们建立了分析方法，并确定了每种分析物预期内源浓度的定量动态范围和定量限。在健康受试者中，于基线和基线后 2 周通过腰椎穿刺术获取脑脊液。我们分析了脑脊液样本中与本研究相同的生物胺及其代谢物。基线后2周测得的脑脊液单胺及其代谢物浓度与基线相比，DOPAC、HVA、DHPG和MHPG的比值范围为1.01至1.02，L-DOPA、5-HTP和5-HIAA的比值范围为1.11至1.17。因此，人脑脊液中单胺及其代谢物的生物稳定性足以支持药物或安慰剂治疗效果的研究。
总体而言，该临床研究结果首次证实了代谢型谷氨酸2,3受体激动剂对人体生物胺系统的影响。LY2140023一水合物增加多巴胺能和血清素能代谢的确切机制尚不清楚。然而，临床研究的结果与该药物和其他 mGlu2/3 激动剂的临床前研究结果一致，包括已发表的 LY404039（Rorick-Kehn 等人，2007 年）和 mGlu2/3 激动剂 LY379268（Cartmell 等人，2000 年）的微透析和脑组织数据。因此，在人体和临床前研究中，发现能诱导脑脊液（和/或微透析液）中生物胺代谢物变化的LY2140023一水合物（和/或LY404039）剂量，与在精神分裂症或精神分裂症动物模型中显示出疗效的剂量相当。
采用不同分析技术（GC/MS/MS与HPLC/EC）和截然不同的生物基质（大鼠脑实质间质液透析液、大鼠枕大池脑脊液和人类腰椎脑脊液）在大鼠和人体研究中得到的结果相似，进一步支持了以下观点：观察到的人类腰椎脑脊液神经递质代谢物浓度变化确实表明了中枢临床药效学效应。 LY2140023一水合物治疗后，啮齿动物（DOPAC和HVA）和健康受试者（DOPAC、HVA和5-HIAA）体内生物胺水平升高，提示LY2140023可能显著增加前额叶皮层（PFC）中多巴胺和/或5-羟色胺的代谢周转，这一发现与包括奥氮平在内的非典型抗精神病药物的临床前研究结果一致（Li et al. 1998）。然而，与非典型抗精神病药物不同，LY2140023及其活性成分LY404039并不直接与多巴胺D2受体相互作用（Fell et al. 2008）。因此，推测其对生物胺代谢物代谢周转的影响是通过改变谷氨酸释放间接介导的。虽然LY404039可增加脑脊液中MHPG的浓度，但由于未观察到脑脊液DHPG浓度的统计学显著变化，因此无法就LY2140023对NE代谢的影响得出明确结论。
在本研究中，连续14天每日两次服用LY2140023一水合物后，脑脊液和血浆中Pomaglumetad methionil/LY2140023和LY404039的浓度与先前报道的健康受试者服用40 mg剂量后的研究结果一致（数据未显示）。此外，脑脊液和血浆中活性化合物LY404039的浓度均随脑脊液中HVA浓度的增加呈线性增加。在大鼠中也观察到了类似的趋势，即脑脊液和血浆中LY404039的浓度均随HVA和DOPAC浓度的增加而增加。综上所述，生物胺浓度与药物水平的关联进一步支持了以下观点：观察到的药效学变化是由LY2140023一水合物的活性成分LY404039激活代谢型谷氨酸受体2,3所致。此外，中枢药效学指标与外周LY404039水平之间的关系提示，血浆LY404039浓度可能预测中枢药代动力学和药效学效应。如果未来的研究证实了这一点，血浆LY404039的测定可能足以反映中枢药代动力学和中枢药效学活性，其中后者基于生物胺神经递质的周转。需要进一步研究来评估这种可能性，并确定其与临床结果的关系（如果存在这种关系）。
总之，Pomaglumetad methionil/LY2140023 和/或 LY404039 可增加中枢神经系统多巴胺 (DA) 的代谢周转，并且可能也增加 5-羟色胺 (5-HT) 的代谢周转，这反映在脑脊液中这些神经递质代谢物的浓度升高上。LY2140023 和/或 LY404039 对这些标志物的影响被认为是 mGlu2/3 受体介导的，因此 DA 和 5-HT 代谢物的测量可能作为 LY2140023 和/或 LY404039 中枢药效学活性的有效转化标志物。 LY2140023 或 LY404039 对多巴胺和血清素受体缺乏显著亲和力，表明其对多巴胺和 5-羟色胺代谢的影响很可能是通过间接机制介导的。[1]尽管肽转运蛋白 1 (PEPT1) 负责多种药物的生物利用度，但对其在药物相互作用中的潜在作用的研究却很少。代谢型谷氨酸受体 2/3 激动剂前药 Pomaglumetad methionil 利用 PEPT1 来增强吸收和生物利用度。已开展体外研究，以指导开展临床药物相互作用研究的决策，并为临床研究设计提供信息。体外研究确定前药（Pomaglumetad methionil/LY2140023 一水合物）是 PEPT1 的底物，Km 值约为 30 µM，而活性部分（LY404039）则不是 PEPT1 的底物。此外，在体外评估的八种已知的 PEPT1 底物中，伐昔洛韦是 PEPT1 介导的前药摄取的最强抑制剂（IC50 = 0.46 mM）。因此，开展了一项临床药物相互作用研究，以评估前药与伐昔洛韦在健康受试者中的潜在相互作用。结果显示，联合用药对前药、伐昔洛韦及其活性部分的药代动力学均无影响。尽管体外研究表明前药和伐昔洛韦可能通过 PEPT1 发生相互作用，但体内研究并未发现这两种药物之间存在相互作用。由于PEPT1具有高容量且在肠道中表达丰富，因此它似乎不容易饱和。因此，即使是与该转运蛋白具有高亲和力的化合物，也不太可能发生PEPT1的临床相互作用。[2]

