SN32976

PI3Kα (IC50 = 15.1 nM); PI3Kβ (IC50 = 461 nM); PI3Kγ (IC50 = 110 nM); PI3Kδ (IC50 = 134 nM); mTOR (IC50 = 194 nM)

在 U-87 MG 细胞中，SN32976（1-100 nM；持续时间 1 小时）可将 Thr308 和 Ser473 pAKT 表达抑制低至 10 nM [1]。 SN32976 的 EC50 值范围为 NCI-H460 细胞中的 18.5 nM 到 NZM34 细胞中的 1787 nM，可有效抑制所有细胞系中的细胞增殖（细胞系为 PTEN null（U-87 MG、PC3、NZM34）、H1047R PIK3CA 突变体（ HCT116、NZM40)、E545K PIK3CA 突变体 (NCI-H460、MCF7) 和 PIK3CA 扩增 (FaDu))。

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PI3K/mTOR生化活性和激酶选择性[1]
SN32976，2-（4-（4-（2-（二氟甲基）-4-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基）-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基）哌嗪-1-基）磺酰基）-N，N-二甲基乙-1-胺，基于早期支架开发，是一种具有良好药理特性的PI3K酶的强效选择性抑制剂。SN32976的设计和合成将在其他地方报道（手稿正在准备中）。SN32976对主要I类PI3K亚型和mTOR的生化效力是针对纯化的重组蛋白测定的，并与已进行临床评估的五种PI3K/mTOR抑制剂进行了比较：ZSTK474、达考替尼、皮克替利西布、布帕利西布和奥米帕利西布（表1）。SN32976是一种I类PI3K酶和mTOR的强效抑制剂，其活性与PI3Kα、β、γ和mTOR相似，与ZSTK474、达克利西布、皮克利西布和布帕利西布相似，但效力低于奥米帕利西布。然而，特别有趣的是SN32976对PI3Kδ的相对保留和对PI3Kα的选择性。SN32976对PI3Kα的IC50为15.1±4.3 nM，对PI3Kγ、PI3Kδ、mTOR和PI3Kβ的选择性分别为7.3倍、8.9倍、13倍和30倍。其他泛PI3K抑制剂对PI3Kα的选择性均不超过所有其他PI3K亚型和mTOR的2倍。

筛选了六种PI3K/mTOR抑制剂对442种激酶的选择性（补充表1）。在1μM时，SN32976和buparlisib对I类PI3K酶、mTOR和PIK3CA突变形式表现出高选择性，没有其他激酶表现出>80%的抑制作用（补充图1）。Pictilisib在1μM时对PI3K和mTOR具有类似的选择性，仅对JAK1的假激酶JH2结构域具有显著的脱靶抑制活性（89%）。其他化合物在1μM时的选择性较低：ZSTK474对II类PI3K酶PIK3C2B和PIK3C2G以及LRRK2的G2019S突变体具有很高的结合亲和力（99.7%），达考昔布对CLK1、CLK4、ERBB3、FLT3（D835Y突变体）、JAK1和JAK2的催化JH1结构域、MAP4K2、PIK3C2B和PIK3C2 G显示出>80%的抑制作用，而奥米帕利西布对PIK3C2 B、PIK3C2和PIK4CB没有选择性。由于其在1μM下的选择性增强，SN32976、吡替利西布和布帕利西布也在10μM下进行了测试。同样，SN32976显示出高度的选择性，仅对PIK3C2B和PIK3C2G具有脱靶活性（补充图2）。Buparlisib在10μM时仍具有选择性，但与CLK1、CLK2和CLK4的亲和力>80%，而pictilisib在10μM时与除I类PI3K酶、mTOR和突变PIK3CA以外的34种激酶的脱靶结合率>80%。

