| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Notch 1 targets the Notch signaling pathway. As a transmembrane receptor, Notch 1 binds to its ligands (Jagged1, Jagged2, DLL1, DLL3, DLL4) on adjacent cells. Ligand binding triggers two successive proteolytic cleavages: an ADAM-family metalloprotease cleavage (S2) followed by gamma-secretase cleavage (S3), releasing the Notch intracellular domain (NICD). The NICD translocates to the nucleus, where it binds the transcription factor CSL (CBF1/RBP-Jkappa), displacing co-repressors and recruiting co-activators (MAML, p300). This activates transcription of target genes including HES1, HEY1, MYC, and CCND1. Notch 1 can also promote cell survival through the NF-kappaB pathway in prostate cells. Thus, Notch 1 is both the receptor and a signaling hub, regulating cell proliferation, differentiation, and stem cell maintenance. In cancers, Notch 1 can be either oncogenic or tumor-suppressive depending on context.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Notch 1 可通过激活促生存的 NF-κB 通路促进小鼠腔内前列腺细胞的存活和增殖 [2]。在人类前列腺癌细胞系中，Notch 1 和 Jagged1 的下调可降低体外侵袭和细胞生长 [2]。
体外实验中，Notch 1重组蛋白用于结合研究和功能分析。在配体结合ELISA实验中，固定化的Notch 1-Fc融合蛋白（2 ug/mL）与Jagged1-Fc（0.01-100 nM）结合，解离常数（Kd）约为5-10 nM。在基于细胞的实验中，Notch 1在报告基因细胞（例如，表达CBF1-荧光素酶报告基因的U2OS细胞）中的表达会导致配体依赖性的荧光素酶激活。用γ-分泌酶抑制剂DAPT（10 uM）处理可阻断NICD的生成，并使报告基因活性降低70-90%。在人前列腺癌细胞系（PC3、DU145、LNCaP）中，siRNA介导的Notch 1基因敲低可降低细胞增殖（MTT实验，72小时后降低40-60%）、减少细胞穿过Matrigel基质胶的侵袭能力（降低50-70%），并增加细胞凋亡（Annexin V阳性率增加2-3倍）。重组Notch 1蛋白本身可用于在共培养实验中激活Notch信号通路：表达Notch 1的膜结合细胞可激活表达配体的受体细胞中的信号通路。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，Notch 1（作为蛋白质或基因）的研究主要利用基因工程小鼠模型。Notch 1是胚胎发育所必需的；Notch 1敲除小鼠在胚胎发育第10.5天左右死亡，并伴有严重的发育缺陷。在条件性敲除模型中，前列腺上皮细胞中Notch 1的缺失会降低细胞增殖并诱导细胞凋亡，最终导致前列腺发育不全。在小鼠前列腺中过表达活化的Notch 1（NICD）会导致前列腺上皮内瘤变（PIN），最终发展为腺癌，证实了其致癌作用。在人前列腺癌异种移植模型中，敲低Notch 1或使用γ-分泌酶抑制剂（例如MRK-003，100 mg/kg，口服）治疗可抑制肿瘤生长（肿瘤生长抑制率约为50-60%）。在人源化小鼠模型（移植了患者来源异种移植瘤的NSG小鼠，PDX）中，Notch 1的表达与肿瘤进展相关。 Notch 1 重组蛋白不作为治疗药物使用；它被用作蛋白质印迹、ELISA 和免疫组织化学的研究标准。
|
| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：对于 Notch 1 受体-配体结合，进行基于 ELISA 的结合实验。将重组 Notch 1-Fc 融合蛋白（2 ug/mL，100 uL/孔）包被于 96 孔板中，4℃ 过夜。用 3% BSA 的 PBS 溶液封闭 2 小时。加入浓度递增的重组 Jagged1-Fc（0.01-100 nM），溶于结合缓冲液（含 0.05% Tween-20 和 1 mM CaCl2 的 PBS）。25℃ 孵育 2 小时。洗涤 3 次，加入抗 Fc-HRP 抗体（1:1000），孵育 1 小时，洗涤，加入 TMB 底物，测定 OD450 值。使用非线性回归计算 Kd 值。为测定γ-分泌酶活性，从Notch 1过表达细胞中分离微粒体膜。将膜（50 ug）与10 uM的荧光Notch底物（例如Nβ27-FAM肽）在测定缓冲液（50 mM HEPES pH 7.0、10 mM EDTA、0.1% CHAPS）中于37℃孵育2小时。终止反应，测量荧光强度（激发波长355 nm，发射波长485 nm）。加入DAPT（10 uM）可完全抑制活性。为测定热稳定性，使用纯化的Notch 1蛋白进行差示扫描荧光法（DSF）测定。
|
| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：将PC3前列腺癌细胞培养于含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基中。siRNA敲低实验中，使用Lipofectamine RNAiMAX将siNotch1（50 nM）或对照siRNA转染至细胞。48-72小时后，收集细胞进行Western blot分析（使用抗Notch1抗体，检测120 kDa全长蛋白和80-90 kDa裂解的NICD蛋白）。增殖实验中，将转染后的细胞接种于96孔板（5×103个细胞/孔），培养72小时后进行MTT实验（OD₅₇0）。侵袭实验中，使用Transwell小室，内含Matrigel基质胶（100 ug/孔）。将2×10⁵个细胞悬浮于无血清培养基中加入上室；下室加入10% FBS作为趋化因子。 24小时后，固定侵袭细胞，用0.1%结晶紫染色并计数。Notch 1敲低可使侵袭能力降低50-70%。对于Notch激活实验，将表达Notch 1的U2OS细胞与表达Jagged1的L929细胞共培养24小时，然后检测CBF1-荧光素酶活性。以DAPT（10 uM）处理作为对照。对于γ-分泌酶抑制剂测试，用DAPT（0.1-10 uM）处理细胞24小时，并通过Western blot定量NICD。
|
| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：对于异种移植瘤研究，将PC3细胞（5×10⁶个，溶于100 μL PBS/Matrigel）皮下注射到雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=10），分别给予载体（0.5%甲基纤维素）、Notch抑制剂MRK-003（100 mg/kg，口服，每日一次）或Notch 1中和抗体（10 mg/kg，腹腔注射，每周两次）。测量肿瘤体积3-4周。实验结束时，收集肿瘤组织进行免疫组织化学染色：检测Notch 1、Ki67（增殖）和cleaved caspase-3（凋亡）抗体。对于药效学研究，在末次给药后6小时收集肿瘤组织，进行Notch 1、NICD和HES1的Western blot分析。对于生存研究，持续治疗小鼠直至肿瘤体积达到2000 mm³。对于基因模型，可构建Notch 1条件性敲除小鼠，并携带前列腺特异性Cre驱动基因（例如PB-Cre）。监测前列腺发育和肿瘤形成。对于使用患者来源异种移植瘤（PDX）的异种移植研究，可将肿瘤组织块皮下移植，用Notch 1抑制剂治疗，并评估疗效。所有实验方案均需获得IACUC批准。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：Notch 1 重组蛋白的分子量约为 1500.72 Da（片段形式；全长 Notch 1 约为 300 kDa）。作为一种用作研究试剂的重组蛋白，它不用于全身治疗，因此其药代动力学数据不适用。对于基于抗体的 Notch 1 抑制剂（例如，中和抗体），小鼠的典型药代动力学特征为：静脉注射（10 mg/kg）后，半衰期 (t1/2) 为 5-10 天，分布容积 (Vd) 约为 0.1 L/kg。对于小分子 γ-分泌酶抑制剂（例如，MRK-003），口服给药（100 mg/kg）后，血药浓度峰值 (Cmax) 约为 2-5 μM，半衰期 (t1/2) 约为 4-6 小时。Notch 1 蛋白在血浆中不稳定（半衰期 < 30 分钟）。Notch 1 蛋白以含 0.1% BSA 的缓冲液形式提供，应储存于 -80℃。避免反复冻融。Notch 1 不是小分子药物，而是一种研究用蛋白。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：作为一种研究用蛋白，Notch 1 本身没有直接的毒理学特征。然而，体内 Notch 信号通路的调控可能导致显著的毒性。γ-分泌酶抑制剂（例如 DAPT、MRK-003）会抑制肠道中的 Notch 信号通路，从而引起胃肠道毒性（杯状细胞化生、腹泻）。在小鼠中，DAPT 以 50 mg/kg/天的剂量连续给药 14 天会导致严重腹泻、体重减轻（>20%）和肠隐窝增生。Notch 1 中和抗体在高剂量下也会引起胃肠道毒性。