HSV-1 (IC50 = 0.02 μM); HSV-2 (IC50 = 0.02 μM)

体外活性：Pritelivir（以前称为 AIC316，BAY 57-1293）是一种新型有效的解旋酶引物酶抑制剂，对单纯疱疹病毒（HSV）具有抗病毒作用，对 HSV-1 和 HSV-2 的 IC50 均为 20 nM。它代表了一类新的 HSV 强效抑制剂，针对病毒解旋酶引物酶复合物。 BAY 57-1293 通过抑制解旋酶引物酶并影响病毒 DNA 合成而表现出抗疱疹活性。在体外病毒复制测定中，BAY 57-1293 显示出对 HSV-1 F、HSV-2 G 和阿昔洛韦耐药 HSV-1 F 突变体的抑制作用，IC50 值为 20nM。因此，BAY 57-1293 具有治疗人类 HSV 疾病的巨大潜力，包括那些对现有药物耐药的人。作用机制是 BAY 57-1293 以剂量依赖性方式直接抑制病毒解旋酶-引物酶复合物的 ATPase 活性。 BAY 57-1293 还显示出针对阿昔洛韦耐药 HSV 突变体的有效抗病毒活性。 BAY 57-1293 减少 vero 细胞中 1 型单纯疱疹病毒诱导的 Aβ 和 P-tau。激酶测定：Pritelivir（以前称为 AIC316，BAY 57-1293）是一种新型有效的解旋酶引物酶抑制剂，对单纯疱疹病毒 (HSV) 显示出抗病毒作用，对于 HSV-1 和 HSV-2 的 IC50 均为 20 nM。细胞测定：在体外病毒复制测定中，BAY 57-1293 显示出对 HSV-1 F、HSV-2 G 和阿昔洛韦耐药 HSV-1 F 突变体的抑制作用，IC50 值为 20nM。在空斑减少测定和常规细胞致病性测定中，BAY 57-1293 显示的 IC50 值分别为 0.01-0.02μM 和 0.01-0.03μM。

Pritelivir 是同类中第一种针对病毒解旋酶-引物酶复合物以防止 HSV 复制的抗病毒药物[2]。普替利韦的剂量（0.03-45 mg/kg）可显着提高生存率。对于 HSV-1、E-377，普替利韦（0.3-30 mg/kg）可降低死亡率。 Pritelivir 具有强大的抗病毒活性，可以打破耐药性，使其成为治疗潜在致命的 1 型和 2 型 HSV 感染（例如单纯疱疹脑炎）的有希望的治疗方法[3]。与媒介物治疗组相比，使用 0.1 或 0.3 mg/kg/剂的 Pritelivir 和阿昔洛韦（10 mg/kg/剂）的联合治疗可预防 HSV-2、MS 株[3]。

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16.6%的受试者在安慰剂组中检测到HSV脱落；在每天服用5mg的受试者中，18.2%的天数检测到Pritelivir受体脱落，在每天服用25mg的受试器中，9.3%的天数发现Pritelivir受体脱落。与安慰剂相比，Pritelivir每日剂量为5mg时病毒脱落的相对风险为1.11（95%置信区间[CI]，0.65至1.87），每日剂量为25mg时为0.57（95%CI，0.31至1.03），每日用量为75mg时为0.13（95%CI:0.04至0.38），每周剂量为400mg时为0.32（95%CI，0.17至0.59）。生殖器损伤的天数百分比也显著降低，从安慰剂组的9.0%降至每天服用75mgPritelivir组的1.2%（相对风险，0.13；95%CI，0.02至0.70）和每周服用400mg的组的1.2%。所有组的不良事件发生率相似。 结论：Pritelivir以剂量依赖的方式降低了患有生殖器疱疹的健康男性和女性生殖器HSV脱落率和病变天数。（ClinicalTrials.gov编号，NCT01047540。）。[2]

