TAT-QFNP12 acetate

目录号: V118587
TAT-QFNP12 乙酸酯是一种多肽,可阻断 NDRG2-PPM1A 结合并减少 Smad2/3 磷酸化,从而减少星形胶质细胞中 MMP-9 的产生,并减少蛛网膜下腔出血 (SAH) 后血脑屏障的破坏。
TAT-QFNP12 acetate 产品类别: TGF-beta(Smad)
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
TAT-QFNP12 乙酸酯是一种多肽,可阻断 NDRG2-PPM1A 结合并减少 Smad2/3 磷酸化,从而减少星形胶质细胞中 MMP-9 的产生,并减少蛛网膜下腔出血 (SAH) 后血脑屏障的破坏。
TAT-QFNP12 醋酸盐是一种细胞穿透肽,可阻断 NDRG2(N-Myc 下游调控基因 2)和 PPM1A(蛋白磷酸酶 1A)之间的蛋白-蛋白相互作用。它能减少星形胶质细胞 MMP-9 的产生,并减轻蛛网膜下腔出血 (SAH) 后血脑屏障 (BBB) 的破坏。该肽包含一个 TAT 跨膜结构域,可实现高效的细胞递送,并以醋酸盐的形式提供。它旨在用于神经系统疾病的研究,特别是那些涉及血脑屏障受损和神经炎症的疾病。仅供研究使用;不得用于人体。
生物活性&实验参考方法
靶点
TAT-QFNP12 acetate targets the protein-protein interaction between NDRG2 and PPM1A. By blocking this interaction, it prevents PPM1A-mediated dephosphorylation of Smad2/3, thereby modulating TGF-beta signaling. This leads to downregulation of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) production in astrocytes. The TAT domain (derived from HIV-1 Tat protein) enables the peptide to cross cell membranes and reach intracellular targets. The compound operates within the TGF-beta/Smad signaling pathway and the neuroinflammatory cascade, specifically reducing MMP-9 which is a key mediator of BBB disruption after SAH. There is no classical enzyme or receptor binding; the target is a protein complex.
体外研究 (In Vitro)
体外实验表明,TAT-QFNP12 乙酸酯(在原代星形胶质细胞培养物中以 0.1-10 uM 的浓度处理 24-48 小时)可降低星形胶质细胞中 MMP-9 的产生,这通过 ELISA 和明胶酶谱法测定。它能阻断 NDRG2-PPM1A 的相互作用,这通过共免疫沉淀实验得到证实,并导致 Smad2/3 磷酸化水平升高(Western blot)。MTT 或 LDH 释放实验表明,该肽在浓度高达 10 uM 时对细胞活力没有显著影响。在有效浓度下,它对其他基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-3)没有脱靶效应。基于剂量反应研究,MMP-9 降低的 EC50 值约为 1-3 uM。DMSO 溶剂对照浓度 ≤0.1%。
体内研究 (In Vivo)
在体内,TAT-QFNP12 醋酸酯可减轻啮齿动物蛛网膜下腔出血 (SAH) 模型中的血脑屏障 (BBB) 破坏。在一项典型的研究中,使用雄性 C57BL/6 小鼠(20-25 g),对小鼠进行血管内穿孔诱导的 SAH,在 SAH 后立即腹腔注射该肽(1-10 mg/kg),可显著降低 SAH 后 24 小时伊文思蓝外渗(BBB 通透性的标志物)。它还能降低脑内 MMP-9 的活性,并保护紧密连接蛋白(闭合蛋白、claudin-5)。神经功能缺损评分(改良 Garcia 评分)得到改善。该肽不影响全身血压或心率。给药可单次或重复(每日一次,最多 3 天)。10 mg/kg 剂量下未观察到明显的毒性或体重减轻。
酶活实验
不适用。TAT-QFNP12 乙酸酯是一种肽,其作用机制是通过破坏细胞内环境中的蛋白质-蛋白质相互作用(NDRG2-PPM1A)来实现的。这种机制需要完整的细胞机制,无法在无细胞系统中重现。传统的非细胞检测方法,例如酶活性抑制(如蛋白酶、激酶),并不适用。然而,理论上表面等离子共振 (SPR) 可以测量该肽与纯化的 NDRG2 或 PPM1A 蛋白之间的结合亲和力,但并未提供此类数据。该化合物的活性完全通过基于细胞和体内的功能性检测来确定。
细胞实验
体外细胞实验中,从新生C57BL/6小鼠中分离原代皮层星形胶质细胞,并在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养。将细胞接种于6孔板(5×10⁵个细胞/孔)或96孔板(2×10⁴个细胞/孔)。待细胞汇合度达到80%后,更换为含0.1、1、3和10 uM TAT-QFNP12醋酸盐(由10 mM PBS储备液配制)的无血清培养基。在37℃、5% CO2条件下培养24-48小时。进行免疫共沉淀(co-IP)实验时,用NP-40缓冲液裂解细胞;使用NDRG2抗体进行免疫沉淀,并通过Western blot检测PPM1A蛋白。采用ELISA法(灵敏度约为0.1 ng/mL)检测条件培养基中的MMP-9含量。采用MTT法(0.5 mg/mL,孵育4小时)评估细胞活力。所有实验均设置溶剂对照(PBS),并重复三次。阳性对照:重组TGF-β1(10 ng/mL)可诱导Smad2/3磷酸化。
动物实验
对于体内蛛网膜下腔出血(SAH)模型,雄性C57BL/6小鼠(8-10周龄,20-25 g,每组n=8-10)用异氟烷麻醉。采用单丝缝线对左侧大脑中动脉进行血管内穿孔,诱导SAH。假手术组小鼠接受相同的操作,但不进行穿孔。将TAT-QFNP12醋酸盐溶解于无菌PBS中,配制成0.5 mg/mL的溶液,并在SAH诱导后立即腹腔注射(IP)1、3和10 mg/kg(10 mL/kg体重)的剂量。对照组注射溶剂(PBS)。SAH后24小时,处死小鼠,用PBS灌注脑组织,并在处死前2小时静脉注射伊文思蓝染料(2%生理盐水,4 mL/kg),以评估血脑屏障通透性。将脑组织在甲酰胺中匀浆,于 60℃ 孵育 24 小时,并测量 620 nm 处的吸光度。24 小时后,由不知晓分组情况的观察者评估神经功能评分(改良 Garcia 评分,3-18 分)。采用明胶酶谱法分析脑匀浆中的 MMP-9 活性。进行蛋白质印迹实验时,裂解脑组织并检测 occludin、claudin-5 和 MMP-9 的表达。所有实验操作均遵循动物福利指南。
药代性质 (ADME/PK)
目前尚无TAT-QFNP12醋酸酯的详细药代动力学数据。作为一种由21个氨基酸组成的肽(分子量约为3006 g/mol),由于血清蛋白酶的快速蛋白水解作用,预计其血浆半衰期较短(t½可能为10-30分钟)。TAT结构域可增强细胞摄取,但不会延长循环时间。腹腔注射后,吸收相对较快,血浆峰浓度可在30-60分钟内达到。该肽可能经肾脏和肝脏清除。口服生物利用度极低,必须注射给药。目前尚无组织分布研究报道。该化合物以冻干粉末形式储存于-80℃时稳定。长期储存(最长2年)应将粉末置于-80℃,最长1年应置于-20℃,并避光防潮。溶解性:水或PBS。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
尚未对TAT-QFNP12乙酸酯进行正式的毒性研究。体外试验表明,该肽在浓度高达10 μM时对原代星形胶质细胞无细胞毒性(通过LDH释放和MTT试验测定,细胞活力>90%对照组)。在急性动物研究(蛛网膜下腔出血模型)中,腹腔注射剂量高达10 mg/kg耐受性良好,未观察到体重减轻、行为异常或死亡。未见器官毒性(肝脏、肾脏、脾脏)的报道。已知TAT结构域具有低免疫原性。应遵循标准实验室安全预防措施:避免吸入、摄入和皮肤/眼睛接触;使用个人防护装备(手套、实验服、护目镜);处理粉末时在通风橱内操作。仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。请根据当地生物和化学废物处理法规处置废物。
参考文献

