NF110

Ki: 36 nM (P2X3 Receptor)

在人类肿瘤细胞系组中，NF110 表现出活性，IC30 为 362.3 μM[2]。 NF110 抑制 HMGA2-DNA 相互作用，IC50 为 0.87 μM[3]。

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NF110只带4个负电荷。然而，它强烈抑制HMGA2-DNA相互作用，IC50为0.87±0.04μM。相比之下，尽管NF023具有6个负电荷，但其抑制IC50被确定为10.63±0.46μM，比NF110高十倍。这些结果表明，电荷和结构对于这些相关化合物抑制HMGA2-DNA相互作用非常重要。

NF110 对大鼠 DRG 神经元的内源性 P2X 受体表现出功效，峰值幅度为 675 pA[1]。

HMGA2-AlphaScreen超高温超导检测[3]
使用Labcyte Echo 555声学分配器，将5nL DMSO添加到白色1536孔板的1-4和45-48柱中，同时将5nL的2mM DMSO化合物添加到5-44柱中。使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器，将1µL测定缓冲液（30 mM柠檬酸盐、300 mM NaCl和0.005%吐温20）添加到柱1和2中。接下来，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将1µL含有125 nM HMGA2的测定缓冲液添加到柱3-48中。最后，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将1µL含有25 nM FL814的测定缓冲液添加到板的每个孔中。然后将平板在200×g下离心1分钟。在室温下离心30分钟后，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将含有20µg/mL抗6xHIS受体珠和20µg/mL链霉抗生物素蛋白供体珠的2µL珠缓冲液（10 mM HEPES、300 mM NaCl和0.005%吐温20）分配到每个孔中。然后将板在200×g下离心1分钟。在室温下离心1小时后，在Perkin-Elmer Envision多模板阅读器上以AlphaScreen模式读取板。

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HMGA2-Lance测定[3]
使用Labcyte Echo 555声学分配器，将5nL DMSO添加到白色1536孔板的1-4和45-48柱中，同时将5nL的2mM DMSO化合物添加到5-44柱中。使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器，将1µL测定缓冲液（10 mM Tris、300 mM NaCl和0.005%吐温20）添加到柱1和2中。接下来，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将1µL含有125 nM HMGA2的测定缓冲液添加到柱3-48中。最后，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将1µL含有25 nM FL814的测定缓冲液添加到板的每个孔中。然后将平板在200×g下离心1分钟。在室温下离心30分钟后，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将1µL含有250 nM LANCE Ultra ULight-anti-6xHIS的测定缓冲液和1µL含12 nM LANCE-Eu-W1024链霉抗生物素蛋白的测定缓冲溶液分配到每个孔中。然后将板在200×g下离心1分钟。在室温下1小时后，在Perkin-Elmer Envision多模板读数仪上以TR-FRET模式读取板（激发波长为340 nm，第一次发射波长为665 nm，第二次发射波长在615 nm）。

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BRD4 AlphaScreen检测[3]
使用Labcyte Echo 555声学分配器，将5nL DMSO添加到白色1536孔板的1-4和45-48柱中，同时将5nL的2mM DMSO化合物添加到5-44柱中。使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器，将1µL测定缓冲液（50 mM HEPES、100 mM NaCl、0.1%BSA和0.0005%CHAPS）添加到柱1和2中。接下来，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将1µL含有50 nM BRD4的测定缓冲液添加到柱3-48中。最后，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将µL含有50 nM肽的测定缓冲液添加到板的每个孔中。然后将平板在200×g下离心1分钟。在室温下离心60分钟后，使用Beckman BioRAPTR FRD散装试剂分配器将2µL含有20µg/mL抗6xHis受体珠和20µg/mL链霉抗生物素蛋白供体珠的测定缓冲液分配到每个孔中。然后将平板在200×g下离心1分钟。在室温下孵育过夜后，在Perkin-Elmer Envision多模平板阅读器上以AlphaScreen模式读取平板读数。

在患者肿瘤细胞中，除FCE 26644外，类似物的效力大多低于苏拉明（表3）。为了指示类似物与苏拉明在作用方式上的相似性，计算了200μg/ml时SI值之间的相关系数。NF037与细胞系面板中苏拉明活性模式的相关性最高，其余类似物的相关性为低至中等（表4）。在患者细胞中，FCE 26644、NF110、NF031和NF037的相关系数很高，表明其作用方式相似（表4）。两种细胞系统中的相关性最低的是两种不对称分子（NF033和NF036）和NF067，NF067含有两个二磷酸化苯环，而不是多磺化萘[2]。