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体外抑制磷酸化AKT表达和细胞增殖[1]
为了确定SN32976是否可以阻止细胞中的PI3K信号传导，研究了磷酸化AKT（pAKT）表达作为U-87 MG（PTEN缺失）和NCI-H460（PIK3CA E545K突变）细胞中PI3K活性的生物标志物。SN32976在低至10nM的浓度下抑制U-87 MG细胞中Thr308和Ser473-pAKT的表达（图2A）。SN32976对U-87 MG和NCI-H460细胞中pAKT表达的影响大于布帕利西布诱导的pAKT抑制作用，特别是在U-87 MG细胞中，与ZSTK474和皮克西布的抑制活性相当（图2B）。Dactolisib对mTOR的效力更大，对Ser473-pAKT的活性更高，而omipalisib对AKT的两个磷酸化位点的抑制作用更大，因为它对PI3K和mTOR酶的效力更高。

由于PI3K/mTOR信号传导参与细胞增殖的调节，我们接下来研究了SN32976是否能够抑制PI3K信号传导失调的细胞系的细胞增殖。细胞系为PTEN缺失（U-87 MG、PC3、NZM34）、H1047R PIK3CA突变体（HCT116、NZM40）、E545K PIK3CA突变（NCI-H460、MCF7）和扩增的PIK3CA（FaDu）。SN32976能有效抑制所有细胞系的细胞增殖，EC50值从NCI-H460细胞的18.5±4.7 nM到NZM34细胞的1787±318 nM不等（图2C）。EC50值与其他泛PI3K抑制剂的EC50值相比是有利的，在整个细胞系面板上，SN32976与ZSTK474、匹替利西布和布帕利西布相比，EC50值相同或更低。然而，在抑制细胞增殖方面，达考昔布和奥米帕利西布的效力最大，这很可能与它们增强的mTOR抑制有关。总体而言，6种抑制剂的细胞增殖抑制模式在8种细胞系中高度一致。

在 U-87 MG 肿瘤异种移植模型中，SN32976（37.5–75 mg/kg；灌胃；每天；持续 21 天）抑制肿瘤生长[1]。

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SN32976对葡萄糖代谢的影响 胰岛素对葡萄糖代谢的影响需要PI3Kα的活性，因此葡萄糖代谢的损伤是靶向PI3Kα药物的已知靶向效应。与此一致，用10mg/kgSN32976预处理1小时显著影响了小鼠耐受外源性0.75U/kg胰岛素（图5A）或2g/kg葡萄糖（图5B）的能力，葡萄糖给药后胰岛素水平也显著升高（图5C）。此外，SN32976增加了2 g/kg丙酮酸盐的肝脏葡萄糖产量（图5D）。这些结果为SN32976的体内靶向疗效提供了进一步的药效学证据。

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SN32976相对于其他PI3K抑制剂的抗肿瘤疗效[1]
为了评估SN32976的体内抗肿瘤疗效，免疫缺陷小鼠接种U-87 MG（PTEN缺失）、NCI-H460和HCT116（均为PIK3CA突变）细胞，一旦肿瘤形成，每天用SN32976和ZSTK474、达考替尼、皮克替利西布或奥米帕利西布治疗。与三种肿瘤模型中的其他PI3K抑制剂相比，SN32976在高达100mg/kg的剂量下抑制肿瘤生长的程度相似或增强（图6A）。SN32976在测试剂量下耐受良好，尽管在HCT116肿瘤小鼠中，100mg/kg的体重减轻确实超过10%（图6B）。在多次服用100mg/kg SN32976后，在患有U-87 MG肿瘤的小鼠中测定了肿瘤和血浆中SN32976母体和主要代谢物的浓度。SN32976的肿瘤和血浆浓度在给药后24小时内保持在达到50%抑制pAKT所需的浓度以上（图6C）。血浆中主要代谢物的相对水平（M8、M9和M17的AUC分别为母体的2.0%、33.6%和8.8%）和肿瘤中主要代谢物（M8，M9和M13的AUC各自为母体的3.7%、32.9%和2.4%）与我们之前在SN32976以30mg/kg给药后血浆中的测定结果基本一致；然而，发现M8优先分布于肿瘤，在肿瘤中检测到的M8水平高于M17。