对于重组蛋白本身，当以 2 mg/kg 的剂量静脉注射到小鼠体内时，由于该蛋白被迅速清除，因此未观察到急性毒性。在体外，添加到细胞培养物中的 Notch 1 蛋白（0.1-10 μg/mL）不具有细胞毒性（MTT 细胞活力 >90%）。研究人员应遵循处理重组蛋白的标准生物安全预防措施（戴手套、穿实验服、避免产生气溶胶）。该蛋白并非管制物质。储存条件：-80℃。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Notch 1 (CAS 2408730-51-6) 可从多家供应商处获得，以重组蛋白的形式存在（通常以片段形式存在，例如胞外结构域或 Notch 1-Fc 嵌合体）。其分子式为 C₆2H₉₇N1₅O22S3，分子量为 1500.72 g/mol（片段）。Notch 1 是发育生物学和癌症研究中的重要蛋白。它可用作蛋白质印迹、酶联免疫吸附试验 (ELISA) 和免疫组织化学实验的阳性对照。该蛋白以冻干粉形式提供；使用前请用无菌水或 PBS 缓冲液复溶。长期保存时，请分装后置于 -80℃ 保存。避免反复冻融。Notch 1 仅供研究使用；不得用于临床或诊断用途。在人类中，NOTCH1 基因突变与 T 细胞急性淋巴细胞白血病 (T-ALL) 和慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 相关，而功能获得性突变则与乳腺癌和前列腺癌相关。重组蛋白可用于研究结构-功能关系、抗体生成和诊断检测方法的开发。
|
| 分子式 |
C62H97N15O22S3
|
|---|---|
| 分子量 |
1500.72
|
| 精确质量 |
1499.609
|
| CAS号 |
2408730-51-6
|
| 相关CAS号 |
Notch 1 TFA
|
| PubChem CID |
171397210
|
| 序列 |
Cys-Leu-Asp-Gln-Ile-Gly-Glu-Phe-Gln-Cys-Ile-Cys-GluCLDQIGEFQCICE
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| tPSA |
614
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
22
|
| 可旋转键数目(RBC) |
50
|
| 重原子数目 |
102
|
| 分子复杂度/Complexity |
2950
|
| 定义原子立体中心数目 |
14
|
| SMILES |
CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)N
|
| InChi Key |
AANOCXCBYKMPDY-BBYHCIDCSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C62H97N15O22S3/c1-7-30(5)49(76-54(90)36(15-19-44(65)79)69-57(93)40(24-48(85)86)73-55(91)38(22-29(3)4)71-51(87)33(63)26-100)60(96)66-25-45(80)67-34(16-20-46(81)82)52(88)72-39(23-32-12-10-9-11-13-32)56(92)68-35(14-18-43(64)78)53(89)74-42(28-102)59(95)77-50(31(6)8-2)61(97)75-41(27-101)58(94)70-37(62(98)99)17-21-47(83)84/h9-13,29-31,33-42,49-50,100-102H,7-8,14-28,63H2,1-6H3,(H2,64,78)(H2,65,79)(H,66,96)(H,67,80)(H,68,92)(H,69,93)(H,70,94)(H,71,87)(H,72,88)(H,73,91)(H,74,89)(H,75,97)(H,76,90)(H,77,95)(H,81,82)(H,83,84)(H,85,86)(H,98,99)/t30-,31-,33-,34-,35-,36-,37-,38-,39-,40-,41-,42-,49-,50-/m0/s1
|
| 化学名 |
(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]pentanedioic acid
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 请将本产品存放在密封保护的环境中，避免受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.6663 mL | 3.3317 mL | 6.6635 mL | |
| 5 mM | 0.1333 mL | 0.6663 mL | 1.3327 mL | |
| 10 mM | 0.0666 mL | 0.3332 mL | 0.6663 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
