NF110

Ki: 36 nM (P2X3 Receptor)
NF110 primarily targets the purinergic P2X3 receptor with high affinity (Ki = 36 nM). It also shows lower affinity for P2X1 (Ki = 82 nM) and P2X2 (Ki = 4144 nM) receptors but is inactive toward P2Y1, P2Y2, and P2Y11 receptors (IC50 >10 uM). Additionally, NF110 inhibits HMGA2-DNA interactions (IC50 = 0.87 uM) and shows antitumor activity against several tumor types, suggesting additional off-target or pleiotropic effects.

在人肿瘤细胞系中，NF110 表现出活性，IC30 值为 362.3 μM[2]。NF110 抑制 HMGA2-DNA 相互作用的 IC50 值为 0.87 μM[3]。NF110 仅带有 4 个负电荷，却能强效抑制 HMGA2-DNA 相互作用，IC50 值为 0.87 ± 0.04 μM。相比之下，NF023 虽然带有 6 个负电荷，但其抑制活性 IC50 值却高达 10.63 ± 0.46 μM，是 NF110 的十倍。这些结果表明，电荷和结构对于这些相关化合物抑制 HMGA2-DNA 相互作用都至关重要。

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体外实验表明，NF110 是一种强效的 P2X3 受体拮抗剂。它能阻断大鼠背根神经节 (DRG) 神经元中由 α,β-亚甲基-ATP (α,β-meATP) 诱导的电流，IC50 值为 527 nM。NF110 在人肿瘤细胞系中显示出抗肿瘤活性，IC30 值为 362.3 uM。它还能抑制 HMGA2-DNA 相互作用，IC50 值为 0.87 uM。该化合物对稳定表达的 P2Y 受体无活性（IC50 > 10 M）。NF110 对大鼠 DRG 神经元中的内源性 P2X 受体具有活性，峰值幅度为 675 pA。

NF110 在大鼠 DRG 神经元的内源性 P2X 受体上表现出 675 pA 的峰值振幅的功效[1]。

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体内研究表明，NF110在临床前模型中对多种肿瘤类型具有抗肿瘤活性，但公开资料中关于其体内疗效的详细数据有限。该化合物抑制HMGA2-DNA相互作用的能力可能有助于其发挥抗肿瘤作用。NF110还被用于研究P2X3受体在疼痛和感觉神经传递通路中的功能。

HMGA2 AlphaScreen 超高通量筛选检测 [3]
使用 Labcyte Echo 555 声波分液器，向白色 1536 孔板的第 1-4 列和第 45-48 列分别加入 5 nL DMSO，同时向第 5-44 列分别加入 5 nL 浓度为 2 mM 的化合物 DMSO 溶液。使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向第 1 列和第 2 列分别加入 1 µL 检测缓冲液（30 mM 柠檬酸盐、300 mM NaCl 和 0.005% Tween 20）。接下来，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向第 3-48 列分别加入 1 µL 含有 125 nM HMGA2 的检测缓冲液。最后，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向孔板的每个孔分别加入 1 µL 含有 25 nM FL814 的检测缓冲液。将反应板以 200 × g 离心 1 分钟。室温静置 30 分钟后，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分装器，将 2 µL 含有 20 µg/mL 抗 6xHIS 受体磁珠和 20 µg/mL 链霉亲和素供体磁珠的磁珠缓冲液（10 mM HEPES、300 mM NaCl 和 0.005% Tween 20）分装至每个孔中。再次以 200 × g 离心 1 分钟。室温静置 1 小时后，使用 Perkin Elmer Envision 多功能酶标仪在 AlphaScreen 模式下读取结果。

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HMGA2 Lance 检测 [3]
使用 Labcyte Echo 555 声波分液器，向白色 1536 孔板的第 1-4 列和第 45-48 列分别加入 5 nL DMSO，同时向第 5-44 列分别加入 5 nL 浓度为 2 mM 的化合物 DMSO 溶液。使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向第 1 列和第 2 列分别加入 1 µL 检测缓冲液（10 mM Tris、300 mM NaCl 和 0.005% Tween 20）。接下来，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向第 3-48 列分别加入 1 µL 含有 125 nM HMGA2 的检测缓冲液。最后，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向孔板的每个孔分别加入 1 µL 含有 25 nM FL814 的检测缓冲液。将反应板以 200 × g 离心 1 分钟。室温静置 30 分钟后，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向每个孔中加入 1 µL 含有 250 nM LANCE Ultra ULight-anti-6xHIS 的检测缓冲液和 1 µL 含有 12 nM LANCE Eu-W1024 链霉亲和素的检测缓冲液。再次以 200 × g 离心 1 分钟。室温静置 1 小时后，使用 Perkin Elmer Envision 多功能酶标仪在 TR-FRET 模式下读取反应板（激发波长 340 nm，第一发射波长 665 nm，第二发射波长 615 nm）。

