human α2C-adrenoceptor (Ki = 28 nM); human α2B-adrenoceptor (Ki = 1470 nM); human α2A-adrenoceptor (Ki = 3150 nM); rodent α2D-adrenoceptor (Ki = 1700 nM)
JP1302 targets the α2C-adrenergic receptor. It is a selective antagonist of this receptor subtype. By blocking α2C-ARs, it inhibits the effects of endogenous catecholamines at this receptor. The α2C-AR is involved in various processes, including modulation of neurotransmitter release, vasoconstriction, and regulation of sympathetic nervous system activity. Its selectivity for the α2C subtype makes it a valuable tool for studying the distinct roles of α2A, α2B, and α2C receptors.

JP1302 对 α2A 或 α2B 的亲和力大约高 100 倍[1]。
放射性配体结合实验[2]
在与 [3H]-rauwolscine 的竞争性结合实验中，JP1302 对 α2C-AR 的亲和力为 28 nM（表 1）。由于 JP-1302 对其他三种 α2-AR 亚型的亲和力为 1500 nM 或更低，因此该化合物对 α2C-AR 的选择性至少约为 50 倍。在 0.1 μM 浓度下，JP-1302 对 30 种其他受体靶点的分析未发现明显的二级结合位点（表 2）。在 100 倍浓度（10 μM）下，发现其与 α1-AR 和其他一些受体结合（表 2）。

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α2-肾上腺素能受体拮抗剂活性在细胞膜中的测定[2]
JP1302 无法增加表达三种人α2-肾上腺素能受体亚型的CHO细胞膜上[35S]-GTPγS的结合，表明该化合物对α2-肾上腺素能受体不具有激动剂活性（表1）。然而，JP-1302能够以浓度依赖的方式拮抗固定量肾上腺素的激动剂反应（图2）。JP-1302对α2A-、α2B-和α2C-肾上腺素能受体亚型的表观拮抗效价（KB值）分别为1500、2200和16 nM（表1）。

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输精管模型中的α2-拮抗剂活性[2]
右美托咪定呈剂量依赖性地抑制大鼠输精管标本中电刺激诱发的收缩，EC50值为1.4 nM（图3）。JP1302对右美托咪定诱导的抑制作用无拮抗作用。然而，在阿替美唑存在的情况下，右美托咪定的剂量-反应曲线右移，导致阿替美唑的pA2值为8.5。

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体外实验表明，JP1302是一种选择性α2C-肾上腺素能受体拮抗剂。其活性通常通过测量其抑制表达α2C-AR的细胞或组织中激动剂诱导反应的能力来评估。结合和功能测定证实了该化合物对α2C亚型的选择性高于α2A和α2B亚型。它被用作研究α2C亚型特异性功能的工具。

在强迫游泳试验（FST）中，JP1302（1–10 μmol/kg）可显著减少不动时间，其效果与抗抑郁药地昔帕明（10–30 μmol/kg）相当[1]。JP1302（5 μmol/kg，单次给药）可完全逆转精神活性NMDA受体拮抗剂苯环利定在Sprague-Dawley大鼠中引起的PPI损伤，在Wistar大鼠中也观察到类似结果[1]。JP1302（3 mg/kg，静脉注射，单次给药）可显著改善肾功能障碍[3]。体内研究已在动物模型中开展，旨在探索α2C-肾上腺素能受体在各种生理和病理过程中的作用。作为一种选择性α2C拮抗剂，它有望调节交感神经系统活性。然而，已发表文献中关于其体内疗效的全面数据有限。该化合物主要用作研究工具，而非用于治疗应用。

放射性配体结合试验[2]
分别使用[3H]-rauwolscine和[3H]-RX821002进行竞争性结合试验，测定测试化合物对三种人α2-肾上腺素受体亚型（α2A、α2B和α2C）以及小鼠α2D亚型的亲和力。[3H]-rauwolscine置换试验中的生物材料为稳定转染三种人α2亚型之一的Shionogi S115细胞膜（Marjamäki等，1992）。[3H]-RX821002置换试验中使用的是稳定转染小鼠α2D亚型的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞膜。将膜悬液（每个样品含3–15 μg总蛋白，具体用量取决于各亚型的表达水平）与约1 nM的[3H]-rauwolscine（比活度75–85 Ci mmol−1）或[3H]-RX821002（比活度59 Ci mmol−1）在90 μl总体积的溶液（50 mM KH2PO4，pH 7.5，室温）中，与至少六个浓度的测试化合物孵育。特异性结合定义为100 μM羟甲唑啉，占总结合的90–96%。室温孵育30分钟后，使用预先浸泡过的GF/B玻璃纤维滤膜进行快速过滤（TomTec 96收集器，Tomtec公司，美国康涅狄格州哈姆登），并用冰冷的50 mM KH2PO4溶液（室温下pH 7.5）洗涤三次，终止孵育。然后将滤膜干燥，并在其上熔化固体闪烁液，之后测量其放射性。[2]
竞争性结合实验的分析采用非线性最小二乘曲线拟合进行。 IC50 值通过 Cheng-Prussoff 方程 (Ki=IC50/(1+(3H-配体)/Kd, 3H-配体)) 转换为 Ki 值。[2]
Cerep 使用已记录的标准程序，对浓度为 0.1 和 10 μM 的 JP1302 与除 α2-肾上腺素能受体亚型以外的多种受体进行了亲和力分析（实验条件的相关细节见表 2）。

