PROTAC AR Degrader-12

PROTAC AR Degrader-12 targets the androgen receptor (AR) coactivator binding site (AR-CBS). AR is a nuclear hormone receptor that plays a critical role in the development and progression of prostate cancer and breast cancer. This PROTAC degrader also effectively blocks estrogen receptor alpha (ERalpha) signaling through a dual mechanism involving ERalpha protein downregulation and suppression of its transcriptional activity. In addition, it targets estrogen receptor alpha (ERalpha) indirectly and significantly inhibits the mRNA expression of FOXA1, GREB1, SRC, and PELP1.

PROTAC AR Degrader-12（化合物 18o）对 MCF-7 (IC50 = 0.13 μM) 和 LCC2 细胞 (IC50 = 0.54 μM) 均表现出良好的抑制活性，并且对临床相关的突变体具有广谱疗效。它对 MCF-7D538G (IC50 = 0.66 μM)、MCF-7Y537S (IC50 = 0.44 μM) 和 MCF-7EGFR (IC50 = 0.52 μM) 均表现出强烈的亚微摩尔级抑制作用 [1]。PROTAC AR Degrader-12 (0.01-2 μM，24 小时) 可以剂量依赖性地有效降解 MCF-7 细胞中的 AR 蛋白 (DC50 = 0.72 μM) [1]。 PROTAC AR Degrader-12（1 μM，0–24 h）对 MCF-7 细胞中 AR 的降解表现出时间依赖性效应[1]。PROTAC AR Degrader-12（0.01–2 μM，24 h）导致 MCF-7 细胞中 ERα 蛋白表达呈浓度依赖性下调[1]。PROTAC AR Degrader-12（0.01–2 μM，12–24 h）显著下调 MCF-7D538G、MCF-7Y537S、MCF-7EGFR、LCC2 和 T47D 细胞中 ERα 蛋白表达，但未能下调 PC9 细胞中 ERβ 蛋白表达[1]。PROTAC AR Degrader-12（1 μM，24 h）通过间接机制而非直接靶向降解 MCF-7 细胞中的 CBS 来降低 ERα 的表达[1]。 PROTAC AR Degrader-12（0-5 μM，0-24 h）通过转录后降解降低MCF-7细胞中AR蛋白的表达，而ERα的减少则归因于转录抑制[1]。PROTAC AR Degrader-12在AR过表达但ERα缺陷的前列腺癌细胞LNCaP中表现出强效的抗增殖活性（IC50 = 0.46 μM），但在AR阴性的MDA-MB-231细胞中，其抗增殖活性显著降低（IC50 > 30 μM）[1]。PROTAC AR Degrader-12能够有效稳定高温下的AR蛋白，但对ERα蛋白的保护作用较弱，这表明PROTAC AR Degrader-12在LCC2细胞中与AR结合，但不与ERα结合[1]。 PROTAC AR Degrader-12 (1 μM, 24 h) 显著抑制 MCF-7 细胞中 FOXA1、GREB1、SRC 和 PELP1 的 mRNA 表达 [1]。PROTAC AR Degrader-12 (1-10 μM, 48 h) 诱导 MCF-7 和 LCC2 细胞发生 S 期细胞周期阻滞 [1]。

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体外实验表明，PROTAC AR Degrader-12（化合物 18o）对 MCF-7 乳腺癌细胞和 LCC2 细胞均表现出良好的抑制活性，IC50 分别为 0.13 uM 和 0.54 uM，且对多种临床相关突变体均具有广谱抑制作用。该化合物对 MCF-7D538G（IC50 = 0.66 uM）、MCF-7Y537S（IC50 = 0.44 uM）和 MCF-7EGFR（IC50 = 0.52 uM）均表现出亚微摩尔级的强效抑制作用。PROTAC AR Degrader-12（0.01-2 uM，24 小时）能以剂量依赖的方式有效降解 MCF-7 细胞中的 AR 蛋白，DC50 为 0.72 uM。该化合物（1 uM，0-24 小时）对 AR 蛋白的降解作用呈时间依赖性。它还能浓度依赖性地下调MCF-7细胞中ERα蛋白的表达，并显著下调MCF-7D538G、MCF-7Y537S、MCF-7EGFR、LCC2和T47D细胞中ERα蛋白的表达，但不能下调PC9细胞中ERβ的表达。ERα的减少是由于转录抑制，而AR的减少则通过转录后降解发生。PROTAC AR降解剂-12在AR过表达但ERα缺陷的前列腺癌细胞LNCaP中也显示出强效的抗增殖活性（IC50 = 0.46 uM）。