患者样本[2]
共收集了19例不同诊断的肿瘤患者样本，用于测定苏拉明类似物的活性。肿瘤样本通过骨髓/外周血采样、常规手术或诊断性活检获得，该采样已获得乌普萨拉大学医院伦理委员会的批准。采用1.077 g/ml Ficoll-Paque密度梯度离心法从骨髓或外周血中分离白血病细胞。将实体瘤样本的肿瘤组织切碎，然后通过胶原酶分散和Percoll密度梯度离心法分离细胞。采用台盼蓝排除法测定细胞活力，并由细胞病理学家通过观察May-Grünwald-Giemsa染色细胞涂片来判断制备物中肿瘤细胞的比例。在某些情况下，细胞先在-70°C下冷冻24小时，然后转移至液氮中保存，最后用10%二甲基亚砜和灭活胎牛血清进行冷冻保存。这种冷冻保存方法不会影响药物敏感性。

[1]. The suramin analog 4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis (carbonylimino)))tetra-kis-benzenesulfonic acid (NF110) potently blocks P2X3 receptors: subtype selectivity is determined by location of sulfonic acid groups. Mol.

[2]. Antitumour activity of suramin analogues in human tumour cell lines and primary cultures of tumour cells from patients. Eur J Cancer. 2000;36(6):803-809.

[3]. Identification of HMGA2 inhibitors by AlphaScreen-based ultra-high-throughput screening assays. Sci Rep. 2020;10(1):18850. Published 2020 Nov 2.

我们之前已鉴定出苏拉明类似物 4,4',4'',4'''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯三基双(羰基亚氨基)))四苯-1,3-二磺酸 (NF449) 为重组 P2X(1) 受体的低纳摩尔效力拮抗剂。本文采用双电极电压钳电生理技术，对三种苏拉明异构体类似物进行了表征，它们分别命名为对位-4,4',4'',4''''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯三基双(羰基亚氨基)))四苯磺酸 (NF110)、间位-(3,3',3'',3''''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯三基双(羰基亚氨基)))四苯磺酸 (NF448) 和邻位-(2,2',2'',2''''-(羰基双(亚氨基-5,1,3-苯三基双(羰基亚氨基)))四苯磺酸 (MK3)，并研究了它们在非洲爪蟾中拮抗大鼠P2X受体介导的内向电流的效力。卵母细胞。间位、对位和邻位指的是单个磺酸基团相对于连接四个对称取向的苯磺酸部分与中心不变的苏拉明核心的酰胺键的位置。NF448、NF110 和 MK3 阻断 P2X(1) 受体的效力比 NF449 低 200 倍以上，它们与 NF449 的结构差异仅在于每个苯环上只有一个磺酸残基而不是两个。虽然间位和邻位异构体保留了对 P2X(1) 受体的选择性，但对位异构体 NF110 对 P2X(3) 受体的活性显著增强（K(i) 约为 36 nM），并且在苏拉明衍生物中表现出以下独特的选择性谱：P2X(2+3) = P2X(3) > P2X(1) > P2X(2) >> P2X(4) > P2X(7)。NF110作为P2X(3)受体拮抗剂在天然组织中的应用价值可通过以下实验证明：NF110能以与重组大鼠P2X(3)受体相似的效力阻断大鼠背根神经节神经元中αβ-亚甲基-ATP诱导的电流。这些数据共同强调了带负电荷基团的数量和确切位置对于P2X亚型受体的效力和选择性的重要性。[1]

C41H28N6NA4O17S4

1096.91

1096

111150-22-2

16066783

White to off-white solid powder

8.717

419.85

6

17

10

72

1910

0

AQJHZNCSXLBXMY-UHFFFAOYSA-J

InChI=1S/C41H32N6O17S4.4Na/c48-37(42-27-1-9-33(10-2-27)65(53,54)55)23-17-24(38(49)43-28-3-11-34(12-4-28)66(56,57)58)20-31(19-23)46-41(52)47-32-21-25(39(50)44-29-5-13-35(14-6-29)67(59,60)61)18-26(22-32)40(51)45-30-7-15-36(16-8-30)68(62,63)64;;;;/h1-22H,(H,42,48)(H,43,49)(H,44,50)(H,45,51)(H2,46,47,52)(H,53,54,55)(H,56,57,58)(H,59,60,61)(H,62,63,64);;;;/q;4*+1/p-4

tetrasodium;4-[[3-[[3,5-bis[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]phenyl]carbamoylamino]-5-[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]benzoyl]amino]benzenesulfonate

NF 110; 111150-22-2; CHEMBL4160315; tetrasodium;4-[[3-[[3,5-bis[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]phenyl]carbamoylamino]-5-[(4-sulfonatophenyl)carbamoyl]benzoyl]amino]benzenesulfonate; Benzenesulfonic acid, 4,4',4'',4'''-[carbonylbis[imino-5,1,3-benzenetriylbis(carbonylimino)]]tetrakis-, tetrasodium salt;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。