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Pritelivir是一种解旋酶引物酶抑制剂，对人类单纯疱疹病毒（HSV）具有优异的体外和体内活性。感染HSV 1型或2型（包括阿昔洛韦耐药株）致死的小鼠在感染后72小时用Pritelivir/普立替韦或阿昔洛韦治疗7天。两种药物均单独或联合口服，每天两次。0.3至30mg/kg的Pritelivir剂量降低了HSV-1、E-377的死亡率（P<0.001）。对于阿昔洛韦耐药的HSV-1，11360，1和3 mg/kg的Pritelivir/普立韦可提高存活率（P<0.005）。对于HSV-2、MS感染的小鼠，所有高于0.3mg/kg剂量的普里特利韦均有效（P<0.005）。对于对阿昔洛韦耐药的HSV-2菌株12247，1-3mg/kg的Pritelivir剂量显著提高了存活率（P<0.0001）。与载体治疗组相比，普立韦0.1或0.3 mg/kg/剂与阿昔洛韦（10 mg/kg/剂）的联合治疗对HSV-2 MS株具有保护作用（P<0.0001）（与之前使用HSV-1的数据一致）。还观察到平均死亡天数增加（P<0.05），这表明存在潜在的协同作用。进行了药代动力学研究以确定Pritelivir浓度，发现血浆和脑样本中存在剂量依赖关系，无论感染状态或给药开始时间如何。总之，当治疗延迟到病毒接种后72小时时，普立韦被证明是有效的，并且在该模型中与阿昔洛韦联合使用似乎能协同抑制死亡率。我们得出结论，普立病毒具有强大的抗药性，有可能治疗潜在危及生命的HSV 1型和2型感染，包括单纯疱疹病毒脑炎[3]。

使用的HSV-1菌株是实验室菌株E-377和临床分离株11360，HSV-2菌株是实验室毒株MS和临床分离物12247。隔离物是杰克·希尔和巴勒斯·韦尔科姆的礼物。这些病毒的易感性之前已有报道（Prichard等人，2009；Tardif等人，2014）。菌株11360和菌株12247的ACV体外半最大有效浓度（EC50）分别大于100µM和100µM，这两种菌株都被认为对ACV具有耐药性。这些菌株具有以下多态性，并强调了ACV抗性介导的突变：菌株11360的TK多态性C6G、N23S、K36E、S181N、A192V、G251C、A265T、V267L、P268T、D286E和N376H（相对于NC_001806），菌株11360和G39E、N78D、L140F和C337Y（相对于NP044492.1），菌株12247的DNA聚合酶多态性A9T、P15S和L60P（相对于NP 044500.1），以及菌株11337的S33G、V905M、A1203T和T1208A（NC_00180.6）60。从新鲜获得的新生人类包皮制备人包皮成纤维细胞（HFF）作为原代培养物，并通过之前报道的方法在HFF细胞中制备和定量病毒储备，以供体内使用（Prichard等人，2013）。[3]

动物/疾病模型：雌性 balb/c (Bagg ALBino) 小鼠[3]
剂量：0.03 至 45 mg/kg
给药途径：口服，每日两次，间隔约 12 小时，持续 7 天
实验结果：与溶剂对照组相比，存活率显著提高至 80-100%。即使是最低剂量 0.3 mg/kg 也能有效提高存活率至 53%。

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普瑞替韦 (PTV) 悬浮于 1.0% 羧甲基纤维素 (CMC) 水溶液中，用于小鼠口服给药。阿昔洛韦 (ACV) 也悬浮于 1.0% CMC 溶液中，用于小鼠口服给药。化合物配制体积为 0.2 ml。为了评估疗效和药物分布情况，在病毒接种后24-72小时开始，连续7天通过灌胃法给小鼠服用普瑞替韦（PTV），剂量范围为0.03至45 mg/kg，或阿昔洛韦（ACV），剂量范围为1至50 mg/kg，每日两次，间隔约12小时，具体剂量取决于不同的给药方案。对于联合用药研究，采用了既往研究的数据，这些研究表明，阿昔洛韦的最低有效剂量为30 mg/kg，每日两次口服给药（Prichard等，2011）。这些研究确定，普瑞替韦（PTV）的最低有效剂量为0.3 mg/kg，每日两次口服给药。为了检测联合用药疗效的提高，本研究采用先前报道的实验设计（Quenelle等，2007），选择阿昔洛韦（ACV）10 mg/kg和普瑞替韦（PTV）0.3 mg/kg作为最高剂量。所有参与联合用药研究的小鼠均在病毒接种后72小时开始，每日两次给药，每次使用0.2 ml的赋形剂或药物溶液，以平衡应激反应。[3]

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在药代动力学研究中，分别从赋形剂组和药物治疗组中各取5只小鼠，在病毒接种后第8、9或10天处死，并在最后一次给药后进行无菌脑组织和血清采集。治疗分别在病毒接种后24、48或72小时开始，并纳入未感染小鼠作为对照。小鼠经腹腔注射氯胺酮-赛拉嗪麻醉后，使用毛细管经眼眶后静脉丛采集全血，血液收集于冰浴中的肝素化试管内。血液置于冰上保存，然后以134 × g离心7分钟。收集血浆并转移至新的试管中，立即冷冻于-80°C，直至采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）法测定普瑞替韦（PTV）浓度（详见下文）。小鼠采用二氧化碳-氧气窒息法处死，无菌取出脑组织样本。样本在乙醇-干冰上速冻，并冷冻于-80°C，直至采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）法测定普瑞替韦（PTV）浓度（详见下文）。[3]

