ABT-702

ABT-702 specifically targets adenosine kinase (AK), a key enzyme in the purine salvage pathway that phosphorylates adenosine to AMP. AK is widely expressed in the brain, heart, kidney, and other tissues. By inhibiting AK (IC50 = 1.7 nM), ABT-702 prevents the conversion of adenosine to AMP, thereby increasing the concentration of endogenous adenosine at its receptors (A1, A2A, A2B, A3). This elevation of adenosine leads to activation of adenosine receptors, which then mediate downstream effects: A1 receptors produce analgesia and neuroprotection, A2A receptors have anti-inflammatory effects, etc. ABT-702 is highly selective for AK over other adenosine metabolizing enzymes (such as adenosine deaminase) and over a panel of 50 other receptors and enzymes (IC50 >10 microM). The dihydrochloride salt form improves aqueous solubility for in vivo administration.

ABT-702 (5-50 μM, 30 分钟) 通过 A2AAR 以剂量依赖的方式抑制 amadori 糖基化白蛋白 (AGA) 诱导的小胶质细胞中 TNF-α 的释放 [2]。

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体外实验表明，ABT-702 能有效抑制纯化的人重组腺苷激酶，IC50 值为 1.7 nM。在细胞实验中，用 ABT-702（0.1-10 microM）处理人 HeLa 细胞或大鼠皮层神经元 30-60 分钟后，细胞外腺苷水平呈浓度依赖性升高（通过高效液相色谱法测定，升高 2-5 倍）。这种升高与腺苷 A1 受体的激活相关，可通过抑制表达人 A1 受体的 CHO 细胞中福斯克林刺激的 cAMP 积累来检测（A1 受体激活的 EC50 值是通过抑制 AK 间接实现的）。 ABT-702 在 1 microM 浓度下可使大鼠海马切片中的神经元兴奋性（场兴奋性突触后电位，fEPSP）降低 50%，该作用可被 A1 受体拮抗剂 DPCPX（8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤）逆转。在巨噬细胞系（RAW 264.7）中，ABT-702（1-10 microM）通过激活 A2A 受体，可降低 LPS 诱导的 TNF-α 和 IL-6 的产生（降低 40-60%）。该化合物在浓度高达 30 microM 时无细胞毒性。这些数据证实 ABT-702 可作为研究内源性腺苷作用的工具。

ABT-702（0.6–100 µmol/kg，腹腔或阑尾注射，单次给药）已显示出与剂量相关的镇痛和抗炎作用[1]。ABT-702（1.5 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续8周）可通过调节信号传导、氧化和细胞死亡来改善糖尿病的进展[2]。ABT-702（3 mg/kg，腹腔注射，FDG注射前10分钟局部给药）可显著促进小脑、中脑和延髓的局部消退[3]。

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在体内，ABT-702 已在多种临床前模型中展现出显著疗效。在小鼠福尔马林试验（持续性疼痛）中，口服 ABT-702（0.3-3 umol/kg，约 0.14-1.4 mg/kg）可在第二阶段产生剂量依赖性的镇痛作用（ED50 = 0.9 umol/kg，口服），其效果与吗啡相当。在大鼠角叉菜胶诱导的热痛觉过敏（炎症性疼痛）模型中，口服 ABT-702（1-10 umol/kg）可缩短缩爪潜伏期。A1 受体拮抗剂 DPCPX 可逆转其镇痛作用，而 A2A 受体拮抗剂 ZM241385 则无此作用，表明其镇痛作用由 A1 受体介导。在大鼠慢性束缚损伤（CCI）神经病理性疼痛模型中，口服 ABT-702（10 umol/kg）可减轻机械性痛觉过敏和热痛觉过敏，持续时间为 2-4 小时。在癫痫大鼠模型（戊四唑诱导癫痫发作）中，ABT-702（10-30 umol/kg，腹腔注射）可提高癫痫发作阈值。在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型（左前降支闭塞30分钟）中，ABT-702（0.1-1 mg/kg，再灌注前静脉注射）可缩小梗死面积（从50%降至25%）并改善心输出量，这些作用可被A1受体拮抗剂阻断。ABT-702在这些剂量下耐受性良好；未观察到明显的心血管或中枢神经系统副作用，但极高剂量（>100 umol/kg）时可能出现轻度镇静和体温过低。该化合物具有口服生物利用度，且能穿透血脑屏障。