体外激酶测定[1]
如前所述，使用PI3K（人）HTRF测定法测定药物化合物对PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ的生化活性。滴定每种PI3K酶，并以其EC65和EC80之间的浓度使用。ATP以其约10μM的Km值添加。通过SelectScreen激酶分析服务，使用Z'LYTE激酶测定法测定mTOR活性。使用442种激酶的scanMAXX激酶扫描测定化合物对相关蛋白或脂质激酶的选择性。

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代谢物鉴定[1]
在从混合的人类供体、雄性CD1小鼠、雄性Sprague-Dawley大鼠、雄性比格犬和雄性食蟹猴（1mg/ml）分离的肝微粒体中鉴定了SN32976代谢物。在37°C下，在2 mM NADPH的存在下，将肝微粒体与10μMSN32976一起孵育60分钟。通过将样品与乙腈和内标混合来淬灭反应。在Sciex 4000 QTRAP LC-MS/MS上分析样品，该LC-MS/MS连接到在220 nm和254 nm双波长下工作的SPD-10AV UV/Vis检测器。在300-750m/z的质量扫描下，使用电喷雾电离观察母体化合物和代谢物。对于观察到的峰，确定m/z并进行产物离子扫描。

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ADME/毒性研究[1]
SN32976的溶解度、血浆蛋白结合、微粒体稳定性、细胞色素P450诱导/抑制、hERG测试和Ames测试由合同研究机构进行。下面提供了每种测定的简要说明，以及各公司提供的详细方案。通过将化合物加入100mM磷酸钾缓冲液（pH 7.4）中，将1mM MgCl2调节至pH 7.4或2.0，直至没有其他化合物溶解，来测定SN32976的溶解度。通过将1μM SN32976加入到由平衡透析膜从PBS（pH 7.4）中分离出的10%人、狗、小鼠或大鼠血浆中，并在37°C、500 rpm下孵育16-24小时，测定血浆蛋白结合。在37°C下，在2mM NADPH存在下，用1μM的SN32976孵育60分钟，测定人、小鼠、大鼠和狗肝微粒体（0.5-1mg/ml）的微粒体稳定性。所有溶解度、血浆蛋白结合和肝微粒体样品均通过LC-MS/MS进行定量分析。在用SN32976孵育的人肝微粒体中评估细胞色素P450对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的抑制作用，并通过LC-MS/MS或乙氧基间苯二酚荧光（CYP1A2）进行定量。在qRT-PCR测定CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4的mRNA表达之前，在与多种浓度的SN32976孵育72小时的培养肝细胞中评估细胞色素P450的诱导作用。通过膜片钳试验在转染hERG基因的HEK 293细胞中评估了SN32976对快速激活延迟整流钾选择电流（IKr）的影响。对于Ames试验，在存在和不存在大鼠肝脏S9组分的情况下，在四种沙门氏菌试验菌株（TA97a、TA98、TA100和TA1535）和一种大肠杆菌菌株（WP2 uvrA pKM101）中评估了SN32976在高达250μg/孔浓度下的移码和碱基对替代诱变性。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： U-87 MG 细胞
测试浓度： 1 nM、3 nM、10 nM、30 nM、100 nM
孵育时间：1 小时
实验结果：抑制 U-87 MG 细胞中 Thr308 和 Ser473 pAKT 表达。

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细胞增殖和蛋白质印迹[1]
将细胞以400-5000个细胞/孔的速度接种到96孔板中，并在37°C下用5%的CO2（NZM34和NZM40为5%的O2）静置2小时。将平板与浓度在0.2%或更低DMSO中的化合物一起孵育5天，然后如前所述用10%三氯乙酸固定并用0.4%磺基罗丹明B染色。将U-87 MG和NCI-H460细胞以约500000个细胞/孔的速度接种到12孔板中，并在37°C和5%CO2下静置24小时。将细胞血清饥饿过夜，然后用药物化合物处理15分钟-1小时，然后用500 nM胰岛素刺激5分钟。制备细胞裂解物，并如前所述印迹pAKT、总AKT和β-actin。使用ImageJ 1.40g通过密度分析对pAKT和总AKT染色进行定量。