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普瑞替韦的四种给药方案分别为：负荷剂量20 mg，随后每日服用5 mg；负荷剂量100 mg，随后每日服用25 mg；负荷剂量300 mg，随后每日服用75 mg；以及每周一次400 mg。安慰剂的给药方案与普瑞替韦相同。研究药物的服用周期为28天。[2]

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药物浓度的药代动力学分析显示，感染和未感染小鼠体内PTV的浓度均呈剂量依赖性。每日两次分别给予5 mg/kg、15 mg/kg或45 mg/kg剂量，其平均血浆浓度分别为2 µg/ml、4 µg/ml和9 µg/ml，且与感染状态或给药起始时间无关（图5）。同样，脑组织样本的平均浓度在5 mg/kg剂量组约为0.05 µg/g，在15 mg/kg剂量组约为0.11 µg/g，在45 mg/kg剂量组约为0.22 µg/g，且与感染状态或给药起始时间无关（图6）。 [3]药代动力学结果[4]单次递增剂量（试验1）[4]普瑞替韦血浆浓度-时间曲线的特征是初始吸收迅速，无明显滞后时间。给药后约1.5小时达到最大或接近最大血浆浓度，随后进入平台期，持续约4.5小时。该平台期的特征是出现多个吸收峰。平台期后，血浆浓度呈多指数下降，先是急剧下降（给药后4.5小时起），随后下降速度减缓（给药后5至5.5小时起）。大多数受试者在给药后8至16小时之间观察到普瑞替韦血浆浓度略有升高（图1A）。所有剂量水平的终末期浓度通常呈平行下降趋势（图1B）。女性受试者的普瑞替韦血浆浓度-时间曲线形状与男性受试者相似，但初始血浆浓度高于男性受试者（图2A和B）。表S2总结了所有剂量组单次给药后普瑞替韦的药代动力学参数。在5至480 mg剂量范围内，Cmax、AUC0-24h、AUC0-last和AUC0-inf均随剂量增加而增加。由于初始药代动力学采样方案（120小时）不足以表征末端消除相，因此无法准确测定5 mg和10 mg剂量组的AUC0-last和AUC0-inf。从480 mg到600 mg未观察到暴露量的进一步增加（表S2，图3）。在 20 至 480 mg 的剂量范围内，Cmax、AUC0-24h、AUC0-last 和 AUC0-inf 均未观察到与剂量比例关系的统计学显著偏差（表 S3）。不同剂量组的受试者间变异性 (%CV) 相当，Cmax 为 10% 至 51%，AUC0-inf 为 15% 至 32%。从 20 mg 开始的浓度-时间曲线可以准确测定消除半衰期。平均 t1/2z 为 52 至 83 小时。所有剂量组中，尿液中原形药物的排泄百分比均可忽略不计，不超过 0.3%。与男性相比，女性的普瑞替韦平均 Cmax 和 AUC0-inf 分别高出 1.5 倍和 1.1 倍（表 S4）。女性的 Cmax 受试者间变异性 (%CV) (33%) 高于男性 (10%)，而 AUC0-inf 的受试者间变异性相似（男性为 16%，女性为 17%）。

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食物效应（试验 2）[4]
与进食状态相比，空腹状态下普瑞替韦的平均血浆浓度上升更快，但平均最大血浆浓度更低。在空腹状态下观察到的给药后约 1.5 至 4.5 小时的平台期在进食状态下未观察到（图 4）。进食状态下的中位 tmax 较空腹状态更晚（5 小时 vs. 3.5 小时）。进食状态下的平均 Cmax 和 AUC0-last 均高于空腹状态（表 S5），最小二乘均值比分别为 133% 和 116%（表 S6）。进食状态和空腹状态之间的差异具有统计学意义，最小二乘均值比值的90%置信区间上限高于125%等效性限值。进食状态和空腹状态下均未观察到滞后时间。与空腹状态相比，进食状态下的Tmax延长了1.5小时；然而，这种差异不具有统计学意义。受试者间暴露量（Cmax、AUC0-last 和 AUC0-inf）的变异性（%CV）在进食状态下（13%-18%）低于空腹状态（22%-28%）。