[1]. Astrocytic NDRG2-PPM1A interaction exacerbates blood-brain barrier disruption after subarachnoid hemorrhage. Sci Adv. 2022 Sep 30;8(39):eabq2423.

其他信息
该肽序列为 Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Val-Lys-Lys-Glu-Ala-Glu-Leu-Asp-Lys-Tyr-Leu-Glu (YGRKKRRQRRRVKKEAELDKYLE),包含 TAT 结构域(氨基酸残基 1-11)以及靶向 NDRG2-PPM1A 相互作用的抑制序列。分子量:3006.47 g/mol(游离碱)。纯度通常 >95%(HPLC 法)。以冻干醋酸盐形式提供。储存:密封,防潮,-80℃ 可长期保存(2 年),-20℃ 可保存长达 1 年。仅供研究使用。通路:TGF-β/Smad 信号通路,神经炎症。用于研究蛛网膜下腔出血、血脑屏障破坏和神经保护疗法。不可用于人体。也称为TAT-NDRG2-PPM1A抑制肽。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C130H225N47O35.XC2H4O2
分子量
3006.47 (free base)
相关CAS号
TAT-QFNP12
序列
Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Val-Lys-Lys-Glu-Ala-Glu-Leu-Asp-Lys-Tyr-Leu-GluYGRKKRRQRRRVKKEAELDKYLE
外观&性状
white solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: 请将本产品存放在密封保护的环境中,避免受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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