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| 1mg |
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| 靶点 |
Phosphodiesterase type 5 (PDE5) (IC50 = 0.64 μM)
Kuraridine has multiple biological targets. Its primary enzymatic target is phosphodiesterase type 5 (PDE5), which it inhibits with an IC50 of 0.64 microM. It shows 2.0- and 12.9-fold selectivity for PDE5 over PDE3 and PDE4, respectively. Additionally, it is a positive allosteric modulator (PAM) of GABAA receptors, potentiating the effect of GABA. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
库拉利定对 cGMP PDE5 具有强抑制作用(IC50=0.64 μM),对 PDE3 和 PDE4 的选择性分别是其 2.0 倍和 12.9 倍[1]。在没有 GABA 的情况下,库拉利定可引起显著的氯离子内向电流。该电流不会超过饱和 GABA 浓度 (1 mM) 下产生的最大 IGABA 的 10%[2]。库拉利定在表达由 α1、β2 和 γ2S 亚基组成的 GABAA 受体的非洲爪蟾卵母细胞中引起浓度-效应曲线,导致 IGABA 增加(EC50=4.0±2.4 μM)[2]。在寻找天然存在的环磷酸鸟苷(cGMP)特异性磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制剂的过程中,发现苦参提取物对从大鼠膈肌制备的cGMP PDE5具有显著的抑制活性。因此,我们测定了从苦参中分离得到的五种黄酮类化合物——苦参醇H(1)、苦参醇K(2)、苦参素(3)、苦参黄酚(4)和苦参定(5)——对cGMP PDE5的抑制活性,以鉴定有效的cGMP PDE5抑制成分。在测试的化合物中,C-8异戊烯基黄酮醇sophoflavescenol (4) 对cGMP PDE5表现出最强的抑制活性(IC50=0.013 μM),其对PDE3和PDE4的选择性分别为31.5倍和196.2倍。动力学分析表明,sophoflavescenol是PDE5的混合型抑制剂,其Ki值为0.005 μM [1]。
体外实验表明,库拉利定是一种强效的PDE5抑制剂。在无GABA存在的情况下,它能诱导表达GABAA受体的非洲爪蟾卵母细胞产生显著的氯离子内向电流,表现为变构激动剂的作用。在GABA存在的情况下,它还能增强IGABA反应,EC50值为4.0 +/- 2.4 uM。此外,它还能影响多种癌细胞系的增殖并诱导其凋亡。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
这些文献中关于库拉利定的体内数据有限。虽然它已被确定为PDE5抑制剂,但其体内血管舒张作用尚未得到详细描述。其在细胞系中的抗肿瘤作用提示其可能对异种移植模型有效。其对GABAA受体的调节作用提示其可能对中枢神经系统产生体内影响。
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| 酶活实验 |
GABAA受体的表达[2]
按照Khom等人先前描述的方法制备非洲爪蟾(Xenopus laevis)V-VI期卵母细胞并注射cRNA。在手术切除部分卵巢前,将雌性非洲爪蟾暴露于0.2% MS-222(3-氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐)溶液中15分钟进行麻醉。用2 mg/mL胶原酶对分离的卵母细胞的卵泡膜进行酶解。以线性化的cDNA模板(pCMV载体)为模板合成加帽的poly(A+) cRNA转录本。酶解分离后一天,将卵母细胞注射50 nL经DEPC处理的水中,该水含有浓度约为300-3000 pg/nL/亚基的不同cRNA。为确保α1β2γ2S受体的表达,将大鼠α1、β2和γ2S亚基的cRNA按1:1:10的比例混合。使用NanoDrop ND-1000测定注射的cRNA混合物的量。然后将卵母细胞保存在18℃的ND96溶液(90mM NaCl、1mM KCl、1mM MgCl2、1mM CaCl2和5mM HEPES;pH 7.4)中。在cRNA注射后第1至5天进行电压钳测量。 双微电极电压钳研究[2] 采用双微电极电压钳方法进行电生理实验,使用TURBO TEC-03X放大器,钳制电位为-70 mV,并使用pCLAMP 10数据采集软件。电流经1 kHz低通滤波后,以3 kHz采样。ND 96溶液用作浴液。电极填充液为2 M KCl溶液。最大电流幅度>3 μA的卵母细胞被舍弃,以排除电压钳位误差。在施加测试溶液之前,进行GABA浓度范围为0.1至1 mM的剂量-反应实验,以确定GABA的EC3-10值(通常在3至10 μM之间)。 非细胞PDE5抑制实验方案采用从大鼠膈肌制备的cGMP PDE5酶。将库拉利定和该酶在30℃预孵育10分钟。加入3H-cGMP启动反应,并孵育20分钟。终止反应,并定量3H-5'-GMP产物的量。根据抑制曲线计算IC50值。 |
| 细胞实验 |
研究库拉利定对GABAA受体作用的细胞实验方案采用非洲爪蟾卵母细胞。将编码人GABAA受体α1、β2和γ2S亚基的cRNA注射到卵母细胞中。1-3天后,将卵母细胞置于记录室中,并钳制电压为-60 mV。通过灌注施加库拉利定,并测量由此产生的氯离子内向电流。
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| 动物实验 |
目前尚无针对库拉利定的具体体内动物实验方案。PDE5抑制剂的典型体内实验方案是,通过静脉注射或口服途径给大鼠给药,然后测量颈动脉和阴茎海绵体内的血压。海绵体内压相对于血压的升高表明PDE5受到抑制。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