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多次递增剂量（试验 3 和 5）[4]
在第 1 天和第 21 天（400 mg 剂量组为第 16 天），普瑞替韦的平均血浆浓度随剂量增加而升高（图 5）。单次给药（第 1 天）和多次给药（第 21/16 天）后，普瑞替韦的血浆浓度-时间曲线形状相似。所有剂量水平的末端相浓度通常呈平行下降趋势。表 S7 总结了所有剂量组单次给药和多次给药后普瑞替韦的药代动力学参数。在第 1 天和第 21 天，Cmax 和 AUC0-24h 均与剂量成比例增加。平均 Cmin 的增加幅度似乎略小。剂量从 100 mg 到 200 mg 呈比例变化。需要注意的是，400 mg 剂量组的 Cmin、Cmax 和 AUC0-24h 的准确性较低，因为采样仅在第 16 天给药后 3 小时开始。稳态通常在第 8 天至第 13 天之间达到。基于最小二乘均值比值，Cmax 和 AUC0-24h 的累积倍数分别为 4.4 倍至 5.0 倍和 4.4 倍至 5.1 倍（表 S6）。统计分析显示，在第 1 天和第 21/16 天，5 至 400 mg 剂量范围内的 Cmax 和 AUC0-24h 均未显示出与剂量比例的显著偏差，而 Cmin 在 5 至 400 mg 剂量范围内则观察到与剂量比例的显著偏差（表 S3）。剂量组间两两比较后，观察到统计学上的显著差异。在第 21 天，比较 100 mg 和 200 mg 剂量组的 Cmax，以及在第 21 天比较 100 mg 和 200 mg 剂量组与 100 mg 和 400 mg 剂量组的 AUC0-24h。对于 Cmin，两两比较显示 5 mg、25 mg 和 100 mg 剂量组与 200 mg 和 400 mg 剂量组之间存在统计学意义上的显著差异。

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绝对生物利用度（试验 4）[4]
静脉注射微剂量后，经剂量标准化的 14C 标记的普瑞替韦平均血浆浓度高于口服未标记普瑞替韦的血浆浓度（图 6A）。除曲线起始阶段外，14C 标记和未标记普瑞替韦的血浆浓度-时间曲线形状相似，这是由于静脉注射的 14C 标记普瑞替韦缺乏吸收期所致。普瑞替韦。终末相浓度呈平行下降趋势（图 6B）。¹⁴C 标记的普瑞替韦的平均 t_1/2z 值与未标记普瑞替韦的平均 t_1/2z 值相当。静脉给药后的系统清除率和分布容积与口服给药后观察到的平均 CL/F 值一致（已校正生物利用度）。基于平均生物利用度，普瑞替韦的绝对口服生物利用度为 73%（表 S8），而基于 AUC_last 和 AUC_0-inf 的统计分析，绝对口服生物利用度为 72%。口服未标记普瑞替韦和静脉剂量标准化的 ¹⁴C 标记普瑞替韦的最小二乘均值比值，AUC_0-last 和 AUC_0-inf 分别为 72.4% 和 71.9%（表 S6）。

安全性和耐受性 [4]
在试验 1、2、3、4 和 5（剂量最高至 200 mg 组）中，单次服用 5 至 600 mg 的普瑞替韦（试验 1 为 5-600 mg，试验 2 为 80 mg [空腹和餐后]，试验 4 为 100 mg 未标记普瑞替韦联合 3 μg 14C 标记普瑞替韦）以及每日一次服用 5 至 200 mg，持续 21 天（试验 3 和 5）均显示出良好的耐受性。试验 1 和 3 的最高剂量未达到最大耐受剂量。在不良事件、生命体征、心电图或常规临床实验室检查等安全性参数方面，未发现具有临床意义的显著结果或剂量相关趋势。许多报告的不良事件为非特异性不良事件，通常在健康志愿者的临床试验中观察到。安慰剂组和普瑞替韦组受试者发生不良事件的比例在临床上无显著差异（试验1分别为66.7%和56.9%；试验3分别为85.0%和79.2%；试验5分别为87.5%和79.2%）。未发生死亡、严重不良事件或其他显著不良事件。所有治疗相关不良事件的概述见表S9（试验1）、表S10（试验2）、表S11（试验4）和表S12（试验3和5）。
在试验5的400 mg剂量组中，几乎所有受试者（发生不良事件的受试者比例为100%）均观察到不良事件数量增加，尤其是在标准治疗（SOC）皮肤和皮下组织疾病方面。三名受试者因不良事件在第16天前停止治疗。由于这三名受试者的不良事件以及该剂量组中另外四名受试者的不良事件（见表S12和S13），试验在服用（最后一剂）试验药物后于第16天早晨提前终止。一名受试者（400 mg剂量组）出现全身健康状况恶化，经耳鼻喉科专家诊断，很可能是病毒感染；然而，也不能排除过敏反应的可能性。此外，安慰剂组受试者在标准治疗（SOC）皮肤和皮下组织疾病方面也出现了治疗期间出现的不良事件（TEAE）。实验室检查结果显示，5名400 mg剂量组受试者的免疫球蛋白E水平升高，中性粒细胞和白细胞水平降低，以及个别受试者出现C反应蛋白水平升高。安慰剂组也有一名受试者出现具有临床意义的免疫球蛋白E水平升高。 400毫克剂量组未观察到具有临床意义的生命体征和心电图参数变化。所有剂量组均未发生死亡、严重不良事件或其他显著不良事件。