PROTAC AR Degrader-12（化合物 18o）（5-10 μM/kg，腹腔注射，隔日一次）显著抑制了 MCF-7 细胞和 LCC2 异种移植小鼠的肿瘤生长，促进了 AR 蛋白修饰和 ERα 信号抑制，且不引起体重减轻或其他毒性[1]。

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在体内实验中，PROTAC AR Degrader-12 在乳腺癌异种移植模型中展现出显著的抗肿瘤活性。该化合物能有效降解肿瘤组织中的雄激素受体（AR），并以剂量依赖的方式抑制肿瘤生长。它还能在体内阻断雌激素受体α（ERα）信号通路，从而发挥其在雌激素受体阳性乳腺癌中的抗增殖作用。该化合物可用于乳腺癌研究，并具有治疗AR阳性和ER阳性恶性肿瘤的潜在应用价值。现有文献中尚未完全描述体内给药、肿瘤生长抑制率和药效学指标的具体细节，但已在专利申请中有所报道。

由于 PROTAC AR Degrader-12 是一种双功能 PROTAC 分子而非传统抑制剂，因此尚未建立针对该酶/受体结合的特定方案。对于 AR 结合亲和力，可使用 [3H]R1881 或荧光标记的 AR 配体以及 LNCaP 细胞裂解液或纯化的 AR 配体结合域进行标准放射性配体结合实验，以测定 PROTAC 的 AR 结合组分。对于 VHL 结合，可使用重组 VHL-elongin B-elongin C 复合物进行荧光偏振或表面等离子共振实验，以评估 E3 连接酶配体组分的亲和力。对于三元复合物 (AR:PROTAC:VHL) 的形成，可使用标记的 AR 和 VHL 蛋白进行 AlphaScreen 或 TR-FRET 实验，以检测三元复合物的形成。使用纯化的 E1、E2 和 E3 连接酶组分，以 AR 为底物进行体外泛素化实验，可以测定 PROTAC 诱导的泛素化。

Western Blot 分析[1]
细胞类型： MCF-7 细胞
测试浓度： 0.01 μM、0.1 μM、1 μM、2 μM
孵育时间： 0 小时、3 小时、6 小时、12 小时、18 小时、24 小时
实验结果： 有效且呈剂量依赖性地降解 AR 蛋白。对 AR 降解具有时间依赖性效应。导致ERα蛋白表达呈浓度依赖性下调。

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实时定量PCR[1]
细胞类型： MCF-7细胞
测试浓度： 0 μM、1 μM、5 μM
孵育时间： 0 h、4 h、24 h
实验结果： AR mRNA表达随浓度增加而显著升高；ERα mRNA表达下调。24小时后，ERα靶基因（TFF1、PGR）和AR靶基因（PSA、TMPRSS2）的表达显著受到抑制。FOXA1、GREB1、SRC和PELP1的mRNA表达也显著受到抑制。

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PROTAC AR Degrader-12 的体外细胞实验方案包括：将 AR 阳性和 ER 阳性的乳腺癌细胞系（如 MCF-7、T47D、LCC2）以及前列腺癌细胞系 LNCaP 在含 10% FBS 的 RPMI-1640 或 DMEM 培养基中，于 37℃、5% CO2 条件下培养。将细胞接种于 6 孔板（2×10⁵ 个细胞/孔）用于蛋白质印迹分析，或接种于 96 孔板（5,000-10,000 个细胞/孔）用于细胞活力检测。用不同浓度的 PROTAC AR Degrader-12（0.01-2 uM）处理细胞 4-24 小时（降解时间进程实验），或用 0.01-5 uM 处理细胞 24 小时（剂量反应实验）。测定 DC50 时，用 0.01-2 uM 处理细胞 24 小时。采用特异性抗体进行蛋白质印迹法检测AR和ERα蛋白水平，以GAPDH或β-actin作为内参。处理72小时后，采用MTT或CellTiter-Glo法检测细胞活力。同时，在LNCaP细胞中进行增殖实验（0.01-5 uM，72小时）。所有实验均重复三次。

动物/疾病模型：将 MCF-7 人乳腺癌细胞（5 × 10⁶ 个细胞）[1] 皮下注射到 Balb/c 裸鼠（雌性，4 周龄）中。
剂量： 5 μM/kg，10 μM/kg
给药途径： 腹腔注射，隔日一次
实验结果： 10 μM/kg 剂量下，肿瘤生长受到显著抑制。肿瘤体积缩小，Ki67 增殖标志物表达降低。肿瘤组织中 AR 和 ERα 蛋白水平下调。未观察到体重显著变化或明显的毒性反应。