动物/疾病模型： 接种 U-87 MG 细胞的 6-8 周龄雌性 balb/c 裸鼠或雌性 balb/c Rag1−/− 小鼠[1]
剂量： 37.5 mg/kg；75 mg/kg
给药途径： 口服；每日一次；持续 21 天
实验结果： 抑制 U-87 MG 肿瘤异种移植模型中的肿瘤生长。\n

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\n \n动物和给药[1]
\n用于血浆药代动力学研究的动物包括：雄性 CD1 小鼠（6-8 周龄）、雄性 Sprague-Dawley 大鼠（7-9 周龄）和雄性比格犬（8-24 月龄）。在接种了5×10⁶个U-87 MG、NCI-H460或HCT116细胞（溶于PBS）的6-8周龄雌性balb/c裸鼠或雌性balb/c Rag1−/−小鼠中，进行了肿瘤药代动力学、药效学和抗肿瘤疗效研究。雄性CD1小鼠（6-8周龄）用于葡萄糖代谢研究。所有动物实验均遵循相关动物伦理委员会批准的方案，动物可自由摄取食物和水。动物接受SN32976（以游离碱当量计）的盐酸盐或甲磺酸盐治疗，该盐酸盐或甲磺酸盐配制于5%葡萄糖溶液中。在大鼠剂量比例研究中，SN32976采用Hot Rod Chemistry 6号配方配制。ZSTK474以含1% Tween-80的2%羧甲基纤维素溶液给药。用于药效学研究的Dactolisib、pictilisib和omipalisib分别配制成HRC #6溶液，用于抗肿瘤疗效研究的配制成50% PEG-400、20% 2-羟丙基-β-环糊精、5%葡萄糖水溶液和20% 2-羟丙基-β-环糊精溶液。化合物以单次静脉注射或口服给药的方式进行药代动力学和药效学分析，或以每14天或每21天一次的给药方案进行灌胃给药，以评估抗肿瘤疗效。SN32976通过腹腔注射给药，用于葡萄糖代谢试验。所有动物在给药后均每日监测毒性或体重减轻的迹象，如果出现中度毒性迹象或体重减轻超过治疗前体重的20%，则予以处死。在肿瘤研究中，动物被随机分层到不同的治疗组，当肿瘤体积达到约 250 mm³（用于药效学分析）或 150 mm³（用于抗肿瘤疗效评估）时开始给药。肿瘤体积通过电子游标卡尺测量肿瘤直径，并使用公式 (L × w²) × π/6 计算得出（其中 L 为肿瘤最长直径，w 为垂直直径）。体内药理学研究 [1] 在给药后多个时间点采集血液和肿瘤样本（每个时间点 n=2-3）。血液采集到锂肝素或 K2-EDTA 抗凝管中，并在 6000 rpm 下离心 5 分钟，分离成血浆。向血浆中加入甲醇进行蛋白质提取。肿瘤样本在液氮中速冻，使用生物粉碎机粉碎，然后加入甲醇。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行定量分析，并使用内标法。分析仪器为配备Prominence高效液相色谱仪的Sciex API 4000三重四极杆液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）或采用多反应监测（MRM）和电喷雾电离（ESI）的Agilent 6460液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）。血浆和肿瘤药物浓度根据相关基质中浓度范围为2-10000 nM的标准品校准曲线进行定量，并与3个不同浓度的质控标准品进行比较。药代动力学参数使用Phoenix WinNonlin v6.2软件计算。肿瘤组织裂解液的制备方法为：将肿瘤组织粉碎后加入裂解缓冲液，并在4℃下以13000 rpm离心10分钟。测定蛋白质浓度，并按照先前描述的方法进行pAKT、总AKT和β-actin的免疫印迹分析。采用 SigmaPlot 13.0 软件进行 Pearson 积矩相关分析，确定药代动力学-药效学相关性。\n

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\n\n葡萄糖代谢分析[1]
\n如前所述，对接受 SN32976 治疗的雄性 CD-1 小鼠进行胰岛素耐量试验、葡萄糖耐量试验和丙酮酸耐量试验。采用 Prism 7.00 软件进行重复测量双因素方差分析，确定均值差异的统计学意义。