[1]. Identification of Amino Acids Essential for Viral Replication in the HCMV Helicase-PrimaseComplex. Front Microbiol. 2018 Oct 23;9:2483.

[2]. Helicase-primase inhibitor Pritelivir for HSV-2 infection. N Engl J Med. 2014 Jan 16;370(3):201-10.

[3]. Efficacy of pritelivir and acyclovir in the treatment of herpes simplex virus infections in a mouse model of herpes simplex encephalitis. Antiviral Res. 2018 Jan;149:1-6.

[4]. First-in-Human, Single- and Multiple-Ascending-Dose, Food-Effect, and Absolute Bioavailability Trials to Assess the Pharmacokinetics, Safety, and Tolerability of Pritelivir, a Nonnucleoside Helicase-Primase Inhibitor Against Herpes Simplex Virus in Healthy Subjects. Clin Pharmacol Drug Dev. 2023 Jul;12(7):749-760.

普瑞替韦已用于预防2型单纯疱疹病毒（HSV-2）和生殖器疱疹的临床试验。
普瑞替韦是一种噻唑酰胺类解旋酶-引物酶抑制剂，对1型和2型单纯疱疹病毒（HSV-1和HSV-2）有效。普瑞替韦抑制解旋酶-引物酶复合物，阻止病毒DNA的解旋酶或引物酶催化循环，从而干扰DNA复制和增殖。该药物无需HSV胸苷激酶激活，且血浆半衰期比核苷类似物更长。

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据报道，靶向病毒解旋酶-引物酶复合物的新型抑制剂能够阻断单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒的复制，但它们对另一种疱疹病毒——人巨细胞病毒（HCMV）无效。 HCMV解旋酶-引物酶复合物（pUL105-pUL102-pUL70）对病毒DNA复制至关重要，因此可能是一个重要的抗病毒靶点。组成该复合物的各个亚基的功能尚待阐明。通过对疱疹病毒同源物进行序列比对，我们鉴定了pUL105假定ATP结合位点和pUL70假定锌指结构域中的保守氨基酸。对pUL105和pUL70中几个此类氨基酸的突变分析表明，它们对病毒复制至关重要。我们还通过同源建模构建了pUL105 N端结构域的理论结构，结果表明该结构域中突变的保守氨基酸可能参与ATP水解。[1]

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背景：普瑞替韦（Pritelivir）是一种病毒解旋酶-引物酶复合物抑制剂，在体外和单纯疱疹病毒（HSV）感染的动物模型中均表现出抗病毒活性。我们测试了普瑞替韦在健康人群中对生殖器疱疹病毒2型（HSV-2）感染者的疗效和安全性。方法：我们随机将156名有生殖器疱疹病史的HSV-2阳性患者分配至四个口服普瑞替韦组（每日5、25或75毫克，或每周400毫克）或安慰剂组，疗程为28天。受试者每日采集生殖器拭子进行HSV-2检测，采用聚合酶链式反应（PCR）法。受试者还需记录生殖器体征和症状。主要终点为生殖器HSV脱落率。[2]

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本研究表明，普瑞替韦作为首个用于治疗单纯疱疹病毒感染的新型抗病毒药物，能够有效抑制生殖器疱疹患者的病毒脱落和病变发展。需要开展进一步研究，以评估普瑞替韦在治疗单纯疱疹病毒（HSV）感染方面的临床获益程度，并确定其在治疗重症HSV疾病和降低性传播方面的有效性。2013年5月，由于一项针对猴子的毒理学研究中出现了无法解释的皮肤和血液学异常，美国食品药品监督管理局（FDA）暂停了普瑞替韦的临床开发。该研究中，猴子每日接受的剂量范围为每公斤体重75毫克至1000毫克（这些剂量是人类75毫克剂量的70倍至900多倍）。目前，研究人员正在调查猴子出现这些异常的原因；在本次试验中未观察到类似异常。 [2]