ABT-702 的主要无细胞检测方法是使用放射性标记腺苷的腺苷激酶 (AK) 酶抑制试验。将重组人腺苷激酶 (AK，10-50 ng) 与检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.4，5 mM MgCl2，0.01% BSA，2 mM ATP）在 96 孔板中孵育。将 ABT-702 用 DMSO（终浓度 1%）进行系列稀释（终浓度 0.001-1000 nM）。加入 [2,8-3H]-腺苷（1 uM，比活度 ~20 Ci/mmol）启动反应。总反应体积为 100 uL。在 37℃ 孵育 30-60 分钟后，将 50 uL 反应混合物点样至磷酸纤维素 P81 滤纸圆片上终止反应（该滤纸圆片可结合带正电荷的产物 AMP，但不结合不带电荷的腺苷）。用 10 mM 甲酸铵缓冲液（pH 6.5）洗涤滤纸圆片三次以去除未反应的腺苷，然后将其置于装有 5 mL 闪烁液的闪烁瓶中。计数滤纸上保留的放射性（cpm）。抑制率相对于对照组（无抑制剂）计算。IC50 值通过非线性回归确定。ABT-702 在此测定中的 IC50 值为 1.7 nM。为了评估选择性，该化合物在浓度高达 10 uM 的条件下，针对其他酶（例如，腺苷脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶、5'-核苷酸酶）进行了测试。未观察到明显的抑制作用。这种无细胞检测方法是确认AK抑制的金标准。也可以采用非放射性方法，即偶联酶法（通过丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶测定ADP的生成，并在340 nm处测定NADH的消耗），但该方法对纳摩尔级IC50值的灵敏度较低。

体外细胞腺苷积累实验中，将人HeLa细胞、大鼠皮层神经元或其他目标细胞接种于6孔板（1 × 10⁶ 个细胞/孔），培养24-48小时。将培养基替换为含有ABT-702（0.1-1000 nM）的HBSS缓冲液（pH 7.4）。细胞在37℃下孵育30-60分钟（可添加或不添加1 uM腺苷作为外源底物）。然后收集缓冲液，并定量分析腺苷水平。HPLC分析：样品经高氯酸（终浓度0.4 M）脱蛋白处理，离心（10,000 g，10分钟），并用KOH中和。将上清液注入C18反相柱（例如，250 × 4.6 mm），流动相为含5%甲醇的50 mM磷酸钾缓冲液（pH 5.5）。腺苷通过紫外检测，检测波长为260 nm。或者，也可以采用荧光法，以腺苷为底物，通过腺苷脱氨酶将其转化为肌苷（通过偶联酶法测定）。腺苷浓度升高所需的EC50值通常为5-20 nM。对于功能性检测，将表达A1受体的细胞（例如，CHO-A1）接种于96孔板中（每孔20,000个细胞）。使用竞争性ELISA（或AlphaScreen）测定cAMP。细胞预先用 ABT-702 (0.1-100 nM) 孵育 30 分钟，随后用福斯克林 (10 uM) 刺激 15 分钟。定量检测细胞内 cAMP 水平。ABT-702 通过激活 A1 受体降低 cAMP 的积累，EC50 值为 10-30 nM。DPCPX (100 nM) 可阻断此效应，证实了 A1 受体的特异性。在细胞因子检测中，RAW 264.7 巨噬细胞用 ABT-702 (0.1-1000 nM) 处理 30 分钟，然后加入 LPS (1 ug/mL) 培养 24 小时。用 ELISA 法分析上清液中的 TNF-α 和 IL-6 水平。ABT-702 在浓度约为 50 nM 时可使 TNF-α 水平降低 50%。这些细胞实验表明，AK抑制可导致功能性腺苷受体激活。

动物/疾病模型：雄性大鼠[1]
剂量：0.6-100 µmol/kg
给药途径：腹腔注射，单次给药
实验结果：在多种疼痛模型中均表现出强效的剂量依赖性镇痛作用，包括炎症性热痛觉过敏、福尔马林试验和神经损伤引起的触觉异常性疼痛。通过减轻角叉菜胶诱导的足爪水肿，显示出显著的抗炎作用。由于其作用不能被阿片拮抗剂纳洛酮逆转，因此表现出非阿片类作用机制。与吗啡相比，该药物产生镇痛耐受性的潜力较小。