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随后，一项临床研究旨在评估Pomaglumetad methionil/LY2140023作为PEPT1的底物和抑制剂的作用。LY2140023与伐昔洛韦的联合给药并未影响彼此或其各自活性部分（LY404039或阿昔洛韦）的药代动力学，表明前药与伐昔洛韦之间不存在临床药物相互作用。数据还显示，前药或伐昔洛韦的存在均不影响LY2140023或伐昔洛韦的前药向其活性部分的转化。前药和伐昔洛韦转化为相应活性部分的转化过程中缺乏相互作用符合预期，因为不同的酶负责它们的活化。脱氢肽酶1已被证实可将前药裂解为活性部分（Moulton等人，2015），而伐昔洛韦酶（联苯水解酶样蛋白）可将伐昔洛韦裂解为阿昔洛韦（Marsillach等人，2014）。两种活性部分的CL/F或CLr均未发生变化，表明药物联合给药不会影响彼此的肾清除率。此外，如果PEPT1存在弱相互作用，则可能会观察到Tmax值的变化。然而，在所研究的任何实体中均未观察到Tmax值的变化。此外，伐昔洛韦的AUC(0-3小时)未发生显著变化，再次表明PEPT1处不存在相互作用。
在本研究中，我们阐述了体外研究如何指导基于转运蛋白的药物相互作用的临床药物相互作用研究的设计。体外筛选多种竞争该转运蛋白的药物的抑制效力，可以确定抑制效力的排序，并分析其与化合物口服剂量相关的潜在药物相互作用。因此，可以避免不必要的体内研究，同时专注于最相关的潜在药物相互作用。尽管体外研究表明，根据其他肠道转运蛋白的指南，前药与伐昔洛韦之间可能存在药物相互作用，但体内药物相互作用研究表明，这两种药物并未通过PEPT1发生相互作用。因此，我们的结果清楚地表明，即使是对该转运蛋白具有高亲和力的新分子实体，在PEPT1处发生临床药物相互作用的可能性也极低。[2]

C12H20N2O8S2

384.425801277161

384.066

956385-05-0

Pomaglumetad methionil hydrochloride;635318-26-2;Pomaglumetad methionil anhydrous;635318-55-7

56842185

Typically exists as solid at room temperature

0.691

210.26

5

10

7

24

644

5

S1(C[C@@](C(=O)O)([C@@H]2[C@@H](C(=O)O)[C@H]12)NC([C@H](CCSC)N)=O)(=O)=O.O

HQMAHCKDJKNYEK-LBMFEJOUSA-N

InChI=1S/C12H18N2O7S2.H2O/c1-22-3-2-5(13)9(15)14-12(11(18)19)4-23(20,21)8-6(7(8)12)10(16)17;/h5-8H,2-4,13H2,1H3,(H,14,15)(H,16,17)(H,18,19);1H2/t5-,6+,7+,8-,12-;/m0./s1

(1R,4S,5S,6S)-4-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-2,2-dioxo-2λ6-thiabicyclo[3.1.0]hexane-4,6-dicarboxylic acid;hydrate

Pomaglumetad methionil; LY2140023 Monohydrate; Pomaglumetad methionil [USAN]; UNII-WE665JB15R; pomaglumetad metionilo; WE665JB15R; LY-2140023 Monohydrate; ...; 956385-05-0;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。