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动物/疾病模型： 将耐他莫昔芬的LCC2人乳腺癌细胞（5 × 10⁶个细胞）[1]皮下注射到Balb/c裸鼠（雌性，4周龄）中。
剂量： 5 μM/kg，10 μM/kg
给药途径： 腹腔注射，隔日一次
实验结果： 10 μM/kg剂量下肿瘤生长抑制率（TGI）达到58%。Ki67表达降低，AR和ERα蛋白表达下调。体重保持稳定，未见毒性反应。

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PROTAC AR Degrader-12 的体内研究采用标准动物实验方案，即在免疫缺陷小鼠（裸鼠或 NSG 小鼠，乳腺癌模型使用雌性小鼠，前列腺癌模型使用雄性小鼠）中建立异种移植模型。将约 5×10⁶ 个 MCF-7 细胞（补充雌激素颗粒）或 LNCaP 细胞皮下注射。当肿瘤体积达到约 150-200 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n=5-10）。PROTAC AR Degrader-12 以 10-50 mg/kg 的剂量，溶于 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80 或 45% 生理盐水等溶剂中，通过腹腔注射或静脉注射给药。给药频率可为每日一次或隔日一次。每 2-3 天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽² / 2）。监测体重作为毒性指标。研究结束时，切除肿瘤并进行处理，通过蛋白质印迹法和免疫组织化学法分析雄激素受体（AR）和雌激素受体α（ERα）蛋白。可能采集血液用于药代动力学分析。所有操作均需获得机构动物伦理委员会的批准。

目前尚未发表关于PROTAC AR Degrader-12的直接药代动力学研究。作为一种分子量在800-1000 Da范围内的PROTAC分子（PROTAC的典型分子量），其口服生物利用度可能中等至较差。在动物研究中，该化合物可能采用静脉或腹腔注射给药。半衰期、清除率、分布容积和生物利用度等药代动力学特性取决于分子的具体结构。该化合物可溶于DMSO，并可配制成注射剂。现有文献中未报道具体的药代动力学参数。

根据安全数据，PROTAC AR Degrader-12 仅供研究使用，不可用于人体治疗。应遵循标准实验室安全预防措施：佩戴防护手套、护目镜和实验服。在通风良好的通风橱内操作。避免吸入、吞咽以及接触皮肤和眼睛。该化合物应以粉末形式储存于 -20℃，最长可保存 3 年；或在 4℃ 下储存 2 年。溶液形式应储存于 -80℃，最长可保存 6 个月；或在 -20℃ 下储存 1 个月。由于 PROTAC 可降解 AR 和 ERα，因此在操作时应考虑其潜在的激素影响，尤其是孕妇或可能怀孕的人群。本产品不可用于人体治疗。

[1]. Kill Two Birds with One Stone: An Efficient and Potent AR CBS-Targeted Degrader Reverses Breast Cancer Resistance via Concurrent AR Degradation and ERα Transcriptional Suppression. J Med Chem. 2025 Nov 27;68(22):24136-24167.

PROTAC AR Degrader-12 是一种高效的 PROTAC 类药物，靶向雄激素受体 (AR) 共激活因子结合位点 (AR-CBS)。它通过泛素-蛋白酶体系统 (UPS) 途径诱导 AR 降解，并通过影响 DNA 复制和细胞分裂来抑制肿瘤细胞生长。该化合物不仅能有效降解 AR，还能强效抑制 MCF-7 细胞以及多种突变或耐药乳腺癌细胞的增殖，包括那些携带 ESR1 突变（D538G、Y537S）的细胞，这些突变赋予了内分泌治疗耐药性。PROTAC AR Degrader-12 通过双重机制有效阻断雌激素受体 α (ERα) 信号通路，该机制涉及 ERα 蛋白的下调及其转录活性的抑制。它显著抑制 FOXA1、GREB1、SRC 和 PELP1 的 mRNA 表达，这些基因是 ERα 的关键共调节因子。该化合物可用于乳腺癌研究，并可能应用于前列腺癌和内分泌耐药性乳腺癌的治疗。目前尚无临床试验数据；该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体治疗。

C57H76N8O10S

1065.33

Typically exists as solids at room temperature

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。