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动物/疾病模型：雄性大鼠[1]
剂量：5-100 µmol/kg
给药途径：口服，单次给药
实验结果：在多种疼痛模型中均表现出强效的剂量依赖性镇痛作用，包括炎症性热痛觉过敏、福尔马林试验和神经损伤引起的触觉异常性疼痛。通过减轻角叉菜胶诱导的足爪水肿，该药物表现出显著的抗炎作用。选择性腺苷受体拮抗剂可阻断其镇痛和抗炎作用，证实了其作用机制依赖于腺苷。该药物表现出非阿片类药物的作用机制。与吗啡相比，该药物产生镇痛耐受性的潜力较小。较低镇痛剂量下对探索性运动活动无显著影响。较高剂量下降低了运动活动，但未损害运动协调性。在达到最大抗痛觉过敏剂量时，对心率或平均动脉压无显著影响。

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动物/疾病模型： 雄性 C57BL/6J 小鼠（8 周龄）腹腔注射链脲佐菌素（45 mg/kg，连续 5 天）以诱导糖尿病[2]
剂量： 1.5 mg/kg
给药途径： 腹腔注射，每周两次，持续 8 周
实验结果： 对糖尿病小鼠的最终体重和血糖水平无影响。与接受载体的对照组动物相比，炎症指标（ICAM-1、TNF-α 和小胶质细胞活化标志物 Iba1）较低。抑制A₂A受体的上调并降低ENT1表达。降低视网膜的氧化应激和亚硝化应激。与载体处理的糖尿病小鼠相比，阻断了糖尿病对糖尿病小鼠AK的影响。抑制了糖尿病小鼠的细胞死亡（减少裂解型caspase-3和TUNEL阳性细胞），但对正常对照组无影响。

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动物/疾病模型： 大鼠[3]
剂量： 3 mg/kg
给药途径： 腹腔注射，FDG注射前10分钟
实验结果： 与载体处理的大鼠相比，小脑、中脑和延髓区域代谢显著降低。

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对于体内疼痛模型，使用雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）或雄性CD-1小鼠（25-30 g）。福尔马林试验（小鼠）：将ABT-702悬浮于0.5%甲基纤维素溶液（或5% DMSO水溶液）中，并以0.3、1、3或10 μmol/kg的剂量口服（1 μmol ≈ 0.46 mg，以游离碱计；需根据盐形式调整剂量）。溶剂对照组给予甲基纤维素溶液。阳性对照组：吗啡（5 mg/kg，皮下注射）。给药1小时后，在小鼠右后爪背侧皮下注射20 μL 2%福尔马林溶液。记录第二阶段（注射福尔马林后15-30分钟）小鼠舔舐/啃咬/甩动注射爪的时间。计算ED50值（通常为0.9 μmol/kg）。对于角叉菜胶模型（大鼠）：大鼠禁食过夜。在右后爪足底注射0.1 mL 1%角叉菜胶前30-60分钟，分别给予大鼠ABT-702（1、3、10 μmol/kg，口服）。在基线水平以及注射角叉菜胶后1、2、3和4小时，测量大鼠对热刺激（Hargreaves装置）的缩爪潜伏期。ABT-702可逆转痛觉过敏，并在1-2小时达到峰值效应。对于CCI模型（神经性疼痛）：大鼠麻醉后，用四根铬制肠线松散结扎左侧坐骨神经（慢性压迫损伤）。7天后，使用von Frey纤维测量机械性痛觉过敏。ABT-702（10 μmol/kg，口服）可使缩爪阈值升高2-4小时。拮抗剂研究：为验证机制，在给予ABT-702前10分钟，大鼠预先腹腔注射DPCPX（A1受体拮抗剂，0.3 mg/kg）；ABT-702的镇痛作用被完全阻断。所有研究每组至少8只动物。实验结束后，采用二氧化碳吸入法处死动物。ABT-702通常耐受性良好；需监测镇静（旷场实验）和体温过低（直肠温度）。心肌缺血/再灌注模型：雄性Sprague-Dawley大鼠（300-350 g）麻醉后，左前降支冠状动脉闭塞30分钟（缺血），随后进行2小时或24小时的再灌注。在再灌注前5分钟，静脉注射ABT-702（0.1-1 mg/kg）或溶剂对照。再灌注结束后，切除心脏，并通过TTC染色测定梗死面积（梗死面积/危险面积）。ABT-702可显著缩小梗死面积。这些模型是评估腺苷类药物疗效的标准方法。

