| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Tim9-Tim10 complex (a chaperone complex of the mitochondrial inner membrane TIM22 translocation pathway)[1]
Identified via chemical-genetic synthetic lethality screening; selective against the tim10-1 mutant with an MIC50 of approximately 1 μM.[1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
- 酵母细胞生长抑制（MIC50）: 在含葡萄糖的YPD培养基中，MitoBloCK-1 对tim10-1突变株的半数最大抑制浓度（MIC50）约为1 μM；对tim10-73突变株的MIC50约为2 μM；对tim9-3突变株的MIC50约为11.34 μM。对野生型TIM10菌株的MIC50 >200 μM。[1]
- 线粒体蛋白输入抑制: 在从tim10-1 tim9S抑制子株系分离的线粒体中，MitoBloCK-1 呈浓度依赖性抑制TIM22通路底物的输入。1 μM或更高浓度的MitoBloCK-1 可显著抑制AAC的输入；其对磷酸载体（PiC）、Tom40、Tim22和Tafazzin的输入也有抑制作用。然而，该化合物不影响TIM23通路底物（如Su9-DHFR、细胞色素b2-DHFR、Hsp60）以及Mia40/Erv1通路底物（如Tim9、Tim10、Mia40）的输入。[1] - 对线粒体功能的非特异性影响: MitoBloCK-1 不影响线粒体呼吸（在25 μM浓度下）或膜电位（Δψ），也不引起线粒体膜非特异性通透或释放基质、内膜、膜间隙及外膜蛋白。它不改变Tim9-Tim10复合物的稳态稳定性。[1] - 对哺乳动物细胞的活性: 用25 μM和50 μM的MitoBloCK-1 处理哺乳动物细胞后，细胞活力呈剂量依赖性显著下降。[1] - 对分离的小鼠肝线粒体的影响: 在分离的小鼠肝线粒体中，25 μM的MitoBloCK-1 抑制了AAC的输入，但不影响TIM23通路底物（如Su9-DHFR和Hsp60）的输入。[1] |
| 酶活实验 |
- 酵母生长抑制测定（MIC50）: 使用自动化384孔板技术进行测定。将化合物在100% DMSO中连续稀释，然后通过针转移添加到含有YPD培养基中特定酵母菌株（起始OD600 = 0.0002）的测定板孔中。将板在25°C下孵育直至对照孔（含1% DMSO的tim10-1突变株）的OD600达到约0.8，然后在板读取器上测量OD600以评估生长情况。[1]
- 线粒体呼吸测定（氧电极）: 将分离的酵母线粒体置于氧电极室中，加入NADH启动呼吸。待稳态呼吸建立后，加入MitoBloCK-1 或溶剂对照，并记录耗氧速率。作为阳性对照，加入质子载体CCCP以解偶联电子传递链并验证测定系统的响应性。[1] - 线粒体膜电位测定（荧光染料）: 使用罗丹明123荧光染料测定分离线粒体的膜电位。该染料在偶联线粒体中积累并被猝灭。将线粒体与MitoBloCK-1 或溶剂对照孵育后，加入染料并监测荧光变化。加入CCCP会导致染料释放和荧光增加，作为阳性对照。[1] - 交联和免疫沉淀: 将放射性标记的AAC前体输入到tim10-1 tim9S线粒体中，同时存在MitoBloCK-1 或溶剂对照。输入后，将样品与巯基特异性同型双功能交联剂BMH一起孵育。随后将样品分成等份，使用针对Tim9、Tom22、Tom40或Tim22的特异性抗体进行免疫沉淀，并通过SDS-PAGE和放射自显影进行分析。[1] |
| 细胞实验 |
- 哺乳动物细胞活力测定（MTT）: 用递增浓度的MitoBloCK-1（如25 μM和50 μM）处理哺乳动物细胞。处理后，使用MTT [1-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-3,5-二苯基甲瓒] 分析法测定细胞活力。[1]
- 分离的小鼠肝线粒体蛋白输入实验: 从小鼠肝脏中分离线粒体。将放射性标记的前体蛋白（如AAC、Su9-DHFR、Hsp60）与分离的线粒体在含有MitoBloCK-1（25 μM）或溶剂对照的输入缓冲液中一起孵育。在指定时间点取出等份试样，并用蛋白酶处理以去除未输入的precursor。然后离心分离线粒体，通过SDS-PAGE和放射自显影分析样品。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
研究表明：在酵母中，该化合物对野生型TIM10菌株的MIC50 >200 μM，显示出对tim10突变株的选择性毒性。在哺乳动物细胞中，25 μM和50 μM的MitoBloCK-1 处理可剂量依赖性地显著降低细胞活力。在25 μM浓度下，该化合物未改变分离酵母线粒体的呼吸功能或膜电位，也未引起非特异性膜通透。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- 作用机制: MitoBloCK-1 抑制TIM22蛋白输入通路的早期步骤。它阻碍Tim9-Tim10复合物与底物的结合，导致转运底物（如AAC）无法跨越线粒体外膜。交联和免疫沉淀实验显示，在MitoBloCK-1 存在下，Tim9与AAC的交联产物减少。[1]
- 底物特异性: 利用MitoBloCK-1 作为探针，确定了Tim9-Tim10复合物的底物特异性。该化合物抑制Tim22和Tafazzin的输入，但不抑制Tim23的输入，表明Tim23的转运依赖于Tim8-Tim13复合物而非Tim9-Tim10复合物。[1] - 化学结构类似物研究: 对MitoBloCK-1 的结构-活性关系（SAR）进行了初步研究。测试了侧链修饰或三环核心结构改变的类似物。类似物D（侧链硫脲修饰）在50 μM浓度下可抑制AAC输入，而类似物A、B和C则无抑制活性，表明环结构和侧链的特定性质对MitoBloCK-1 的活性至关重要。[1] - 筛选方法: MitoBloCK-1 是通过对约40,000个化合物的化学文库进行高通量筛选发现的，筛选使用tim10-1温度敏感型酵母突变株，在允许温度25°C下寻找导致合成致死的化合物。随后使用野生型TIM10菌株和tim10-1 TIM10回复菌株进行反筛选以确认特异性。[1] |
| 分子式 |
C14H14BRN3O2S
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| 分子量 |
368.248860836029
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| CAS号 |
373370-73-1
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| SMILES |
BrC1C(=C(C=NNC(N)=S)C2=C(C=1)OC1CCCCC=12)O
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| 别名 |
MitoBloCK1; MB-1; MitoBloCK-1; 373370-73-1; MLS000777121; CHEMBL3197716; SCHEMBL13465732;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7155 mL | 13.5777 mL | 27.1555 mL | |
| 5 mM | 0.5431 mL | 2.7155 mL | 5.4311 mL | |
| 10 mM | 0.2716 mL | 1.3578 mL | 2.7155 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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