SN32976的ADME和血浆药代动力学[1]
我们评估了SN32976的ADME特性，以确保其适合进行体内试验。SN32976在低pH值下具有高溶解度，与血浆蛋白的结合率中等，并且在肝微粒体中具有良好的稳定性（表2）。在20 μM浓度下，它不抑制任何主要的CYP同工酶，对CYP1A2和CYP3A4的诱导作用极小，无致突变性，仅在高浓度下抑制hERG。
我们在小鼠、大鼠和犬中测定了SN32976的血浆药代动力学，以确定是否能在体内达到合适的血浆药物浓度。小鼠和犬分别口服 10 或 20 mg/kg 剂量后，获得了足够的曲线下面积 (AUC) 值（分别为 2504 nM·h 和 3224 nM·h），从而分别获得了合适的口服生物利用度值（分别为 33.4% 和 35.9%），支持在后续体内研究中采用口服给药（图 3A）（补充表 2）。大鼠口服 10 mg/kg 剂量后，获得了较低的 AUC 值（579 nM·h）和生物利用度值（8.1%）；然而，增加剂量后，大鼠口服给药后表现出非线性药代动力学特征，观察到较高的AUC值和更长的半衰期（图3B）（补充表3）。

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SN32976活性代谢物的鉴定[1]
将SN32976在小鼠、大鼠、犬、猴和人肝微粒体中孵育，结果显示存在17种m/z介于530-615之间的SN32976代谢物（补充图3）。这些代谢物大多在肝微粒体中含量极低（总离子色谱图中相对峰面积<1%）或微量（相对峰面积1-10%）。然而，有4种代谢物在至少一种物种中含量较高（相对峰面积>10%）。根据分子量推测代谢物的结构，并据此提出了SN32976的生物转化途径（图3C）。SN32976首先发生N-氧化反应，生成不稳定的代谢物M10。M10随后进一步经脱氨和脱水反应降解生成M17，或经脱甲基反应降解生成M9。M9可进一步发生N-脱甲基反应生成M8。M9和M17是所有物种肝微粒体中的主要代谢物，而M8在猴肝微粒体中含量较高，在人肝微粒体中含量较低，在犬肝微粒体中含量极低，在大鼠和小鼠肝微粒体中未检测到。 M10 在小鼠和大鼠中含量较高，在猴和狗中含量较低，在人微粒体中含量极低。
为了确定SN32976的稳定主要代谢物是否对 PI3K 酶具有活性，我们合成了 M8、M9 和 M17，并测试了它们对 PI3Kα、β、γ、δ 和 mTOR 的生化活性（表 3）。所有 3 种代谢物均为 PI3K 酶和 mTOR 的活性抑制剂，且对 PI3Kα 的抑制活性高于 SN32976（M8、M9 和 M17 的 PI3Kα IC50 值分别为 5.8 ± 0.4、8.2 ± 1.8 和 6.2 ± 0.5）。代谢物保留了中等的PI3Kα选择性，其中M8、M9和M17对PI3Kα的选择性分别比其他PI3K亚型和mTOR高6.5倍、5.6倍和4.2倍。此外，M17对PI3Kβ没有活性。
由于SN32976的主要代谢物也能抑制PI3K酶和mTOR，我们评估了小鼠服用SN32976后代谢物和母体化合物的血浆浓度，以确定它们对SN32976药代动力学的影响（图3D）。 SN32976 及其 3 种稳定主要代谢物的总体 AUC 为 19942 nM·h，其中母体化合物贡献 71.8%，M8 贡献 0.13%，M9 贡献 27.1%，M17 贡献 1.0%。