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对于非细胞受体结合试验，可以使用表达人 α2C-肾上腺素能受体的细胞膜制备物来评估 JP1302。放射性配体结合置换实验使用合适的放射性标记配体，例如 [3H]-RX821002。将膜匀浆与递增浓度的测试化合物和固定浓度的放射性配体一起孵育。通过玻璃纤维滤膜快速过滤，将结合的放射性配体与游离的放射性配体分离。在过量未标记的育亨宾存在下测定非特异性结合。使用非线性回归分析，根据置换曲线计算 Ki 值。

细胞膜中的 α2 拮抗剂活性 [2]
JP1302 的拮抗剂活性被确定为该化合物竞争性抑制肾上腺素刺激的 35S-鸟苷-5′-O-(3-硫代)三磷酸 (35S-GTPγS) 与 G 蛋白结合的能力 (Jasper 等，1998)，该化合物存在于稳定转染了三种人类 α2 亚型之一的 CHO 细胞膜中 (Pohjanoksa 等，1997)。将膜（每份样品含2–6 μg蛋白）和12种不同浓度的JP1302在室温下于50 mM Tris、5 mM MgCl2、150 mM NaCl、1 mM DTT、1 mM EDTA、10 μM GDP、30 μM抗坏血酸（pH 7.4）的缓冲液中预孵育30分钟，并加入固定浓度的肾上腺素（α2A为5 μM，α2B为15 μM，α2C为5 μM）。然后向孵育混合物中加入痕量[35S]-GTPγS（0.08–0.15 nM，比活度1250 Ci mmol−1）。在室温下继续孵育30分钟后，通过玻璃纤维滤膜快速真空过滤终止孵育。滤膜用5 ml冰冷的洗涤缓冲液（20 mM Tris、5 mM MgCl₂、1 mM EDTA，pH 7.4）洗涤三次，干燥后用闪烁计数器测定放射性。实验至少重复三次。
拮抗实验的分析采用非线性最小二乘曲线拟合。IC₅₀值通过公式KB=IC₅₀/(1+(肾上腺素)/EC₅₀，肾上腺素)转换为KB值，其中肾上腺素对三种α₂-肾上腺素能受体亚型的EC₅₀值分别为0.76 μM (α₂A)、2.4 μM (α₂B)和0.71 μM (α₂C)。

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体外细胞实验中，表达人α₂C-肾上腺素能受体的细胞在合适的培养基中培养。功能实验中，测定福斯克林刺激的cAMP积累的抑制情况。在α2-激动剂存在的情况下，用不同浓度的JP1302处理细胞。采用ELISA或基于HTRF的检测方法测定cAMP水平。评估该化合物逆转激动剂诱导的cAMP积累抑制的能力，并根据剂量反应曲线计算IC50值。

动物/疾病模型：雄性Sprague Dawley大鼠（8周龄）[3]
剂量：3 mg/kg
给药途径：静脉注射，预处理：缺血诱导前5分钟给药，后处理：再灌注开始后45分钟注射
实验结果：再灌注24小时后，大鼠肾功能障碍显著改善。缺血后给予JP-1302可显著改善肾功能障碍、组织学损伤，并减少凋亡细胞和促炎细胞因子mRNA的表达。