这些参考文献中未提供库拉利定的详细药代动力学数据。作为一种天然产物提取物,由于含有多种化合物,其吸收、分布、代谢和排泄过程较为复杂。需要对纯库拉利定进行研究,以确定其溶解度、稳定性以及口服生物利用度等性质。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无具体的毒理学数据。然而,苦参(Sophora flavescens)在传统医学中有所应用,但它可能含有已知具有毒性的生物碱。对于用于研究的纯苦参碱,应遵循标准的实验室安全预防措施,并在确定其毒性特征之前,将其视为潜在危险化合物。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
苦参中已报道含有苦参素,相关数据也已发表。
苦参根的乙酸乙酯提取物能增强γ-氨基丁酸(GABA)诱导的非洲爪蟾卵母细胞中氯离子的内流,该卵母细胞的GABA(A)受体瞬时表达亚基为α(1)β(2)γ(2S)。基于高效液相色谱(HPLC)活性分析,鉴定出8-薰衣草基黄酮、苦参碱I、苦参碱G、(-)-苦参碱和苦参碱是GABA(A)受体调节剂。此外,还鉴定出一系列结构相关的无活性黄酮类化合物。其中,苦参碱Y(4)被鉴定为一种新的天然产物。8-薰衣草基黄酮是该靶点新骨架的首个代表。[2] 库拉利定是一种独特的研究工具,因为它是一种具有两种截然不同且重要的生物活性的天然产物。它既能抑制PDE5(一种治疗勃起功能障碍和肺动脉高压的靶点),又能调节GABAA受体(一种治疗焦虑和镇静的靶点),因此是一种“多靶点药物”,可用于研究潜在的多药理作用或探索同时作用于多个靶点的效应。 |
| 分子式 |
C26H30O6
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|---|---|
| 分子量 |
438.51
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| 精确质量 |
438.204
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| 元素分析 |
C, 71.21; H, 6.90; O, 21.89
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| CAS号 |
34981-25-4
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| PubChem CID |
44428631
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| LogP |
5.504
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| tPSA |
107.22
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
694
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC(=CC[C@H](CC1=C(C(=C(C=C1O)OC)C(=O)/C=C/C2=C(C=C(C=C2)O)O)O)C(=C)C)C
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| InChi Key |
PIAPWPAWQGDOMN-SXAWMYDMSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H30O6/c1-15(2)6-7-18(16(3)4)12-20-23(30)14-24(32-5)25(26(20)31)21(28)11-9-17-8-10-19(27)13-22(17)29/h6,8-11,13-14,18,27,29-31H,3,7,12H2,1-2,4-5H3/b11-9+/t18-/m1/s1
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| 化学名 |
(E)-1-[2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-[(2R)-5-methyl-2-prop-1-en-2-ylhex-4-enyl]phenyl]-3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one
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| 别名 |
34981-25-4; KURAIDIN; kuraridin; (E)-1-[2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-[(2R)-5-methyl-2-prop-1-en-2-ylhex-4-enyl]phenyl]-3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one; (E)-1-(2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-((2R)-5-methyl-2-prop-1-en-2-ylhex-4-enyl)phenyl)-3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one; CHEMBL243362; Z399B8AG6Z;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ≥ 100 mg/mL (228.04 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2804 mL | 11.4022 mL | 22.8045 mL | |
| 5 mM | 0.4561 mL | 2.2804 mL | 4.5609 mL | |
| 10 mM | 0.2280 mL | 1.1402 mL | 2.2804 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。