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BRD4 AlphaScreen 检测 [3]
使用 Labcyte Echo 555 声波分液器，向白色 1536 孔板的第 1-4 列和第 45-48 列分别加入 5 nL DMSO，同时向第 5-44 列分别加入 5 nL 浓度为 2 mM 的化合物 DMSO 溶液。使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向第 1 列和第 2 列分别加入 1 µL 检测缓冲液（50 mM HEPES、100 mM NaCl、0.1% BSA 和 0.0005% CHAPS）。接下来，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向第 3-48 列分别加入 1 µL 含有 50 nM BRD4 的检测缓冲液。最后，使用 Beckman BioRAPTR FRD 大容量试剂分液器，向孔板的每个孔中分别加入 1 µL 含有 50 nM 肽的检测缓冲液。将反应板以 200 × g 离心 1 分钟。室温静置 60 分钟后，使用 Beckman BioRAPTR FRD 试剂分液器向每个孔中加入 2 µL 含有 20 µg/mL 抗 6xHis 受体磁珠和 20 µg/mL 链霉亲和素供体磁珠的检测缓冲液。再次以 200 × g 离心 1 分钟。室温孵育过夜后，使用 Perkin Elmer Envision 多功能酶标仪在 AlphaScreen 模式下读取结果。

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在放射性配体结合实验中，将表达人P2X3受体的CHO或HEK293细胞膜与[3H]α,β-meATP或其他选择性P2X3放射性配体在结合缓冲液中孵育，并加入递增浓度的NF110（0.1-1000 nM）。使用过量的非特异性α,β-meATP（10 uM）测定非特异性结合。室温孵育60分钟后，通过过滤分离结合的配体，并计数放射性。Ki值通过曲线拟合计算。

在患者肿瘤细胞中，除FCE 26644外，其他类似物的活性大多低于苏拉明（表3）。为了评估这些类似物与苏拉明作用机制的相似性，我们计算了浓度为200 μg/ml时SI值之间的相关系数。在细胞系分析中，NF037与苏拉明活性模式的相关性最高，其余类似物的相关性则较低至中等（表4）。在患者细胞中，FCE 26644、NF110、NF031和NF037的相关系数较高，表明它们的作用机制相似（表4）。在两种细胞系统中，相关性最低的是两种不对称分子（NF033和NF036）以及NF067，后者含有两个二磷酸化苯环，而非多磺酸化萘环[2]。

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在电生理实验中，培养大鼠背根神经节（DRG）神经元，并进行全细胞膜片钳记录。将不同浓度（100-1000 nM）的NF110溶液灌流至膜片钳电极内。随后施加α,β-meATP（1-10 uM）以激活P2X3受体。记录产生的内向电流，并计算电流抑制的IC50值。在细胞活力实验中，将肿瘤细胞系用NF110（0.1-1000 uM）处理48-72小时，并通过MTT或CellTiter-Glo法评估细胞活力。

患者样本[2]
共收集了19例不同诊断的肿瘤患者样本，用于测定苏拉明类似物的活性。肿瘤样本通过骨髓/外周血采样、常规手术或诊断性活检获得，该采样已获得乌普萨拉大学医院伦理委员会的批准。采用1.077 g/ml Ficoll-Paque密度梯度离心法从骨髓或外周血中分离白血病细胞。将实体瘤样本的肿瘤组织切碎，然后通过胶原酶分散和Percoll密度梯度离心法分离细胞。采用台盼蓝排除法测定细胞活力，并由细胞病理学家通过观察May-Grünwald-Giemsa染色细胞涂片来判断制备物中肿瘤细胞的比例。在某些情况下，细胞先在-70°C下冷冻24小时，然后转移至液氮中保存，最后用10%二甲基亚砜和灭活胎牛血清进行冷冻保存。这种冷冻保存方法不会影响药物敏感性。

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在体内抗肿瘤研究中，NF110通常溶解于合适的溶剂（例如DMSO:PBS或生理盐水）中，并以5-50 mg/kg的剂量，每日一次或隔日一次，腹腔注射给荷瘤小鼠。每2-3天使用游标卡尺测量肿瘤体积。监测体重作为毒性的一般指标。研究结束时，切除肿瘤并称重。在镇痛研究中，NF110可在啮齿动物疼痛模型中进行鞘内注射（10-100 μg/只小鼠），并使用von Frey纤维丝测量痛觉过敏/痛觉超敏。

公开资料中关于 NF110 的详细药代动力学数据有限。该化合物分子量较大（1096.91），且含有多个极性基团，提示其口服生物利用度有限。在研究中，NF110 通常采用腹腔注射或鞘内注射给药。研究人员应开展初步药代动力学研究，以确定其特定模型中的血浆暴露量、半衰期和组织分布。溶解度信息：该化合物通常溶于 DMSO 或 pH 值可调的水性缓冲液中。

已发表的NF110毒理学数据有限。在基于细胞的试验中，该化合物对人肿瘤细胞系的IC30值为362.3 μM，表明其急性细胞毒性相对较低。在用于P2X3拮抗或抗肿瘤活性的剂量下进行的动物研究中，未报告严重毒性。然而，尚未发表全面的毒理学研究。与所有P2X受体拮抗剂一样，应考虑潜在的脱靶效应。

[1]. The suramin analog 4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis (carbonylimino)))tetra-kis-benzenesulfonic acid (NF110) potently blocks P2X3 receptors: subtype selectivity is determined by location of sulfonic acid groups. Mol.