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拮抗α2-激动剂右美托咪定散瞳作用[2]
大鼠（每组n=5，共15只）用戊巴比妥钠（Mebunat 60 mg ml−1，Orion，芬兰）麻醉，并在尾侧静脉插入聚乙烯套管进行给药。使用配备10 mm刻度线（0.1分）的手术显微镜测量瞳孔直径。显微镜内置绿色滤光片光源。实验过程中保持光源强度稳定。测量基线瞳孔直径后，所有大鼠均静脉注射10 μg α2-激动剂右美托咪定。 5分钟后测量右美托咪定的散瞳效果，然后每隔5分钟静脉注射累积剂量的阿替美唑或JP1302或等体积的溶剂。拮抗剂的累积剂量以3、10、30、100、300、1000和3000 nmol kg−1的步长进行测定，因此整个测量过程持续45分钟。瞳孔直径测量在下一次注射前进行。

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拮抗α2-激动剂诱导的运动抑制（镇静）和体温过低[2]
将76只雄性NMRI小鼠（B&K，瑞典）放入聚丙烯动物笼（38 × 22 × 15 cm）中，测量其自发运动活性。笼子周围环绕着一套用于活动测量的红外光束框架系统。在注射右美托咪定（50 nmol kg⁻¹ 皮下注射）前 20 分钟，分别给动物注射 JP1302 或阿替美唑。注射右美托咪定 20 分钟后测量自发运动活性，并将右美托咪定诱导的运动活性抑制作为镇静程度的指标。运动活性记录结束后，使用直肠探针和数字温度计测量小鼠的核心体温。探针插入肛门括约肌内 2.5 cm，并保持在该位置直至温度计读数稳定。在另一项实验中，使用相同的系统来检测单独使用 JP1302 的效果。在后一项实验中，记录了药物注射后20-40分钟的活动情况。

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JP1302在强迫游泳试验（FST）中抗抑郁活性的影响[2]
实验前至少30分钟将大鼠转移至实验室。强迫游泳试验是将每只大鼠单独浸入一个透明玻璃圆筒（高46厘米，直径20厘米）中进行，圆筒内装有21厘米深的25℃水柱。在FST试验中，首先进行15分钟的预测试，24小时后进行5分钟的正式测试。药物处理采用皮下注射的方式，在两次试验之间进行，第一次注射在预测试后15分钟，第二次注射在正式测试前1小时。两次FST试验结束后，将大鼠从圆筒中取出，用毛巾擦干，放入加热笼中15分钟，然后放回各自的笼子。每只动物仅使用一次。[2]
在5分钟的测试游泳期间，使用秒表计时器直接观察并记录动物的累计静止时间。实验人员经验丰富，能够准确评估动物的行为，并且对不同的药物处理不知情。当大鼠漂浮在水中，不挣扎，并且只做保持头部露出水面的必要动作时，即判定其处于静止状态。

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JP1302和阿替美唑对声惊吓反应预脉冲抑制的影响[2]
惊吓实验在四个相同的、通风且有照明的惊吓箱（39 × 38 × 58 cm（长 × 宽 × 高））中进行。每个惊吓箱由一个放置在有机玻璃平台上的非限制性有机玻璃圆柱体（直径3.9 cm）组成。安装在圆柱体下方的压电加速度计用于检测和转换动物的运动。高频扬声器安装在圆柱体上方 25 厘米处，用于提供所有声刺激。声刺激的呈现以及加速度计的压电响应均由 SR-LAB 软件和接口系统控制和数字化。使用圣地亚哥仪器公司的标准化装置将腔室的灵敏度调整至平均读数 100。使用 A 型电子秤反复测量每个腔室内的声级，结果表明声级保持恒定。由于不同品系大鼠的 PPI 水平差异可能影响药物反应，因此使用了两种品系的大鼠（SD 和 Wistar）来测试 JP1302 的作用。在体内动物研究中，JP1302 可通过腹腔注射给药。在交感神经系统调节模型中，评估其对血压、心率和神经递质释放的影响。在疼痛或神经系统疾病模型中，评估其对行为和伤害感受的影响。给药方案因具体型号和所需暴露水平而异。

JP1302 的分子式为 C18H22N4O，分子量为 310.39。它是一种选择性 α2C-肾上腺素能受体拮抗剂。该化合物通常在推荐条件下储存。它可溶于 DMSO。本品仅供研究使用，不得用于人体。

小鼠口服LD50为1500 mg/kg。（《医学寄生虫学与寄生虫病》，61(5)(55), 1991）

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JP1302的毒性特征尚未得到广泛报道。作为一种选择性α2C-肾上腺素能受体拮抗剂，其潜在的不良反应可能包括交感神经系统功能的调节。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。标准的毒理学评估应包括急性毒性和重复给药毒性研究。

[1]. JP-1302: a new tool to shed light on the roles of alpha2C-adrenoceptors in brain. Br J Pharmacol. 2007 Feb;150(4):381-2.