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在本研究中，PTV在体内对HSV-1和HSV-2（包括ACV耐药株）均表现出强效的抗病毒活性。当治疗延迟至病毒接种后72小时进行时，PTV的抗病毒活性显著高于先前报道的治疗起始时间（病毒接种后6小时）（Betz等人，2002）。将治疗延迟至感染后72小时进行被认为更能模拟临床情况，即患者在出现症状后就医，之后才接受治疗。PTV与ACV联合用药的活性表明，PTV对HSV-2 MS株至少具有叠加效应，甚至可能具有协同效应。我们此前在一项类似的研究中报道了PTV对HSV-1 E-377株的潜在协同作用，该研究中，10 mg/kg的ACV剂量与0.3 mg/kg的PTV剂量联合使用，显著提高了生存率，优于单独使用任一药物（Quenelle等人，2016）。尽管还需要进一步的研究来正式证实协同效应，但数据表明，PTV单独使用或与ACV联合使用可能成为HSV脑炎的一种新的治疗选择，因为ACV的疗效并不理想，需要更有效的疗法。此外，这两种化合物不同的分子靶点（PTV靶向HSV解旋酶-引物酶复合物，ACV靶向病毒聚合酶）将大大降低耐药性产生的风险。而且，正如我们的模型所示，由于作用机制不同，PTV疗法可以用于治疗ACV耐药感染，这在HSV脑炎中也有报道（Kakiuchi等人，2012；Schepers等人，2014；Bergmann等人，2017）。同样重要的是，我们能够证实PTV存在于血浆和脑组织中。在未感染和已感染动物的脑组织中均检测到了PTV，并且脑组织中的PTV暴露量与血浆中的暴露量成正比。由于单纯疱疹病毒（HSV）脑炎是由病毒在大脑中复制引起的，导致急性炎症、充血和/或出血（Whitley 2006），因此药物在中枢神经系统内的递送和活性对于治疗该疾病至关重要。在之前的研究（Betz等，2002）中，与安慰剂和伐昔洛韦治疗相比，PTV治疗可显著降低大脑皮层的病毒载量。因此，PTV在大脑中的暴露量被认为足以发挥疗效。在针对生殖器HSV-2感染患者的人体剂量探索临床试验中，PTV可减少病灶和病毒脱落。此外，每日治疗4周后未发现HSV-2耐药分离株（Edlefsen等，2016）。这些结果以及本文提出的新数据表明，PTV未来可能对治疗HSV脑炎有效。[3]

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新型单纯疱疹病毒解旋酶-引物酶抑制剂普瑞替韦的药代动力学和安全性在5项I期临床试验中进行了评估：一项单次递增剂量试验、两项多次递增剂量试验、一项食物影响试验以及一项在健康男性受试者中进行的绝对生物利用度试验。单次递增剂量试验纳入了一组健康女性受试者。单次给药后，普瑞替韦的药代动力学在480 mg以内呈线性关系；每日一次多次给药后，在400 mg以内也呈线性关系。半衰期为52至83小时，稳态血药浓度在8至13天内达到。与男性受试者相比，女性受试者的血浆峰浓度和血浆浓度-时间曲线下面积（从0时到最后一次可定量浓度）分别高出1.5倍和1.1倍。空腹状态下的绝对生物利用度为72%。高脂饮食后，普瑞替韦达峰时间延迟1.5小时，血浆峰浓度和血浆浓度-时间曲线下面积（从0时到最后一次可定量浓度）分别升高33%和16%。单次服用600 mg普瑞替韦以及每日多次服用200 mg普瑞替韦均安全且耐受性良好。考虑到每日一次100 mg的治疗剂量，普瑞替韦在健康受试者中展现出良好的安全性、耐受性和药代动力学特征，支持其进一步开发。[4]