ABT-702（游离碱分子量 462.3，二盐酸盐分子量 535.2）具有良好的药代动力学特性。在大鼠中，口服给药（10 μmol/kg）后，血药浓度峰值（Cmax）在 0.5-1 小时达到（Tmax），Cmax 约为 0.5-1 μM。大鼠口服生物利用度（F%）约为 50-70%。末端半衰期（t1/2）为 2-4 小时。分布容积（Vd）中等（2-4 L/kg），表明其组织分布良好。血浆蛋白结合率高（90-95%）。代谢：该化合物主要通过 CYP3A4 代谢，次要通过 CYP2D6 代谢，代谢产物以葡萄糖醛酸化作用进行代谢。主要排泄途径为胆汁排泄（粪便，60-70%）和肾脏排泄（20-30%）。该化合物可穿透血脑屏障。给药后1小时，脑/血浆比值约为0.5-1.0。口服0.5%甲基纤维素混悬液有效。静脉给药时，ABT-702二盐酸盐可溶于生理盐水（pH值调至5-6）。该化合物在溶液中可稳定数小时；长期储存时，粉末应置于-20℃。DMSO溶液（10-50 mM）在-80℃下可稳定保存6个月。避免反复冻融。ABT-702对光敏感；应储存于棕色小瓶中。该化合物以二盐酸盐（最常见）的形式市售。

临床前毒理学研究：ABT-702 已在安全性药理学研究中进行了评估。在大鼠中，急性口服 LD50 > 1000 mg/kg。在一项为期 14 天的大鼠重复给药口服毒性研究（1、10、50 mg/kg/天）中，剂量高达 10 mg/kg 时未观察到与治疗相关的不良反应。在 50 mg/kg 剂量下，观察到轻度镇静、运动活性降低和体重增长减少（10-15%），这可能是由于腺苷过度积累所致。未观察到对血液学或临床化学（ALT、AST、肌酐）的显著影响。在 hERG 活性测定中，ABT-702 在浓度高达 30 μM 时不抑制 hERG（IC50 > 30 μM），表明其心脏毒性风险较低。在大鼠功能观察试验（FOB）中，剂量高达30 μmol/kg（约15 mg/kg）的ABT-702未引起任何显著的神经或行为缺陷。未观察到惊厥、震颤或共济失调的迹象。在小鼠微核试验中，ABT-702的遗传毒性为阴性。Ames试验结果显示其不具有致突变性。目前尚未有关于其慢性毒性或致癌性的研究报告。该化合物仅供研究使用，未经批准用于人体。操作时请采取标准实验室防护措施（戴手套、穿实验服、戴护目镜）。避免吸入粉末。请按照机构指南进行处置。

[1]. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11082453

[2]. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23770229/

[3]. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27082948

Abt-702 属于联吡啶类化合物。

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ABT-702（游离碱）的CAS号为214697-26-4。其二盐酸盐也有售。游离碱的分子式为C22H21BrN6O（ABT-702，即5-(3-溴苯基)-7-[6-(4-吗啉基)-3-吡啶基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-胺）。游离碱的分子量为463.3；二盐酸盐的分子量约为536.2。ABT-702是一种强效、选择性的腺苷激酶抑制剂（IC50 = 1.7 nM）。它也被称为ABT-702二盐酸盐（常用研究用制剂）。该药物尚未获得FDA批准。研究应用：镇痛（神经性疼痛、炎症性疼痛）、癫痫、缺血预适应、炎症（结肠炎、关节炎、脓毒症）、神经保护（中风、创伤性脑损伤）和心脏保护（心肌梗死）。该化合物常与A1或A2A受体拮抗剂联合使用，以解析腺苷受体亚型的作用。二盐酸盐可溶于水（最高溶解度为10 mg/mL）。HPLC纯度>98%。该化合物应储存于-20℃的干燥器中，避光保存。

C22H19BRN6O

463.33

462.08

214697-26-4

ABT-702 dihydrochloride; ABT-702 hydrochloride

1973

Light yellow to yellow solid powder

90.1

1

3

30

564

0

C1COCCN1C2=NC=C(C=C2)C3=NC4=NC=NC(=C4C(=C3)C5=CC(=CC=C5)Br)N

RQCXKDWOCUJWQZ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H19BrN6O/c23-16-3-1-2-14(10-16)17-11-18(28-22-20(17)21(24)26-13-27-22)15-4-5-19(25-12-15)29-6-8-30-9-7-29/h1-5,10-13H,6-9H2,(H2,24,26,27,28)

5-(3-bromophenyl)-7-(6-morpholin-4-yl-3-pyridinyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-4-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~53.96 mM; with sonication)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。