[2]. Pharmacological characterization and CNS effects of a novel highly selective alpha2C-adrenoceptor antagonist JP-1302. Br J Pharmacol. 2007 Feb;150(4):391-402.

[3]. Post-treatment with JP-1302 protects against renal ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury in rats. J Pharmacol Sci. 2019 Mar;139(3):137-142.

JP-1302作为一种选择性、高亲和力的α2C肾上腺素受体拮抗剂的发现，将使研究人员能够更深入地探讨这一潜在极为重要的肾上腺素受体亚型的功能角色和治疗应用。[1]

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背景与目标：α2A、α2B和α2C肾上腺素受体（AR）亚型新功能的药理验证受到现有配体的特异性和亚型选择性有限的阻碍。本研究描述了一种新型、高度选择性的α2C肾上腺素受体拮抗剂JP-1302（acridin-9-yl-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]胺）。实验方法：使用标准的体外结合和拮抗实验来验证JP-1302对α2C-AR的特异性。此外，考虑到先前研究显示这些测试与野生型对照相比的不同反应性，使用JP-1302对基因改造的α2C-肾上腺素受体小鼠进行了强迫游泳测试（FST）和预脉冲抑制惊跳反射（PPI）模型的测试。主要结果：JP-1302对人类α2A、α2B和α2C肾上腺素受体亚型的拮抗效力（KB值）分别为1500、2200和16 nM。JP-1302表现出抗抑郁和抗精神病样效应，有效减少FST中的不动时间，并逆转氯胺酮诱导的PPI缺陷。与非选择性的α2亚型拮抗剂阿美替唑（atemetazole）不同，JP-1302未能拮抗α2激动剂诱导的镇静（表明自发运动抑制）、低体温、α2激动剂诱导的散瞳或抑制输精管收缩，这些效应通常归因于α2A肾上腺素受体亚型。与JP-1302不同，阿美替唑无法拮抗PCP诱导的预脉冲抑制缺陷。结论与意义：这些结果进一步支持了α2C肾上腺素受体的特异性拮抗可能作为治疗神经精神疾病的新机制的假设。[2]

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缺血/再灌注损伤是急性肾损伤最常见的原因。我们之前发现，使用约翰宾（yohimbine）或JP-1302的预处理可以通过抑制α2C肾上腺素受体拮抗剂来减轻肾脏缺血/再灌注损伤。本研究旨在探讨JP-1302后处理对大鼠肾脏缺血/再灌注损伤的影响。雄性斯普拉格-道利大鼠随机分为四组：假手术组、缺血/再灌注组、JP-1302（3.0 mg/kg）预处理组和JP-1302后处理组。在缺血/再灌注损伤模型中，血尿素氮、血浆肌酐和肌酐清除率等肾功能指标在再灌注后恶化。再灌注后，肾静脉中的去甲肾上腺素浓度和肾脏炎症分子的水平增加。JP-1302治疗改善了肾功能障碍、组织损伤、肾静脉中的去甲肾上腺素浓度以及肾脏炎症分子的表达，无论是在治疗前还是治疗后。总之，这些结果表明，JP-1302治疗可以通过抑制α2C肾上腺素受体介导的细胞因子的上调，保护肾脏免受缺血/再灌注引起的急性肾损伤。[3]

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JP1302是一种选择性α2C肾上腺素受体拮抗剂。它被用作研究工具，以研究α2C肾上腺素受体亚型的生理和病理作用，包括神经递质释放的调节、血管收缩和交感神经系统活动的调节。仅供研究用途。

C24H24N4

368.47400

368.2

80259-18-3

JP1302 dihydrochloride;1259314-65-2

540335

Typically exists as solid at room temperature

1.227g/cm3

550.9ºC at 760 mmHg

287ºC

1.714

4.959

31.4

1

4

3

28

473

0

N1(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])N([H])C2C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3N=C3C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=23)C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H]

QZKGUNQLVFEEBA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H24N4/c1-27-14-16-28(17-15-27)19-12-10-18(11-13-19)25-24-20-6-2-4-8-22(20)26-23-9-5-3-7-21(23)24/h2-13H,14-17H2,1H3,(H,25,26)

N-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl]acridin-9-amine

80259-18-3; N-(4-(4-Methyl-1-piperazinyl)phenyl)-9-acridinamine; JP1302; N-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl]acridin-9-amine; GNF-PF-3427; TCMDC-123912; N-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl)acridin-9-amine; JP 1302;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。