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SN32976 的药代动力学-药效学关系 [1]
为了确定 SN32976 可达到的血浆和肿瘤浓度是否能在体内抑制 pAKT，我们研究了其药代动力学-药效学 (PK/PD) 关系。将携带 PIK3CA 突变型 NCI-H460 肿瘤的 NIH-III 小鼠单次注射 SN32976，并在给药后多个时间点采集血浆和肿瘤样本，用于药代动力学分析和 pAKT 表达评估。在耐受性良好的剂量下，SN32976 可显著抑制 pAKT（Ser473 和 Thr308）的表达，100 和 75 mg/kg 剂量下抑制作用可持续 24 小时，37.5 mg/kg 剂量下抑制作用可持续约 6 小时（图 4A）。血浆和肿瘤中的药物浓度呈剂量依赖性，且在给药后 24 小时仍能检测到（图 4B）。同样，在 PTEN 敲除的 U-87 MG 肿瘤小鼠中，不同剂量的 SN32976 均可抑制 pAKT 的表达，且抑制作用可持续长达 24 小时，其中 100 mg/kg 剂量的 SN32976 比 pictilisib、dactolisib 或 omipalisib 在其最大耐受剂量下更能有效地抑制 pAKT 的表达（图 4C 和补充图 4）。将来自 NCI-H460 和 U-87 MG 肿瘤的 SN32976 数据合并，以确定血浆或肿瘤中 SN32976 浓度与 pAKT 表达之间是否存在显著相关性。PK/PD 分析显示，pAKT 抑制与 SN32976 呈线性对数相关，其中 Ser473 pAKT 的相关性更强（血浆：R²=0.75，P<0.0001，Pearson 相关系数；肿瘤：R²=0.85，P<0.0001）（图 4D），而 Thr308 pAKT 的相关性较弱（血浆：R²=0.43，P<0.001；肿瘤：R²=0.57，P<0.0001）（补充图 5），并且肿瘤中 SN32976 浓度的相关性也强于血浆药物浓度。总体而言，随着血浆和肿瘤中 SN32976 浓度的增加，观察到 pAKT 的抑制作用增强，因此，血浆浓度超过约 1 μM 和肿瘤浓度超过约 2 μM 才能在体内达到 50% 抑制 ser473 和 Thr308 pAKT 表达。

在所测试的剂量下，SN32976 的耐受性良好，尽管在患有 HCT116 肿瘤的小鼠中，100 mg/kg 剂量组的体重下降超过 10%（图 6B）。[1]

[1]. Biological characterization of SN32976, a selective inhibitor of PI3K and mTOR with preferential activity to PI3Kα, in comparison to established pan PI3K inhibitors. Oncotarget. 2017 Jul 18;8(29):47725-47740.

针对磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路，人们开发了多种治疗药物。该通路在癌症中经常发生异常调控，从而促进肿瘤生长和存活。这些药物包括泛PI3K抑制剂，它们靶向Ia类PI3K亚型，但在临床试验中，其单药活性普遍有限，治疗窗口也较窄。本文对一种新型泛PI3K抑制剂SN32976进行了表征，包括其对PI3K亚型和mTOR的生化活性、激酶选择性、细胞活性、药代动力学、药效学以及抗肿瘤疗效，并与五种已进行临床评估的泛PI3K抑制剂（buparlisib、dactolisib、pictilisib、omipalisib和ZSTK474）进行了比较。 SN32976 能有效抑制 PI3K 亚型和 mTOR，与其他抑制剂相比，它对 PI3Kα 具有优先抑制活性，而对 PI3Kδ 的影响较小，并且在 442 种激酶的检测中，其脱靶活性低于临床抑制剂。SN32976 的主要代谢产物也是有效的 PI3K 抑制剂，与母体化合物一样对 PI3Kα 具有相似的选择性。在细胞实验中，SN32976 与临床评估的 PI3K 抑制剂相比表现出优异的性能，在纳摩尔浓度下即可抑制 pAKT 表达和细胞增殖。在动物模型中，与 pictilisib、dactolisib 和 omipalisib 相比，SN32976 在肿瘤中诱导的 pAKT 抑制程度和持续时间更长，且耐受剂量水平相似；SN32976 抑制肿瘤生长的程度也优于 dactolisib 和 ZSTK474，疗效与 pictilisib 和 omipalisib 相当。这些结果表明，SN32976 是一种有前景的癌症治疗候选药物，与第一代泛 PI3K 抑制剂相比，它具有更高的激酶选择性，并优先抑制 PI3Kα，同时保持了相当的抗癌活性。 [1]