[2]. Antitumour activity of suramin analogues in human tumour cell lines and primary cultures of tumour cells from patients. Eur J Cancer. 2000;36(6):803-809.

[3]. Identification of HMGA2 inhibitors by AlphaScreen-based ultra-high-throughput screening assays. Sci Rep. 2020;10(1):18850. Published 2020 Nov 2.

我们之前已鉴定出苏拉明类似物 4,4',4'',4'''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯基三基双(羰基亚氨基)))四苯-1,3-二磺酸 (NF449) 为重组 P2X(1) 受体的低纳摩尔效力拮抗剂。本文采用双电极电压钳电生理技术对三种苏拉明异构体类似物进行了表征，它们分别命名为对位-4,4',4'',4''''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯基三基双(羰基亚氨基)))四苯磺酸 (NF110)、间位-(3,3',3'',3''''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯基三基双(羰基亚氨基)))四苯磺酸 (NF448) 和邻位-(2,2',2'',2''''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯三基双(羰基亚氨基)))四苯磺酸 (MK3)，并研究了它们在非洲爪蟾卵母细胞中拮抗大鼠P2X受体介导的内向电流的效力。间位、对位和邻位指的是单个磺酸基团相对于连接四个对称取向的苯磺酸部分与中心未改变的苏拉明核心的酰胺键的位置。NF448、NF110 和 MK3 阻断 P2X(1) 受体的效力比 NF449 低 200 倍以上，它们与 NF449 的结构差异仅在于每个苯环上只有一个磺酸残基，而不是两个。虽然间位和邻位异构体保留了对 P2X(1) 受体的选择性，但对位异构体 NF110 对 P2X(3) 受体的活性显著增强（K(i) 约为 36 nM），并且在苏拉明衍生物中表现出以下独特的选择性谱：P2X(2+3) = P2X(3) > P2X(1) > P2X(2) >> P2X(4) > P2X(7)。NF110 的应用价值在于……以下实验可以证明天然组织中存在 P2X(3) 受体拮抗剂：NF110 能以与重组大鼠 P2X(3) 受体相似的效力阻断大鼠背根神经节神经元中 αβ-亚甲基-ATP 诱导的电流。这些数据共同强调了带负电荷基团的数量和确切位置对于 P2X 亚型受体的效力和选择性的重要性。[1]

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NF110是一种研究用化合物，尚未获准用于临床。它广泛用作感觉神经科学研究中的选择性P2X3受体拮抗剂，尤其适用于研究P2X3介导的疼痛、咳嗽和炎症信号通路。其对HMGA2-DNA相互作用的抑制作用也使其成为研究HMGA2在癌症生物学中功能的一种工具。该化合物通常储存在-20℃，避光防潮。它以粉末形式提供，应按照标准的实验室安全操作规程进行操作。

C41H28N6NA4O17S4

1096.91

1096

111150-22-2

16066783

White to off-white solid powder

8.717

419.85

6

17

10

72

1910

0

C1=CC(=CC=C1NC(=O)C2=CC(=CC(=C2)NC(=O)NC3=CC(=CC(=C3)C(=O)NC4=CC=C(C=C4)S(=O)(=O)[O-])C(=O)NC5=CC=C(C=C5)S(=O)(=O)[O-])C(=O)NC6=CC=C(C=C6)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+]

AQJHZNCSXLBXMY-UHFFFAOYSA-J

InChI=1S/C41H32N6O17S4.4Na/c48-37(42-27-1-9-33(10-2-27)65(53,54)55)23-17-24(38(49)43-28-3-11-34(12-4-28)66(56,57)58)20-31(19-23)46-41(52)47-32-21-25(39(50)44-29-5-13-35(14-6-29)67(59,60)61)18-26(22-32)40(51)45-30-7-15-36(16-8-30)68(62,63)64;;;;/h1-22H,(H,42,48)(H,43,49)(H,44,50)(H,45,51)(H2,46,47,52)(H,53,54,55)(H,56,57,58)(H,59,60,61)(H,62,63,64);;;;/q;4*+1/p-4

tetrasodium;4-[[3-[[3,5-bis[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]phenyl]carbamoylamino]-5-[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]benzoyl]amino]benzenesulfonate

NF 110; 111150-22-2; CHEMBL4160315; tetrasodium;4-[[3-[[3,5-bis[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]phenyl]carbamoylamino]-5-[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]benzoyl]amino]benzenesulfonate; Benzenesulfonic acid, 4,4',4'',4'''-[carbonylbis[imino-5,1,3-benzenetriylbis(carbonylimino)]]tetrakis-, tetrasodium salt;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。