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研究测试了5至600 mg（单次给药）和5至400 mg（每日一次给药）的宽剂量范围。由于80 mg剂量下的药代动力学特征已得到充分描述，与其他剂量水平一致，且被认为安全耐受性良好，因此在80 mg剂量下测试了性别效应和食物效应，在100 mg剂量下测试了绝对生物利用度。此外，基于药代动力学/药效学计算和II期临床试验结果，确定治疗剂量为每日一次100 mg，该剂量完全在评估范围内。所有I期临床试验均在健康男性受试者中进行。由于在首次人体试验（SAD，试验1）开始时，尚无关于母体毒性和胚胎/胎儿毒性的具体毒理学数据，因此最初仅纳入男性受试者。在首次人体SAD试验期间，两项第二阶段研究（大鼠和兔）的结果允许纳入育龄妇女。因此，纳入了一组女性受试者，以获得关于普瑞替韦药代动力学性别差异的基本信息。未来试验将收集更多性别数据。口服给药后，普瑞替韦的血浆浓度-时间曲线特征为：初始吸收迅速，在1.5至4.5小时（空腹状态下）达到平台期，并在给药后8至16小时普瑞替韦浓度略有升高。这些特性可能与所给药的甲磺酸普瑞替韦的溶解度（电离度为5.2）的pH依赖性有关，低pH值有利于其溶解。¹² 给药后8至16小时观察到的血浆浓度升高可能是由其他吸收过程（例如肠肝循环）引起的。单次给药后，普瑞替韦的药代动力学呈线性关系，最高剂量可达480 mg；每日一次多次给药后，最高剂量可达400 mg（测试的最高多次给药剂量）。不同剂量组之间的剂量标准化参数存在一些波动，考虑到每个剂量组的受试者人数较少（n = 6），这并不罕见。单次服用600 mg普瑞替韦后，所有暴露参数均未进一步升高，表明胃肠道吸收已达到饱和。该剂量水平下CL/F的升高证实了吸收的减少。多次服用普瑞替韦后，通常在第 8 至 13 天之间达到稳态；因此，尽管 400 mg 剂量组在第 16 天测定的药代动力学参数被认为是近似值（因为该剂量组的首次药代动力学样本是在给药后 3 小时采集的），但这些参数仍可代表稳态。稳态时的药物累积量约为初始值的 5 倍。在 400 mg 剂量下，单次给药试验 (SAD) 中的 AUC0-inf 与多次给药试验 (MAD) 中的 AUC0-24h 在稳态时相似，表明普瑞替韦的药代动力学与时间无关。与男性受试者相比，女性受试者的初始血浆浓度更高，因此平均 Cmax 也更高（1.5 倍），而 AUC0-inf 略高（1.1 倍）。男性受试者的平均CL/F值比女性受试者高1.1倍，但在校正个体体重后，该值下降了约10%（表S4）。由于这些差异很小，且比较样本量非常小（每组n=6），因此无法就性别或体重对普瑞替韦药代动力学的影响得出明确结论。未来将纳入更多女性受试者的研究对此进行进一步探讨。在空腹和餐后（高脂早餐）条件下，以80 mg剂量评估了食物的影响。高脂早餐后，由于初始吸收减慢，中位tmax比空腹条件延迟了1.5小时。平均Cmax和AUC0-last分别升高了33%和16%。应谨慎解读这种升高的临床意义，因为更常规的膳食可能对普瑞替韦的药代动力学影响较小。总体而言，由于普瑞替韦口服生物利用度高且受食物影响小，未来试验中可不受进食影响服用。在绝对生物利用度试验中测定了静脉注射普瑞替韦后的药代动力学。采用灵敏的加速器质谱（AMS）技术，仅需3 μg（9.3 kBq）剂量即可在血浆中检测到¹⁴C标记的普瑞替韦，从而最大限度地减少了辐射暴露。静脉注射时间与100 mg口服给药后的达峰时间（t_max）一致，以确保微剂量的药代动力学能够反映药理学相关血浆浓度下的药代动力学。口服生物利用度未显示任何吸收问题，且基于生物利用度计算结果显示其含量较高（72%），因此支持口服给药。观察到的¹⁴C标记普瑞替韦的平均分布容积（79 L）显著大于体液总量（±42 L），表明普瑞替韦分布于组织中。静脉输注后的平均清除率（0.82 L/h）远低于人体肝血流量（±87 L/h），表明普瑞替韦是一种低清除率药物。口服100 mg后，CL/F为1.18 L/h，反映了其绝对生物利用度。健康男性受试者单次口服高达600 mg的普瑞替韦，女性受试者单次口服高达80 mg的普瑞替韦，以及每日一次、连续21天、每次高达200 mg的多次给药，均耐受良好。安全性参数方面未发现具有临床意义的显著结果，且治疗期间出现的不良事件（TEAE）与剂量之间无明显趋势或相关性。在安慰剂对照试验中，安慰剂组和普瑞替韦组受试者出现TEAE的人数、类型和发生率均无显著临床差异。