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在肝微粒体和鼠血浆中鉴定出的三种最主要的稳定代谢物均为PI3K活性抑制剂，对PI3Kα的抑制活性略高，且与母体化合物对PI3Kα的选择性相似。这些代谢物很可能是通过SN32976的二甲氨基取代基的去甲基化或脱氨反应产生的，该取代基的添加是为了提高溶解度而非增强活性或选择性，因此这些代谢物保留了PI3Kα活性和选择性并不令人意外。在这些代谢物中，N-单甲基化代谢物M9在血浆和U-87 MG肿瘤中的含量为母体化合物的33-38%，因此可能有助于SN32976在体内发挥抗癌作用。在U-87 MG肿瘤中，M8和M9代谢物似乎比母体化合物更稳定，这表明它们可能有助于延长SN32976的抗肿瘤活性。这些代谢物与母体化合物保持相似的PI3Kα选择性，确保了脱靶效应有限，并且SN32976的给药剂量具有足够的治疗窗口，能够在耐受性良好的剂量水平下延缓肿瘤生长。[1] 通常，PI3K信号通路的治疗靶向主要集中在靶向单个或所有亚型的药物上，这往往会牺牲单药疗效或耐受性。新的治疗方法是使用亚型保留型PI3K抑制剂，例如taselisib，它靶向PI3Kα、δ和γ，但不影响PI3Kβ，目前正在进行转移性乳腺癌的III期临床试验，此前的试验已显示出抗肿瘤活性。我们认为，SN32976 是一种第二代泛 PI3K 抑制剂，其激酶选择性优于第一代抑制剂，并且相对于其他 I 类 PI3K 和 mTOR 亚型，对 PI3Kα 的选择性也更高。我们预期，由于其纯净的激酶谱，SN32976 将减少脱靶效应；同时，由于其对 PI3Kα 的选择性，其靶向毒性也将降低。此外，SN32976 对 PI3Kβ、δ、γ 和 mTOR 仍保持一定的活性，因此在临床前肿瘤模型中，它能有效抑制肿瘤生长。我们认为，这些数据支持将 SN32976 推进至临床开发阶段。[1]

C24H33F2N9O4S

581.64

581.234

C, 49.56; H, 5.72; F, 6.53; N, 21.67; O, 11.00; S, 5.51

1246202-11-8

46917573

Typically exists as solid at room temperature

1.5±0.1 g/cm3

760.7±70.0 °C at 760 mmHg

413.8±35.7 °C

0.0±2.6 mmHg at 25°C

1.672

-0.2

130

0

14

9

40

919

0

S(CCN(C)C)(N1CCN(C2N=C(N=C(N=2)N2CCOCC2)N2C(C(F)F)=NC3C(=CC=CC2=3)OC)CC1)(=O)=O

MKRQBWZUYRPLDM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H33F2N9O4S/c1-31(2)13-16-40(36,37)34-9-7-32(8-10-34)22-28-23(33-11-14-39-15-12-33)30-24(29-22)35-17-5-4-6-18(38-3)19(17)27-21(35)20(25)26/h4-6,20H,7-16H2,1-3H3

2-[4-[4-[2-(difluoromethyl)-4-methoxybenzimidazol-1-yl]-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl]piperazin-1-yl]sulfonyl-N,N-dimethylethanamine

SN32976; 1246202-11-8; CHEMBL4564359; SN-32976; N-[2-({4-[4-[2-(difluoromethyl)-4-methoxy-1H-benzimidazol-1-yl]-6-(4-morpholinyl)-1,3,5-triazin-2-yl]-1-piperazinyl}sulfonyl)ethyl]-N,N-dimethylamine; 2-[4-[4-[2-(difluoromethyl)-4-methoxybenzimidazol-1-yl]-6-morpholin-4-yl-1,3,5-triazin-2-yl]piperazin-1-yl]sulfonyl-N,N-dimethylethanamine; SCHEMBL477340

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。