每日一次服用 400 mg 时，多名受试者出现了属于标准治疗（SOC）皮肤和皮下组织疾病范畴的不良事件（其中 2 例为中度，其余为轻度），因此第 5 项试验提前终止。值得注意的是，这种情况发生在服用普瑞替韦和安慰剂后，且普瑞替韦的暴露量约为每日一次 100 mg 给药后预期治疗剂量/暴露量的 4 倍。皮肤观察结果通常较轻且迅速消退，这些影响局限于皮肤表面且具有自限性，未出现脓疱反应和严重全身性疾病的迹象（未出现伴有嗜酸性粒细胞增多和全身症状的药物疹）。由于普瑞替韦组和安慰剂组中有几名受试者出现病毒感染的体征和症状，这可能是导致不良事件的原因；然而，普瑞替韦的影响不能完全排除。普瑞替韦是一种碳酸酐酶同工酶抑制剂。¹⁵ 已获批准的碳酸酐酶抑制剂，例如乙酰唑胺，在治疗剂量下使用时，与以下不良反应相关：尿急、机能下降、听力障碍、酸中毒、高钙尿症、抑郁和肝功能损害。因此，在试验1中，通过测量肾脏对Na⁺、K⁺和Cl^-的排泄量来评估其对碳酸酐酶的潜在抑制作用。在给药后48小时内的所有收集期内，各剂量组的尿液样本中均未检测到对钠、钾和氯的肾脏排泄量的影响，表明在所给剂量下未观察到明显的碳酸酐酶抑制作用。基于这些试验的结果，选择合适的给药方案进行进一步开发，以在整个给药间隔内达到抑制病毒复制的谷浓度。根据体外 50% 有效浓度 12 ng/mL，计算得出 HSV-2 的 90% 有效浓度 (EC90) 为 66 ng/mL，并将其用作阈值。6 在校正 MAD 试验中的血浆蛋白结合率（2.8%，通过平衡分析确定；数据存档）后，每日一次 5、25、100 和 200 mg 给药方案的游离稳态谷浓度分别为 ≈5、23、105 和 157 ng/mL，表明每日一次 100 mg 及以上的剂量将导致整个给药间隔内的血浆浓度超过 EC90。基于这些数据，目前正在进行的针对免疫功能低下且对阿昔洛韦耐药的黏膜皮肤HSV感染患者的3期临床试验（PRIOH-1，NCT03073967）选择了每日一次100 mg的剂量，并且该剂量已成功应用于一项国际早期准入计划，用于治疗对阿昔洛韦和膦甲酸钠耐药或对阿昔洛韦和膦甲酸钠不耐受的免疫功能低下HSV感染患者。^{16, 17}总体而言，普瑞替韦的药代动力学特征包括：口服生物利用度高，支持口服给药；在大剂量范围内呈剂量依赖性；分布容积（Vd）表明其分布于血管外组织；从每日一次100 mg起，谷浓度均超过体外抑制病毒复制的EC90值；安全性和耐受性数据支持每日一次高达200 mg的给药方案。这些结果支持将普瑞替韦作为一种新的HSV药物进行进一步开发，并探索能够产生足够高浓度的给药方案。持续抑制 HSV 复制所需的浓度。[4]

C19H24N4O7S3

516.61

516.08

1428321-10-1

Pritelivir;348086-71-5;Pritelivir mesylate;1428333-96-3

71515453

White to light yellow solid powder

207

3

11

5

33

709

0

C1=NC(C2C=CC(=CC=2)CC(N(C)C2SC(S(N)(=O)=O)=C(N=2)C)=O)=CC=C1.S(=O)(O)(=O)C.O

QPIDAZSAUYNBAC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H18N4O3S2.CH4O3S.H2O/c1-12-17(27(19,24)25)26-18(21-12)22(2)16(23)11-13-6-8-14(9-7-13)15-5-3-4-10-20-15;1-5(2,3)4;/h3-10H,11H2,1-2H3,(H2,19,24,25);1H3,(H,2,3,4);1H2

methanesulfonic acid;N-methyl-N-(4-methyl-5-sulfamoyl-1,3-thiazol-2-yl)-2-(4-pyridin-2-ylphenyl)acetamide;hydrate

Pritelivir mesylate hydrate; 1428321-10-1; Pritelivir (mesylate hydrate); 7EX4CZ4HYG; AIC316 (mesylate hydrate); Pritelivir mesylate monohydrate; CHEMBL5194635; SCHEMBL14795919;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。