ALDH (Aldehyde dehydrogenase (NAD(P)))   中文名称: 乙醛脱氢酶

应用范围:
1. ALDH可用于检测血液中的乙醛，以达到疾病诊断的目的。
2. 酒精/宿醉的解毒(酒精排毒):醛脱氢酶(ALDH)和酒精脱氢酶可以结合起来补偿身体缺乏的某些酶，减轻酒精对身体的负面影响。

Thermofluor测定[1]
热荧光法用于评估ALDHTt样品的相对热稳定性。采用Sypro橙染料和激发滤光片498 nm和发射滤光片610 nm的qPCR机。样品在25°C下平衡3分钟，然后在25 - 95°C之间逐步加热。加热速率设定为0.03°C/s，对应20个采集/°C。使用OriginPro 9.1绘制一阶导数和Tm。

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酶动力学[1]
酶测定在短时间内进行，以确保挥发性醛没有蒸发损失。从荧光读数变化最大、最稳定的条件中选择并优化标准测定条件。标准酶测定包括10 mM KH2PO4-K2HPO4 (Kpi) pH 8.0, 0.4 mM NAD+， 60 nM ALDH, 1 mM己醛，除另有说明外，总容积为0.5 ml。无底物反应作为阴性对照。在50℃下监测反应60 s。用Cary荧光分光光度计(λ激发= 340 nm;λ发射= 463 nm)，狭缝宽度分别为20 nm和5 nm。将所有组分加热后加入比色皿，并加入底物开始反应。一个单位的酶被定义为催化生成1.0µmol NADH/min的酶量。所有的测定都至少进行两次独立实验，每个反应重复三次。使用originpro9.1进行动力学数据和曲线拟合。

野生型重组ALDHTt及其截短突变体的克隆、制备和结晶[1]
用于扩增和克隆ALDHTt (TTC0513)基因的引物;加入ID: WP_011172958)的pET-22b(+)载体汇总于补充表S2。 将ALDHTt野生型和截断型突变体的构建体DNA分别转化到大肠杆菌BL21 Star (DE3)感受态细胞中。自诱导的ZYM-5052培养基中添加氨苄西林(100µg/ml)，以1% (v/v)的比例接种转化后的细胞过夜，在25℃、200 rpm下摇培养48 h。 收集细胞，离心(6500 × g, 15分钟，4℃)，用500 ml pH为7.5的20 mM Tris-HCl、5 mM β-巯基乙醇、10 mM咪唑和500 mM NaCl洗涤。第二步离心后，将细胞重悬于添加溶菌酶(1mg /ml)和5 mM EDTA pH 8.0的缓冲液中，室温搅拌1小时。然后加入DNase (0.1 mg/ml)和5 mM MgCl2，在4°C下轻轻搅拌1 h，在冰水浴中超声20 min。最后，将混合物加热至65°C 15 min，在25000 × g, 30 min, 4°C下离心。然后将上清液装上XK 16/20柱，柱上含有Ni Sepharose 6 Fast Flow，用20 mM Tris-HCl pH 7.5、5 mM β-巯基乙醇、10 mM咪唑和200 mM NaCl预平衡。结合蛋白在20 mM Tris-HCl, 5 mM β-巯基乙醇和150 mM NaCl, pH 7.5中以60、100、250和500 mM咪唑梯度洗脱。含蛋白质的馏分在50 mM Tris-HCl, 5 mM β-巯基乙醇和250 mM NaCl中透析过夜，pH为7.5，然后使用Amicon Ultra-15离心过滤器，50 kDa MWCO进行浓缩，并装载到HiLoad 16/60 Superdex 200 pg柱上，用50 mM Tris-HCl pH为7.5,5 mM β-巯基乙醇和150 mM NaCl预平衡。

[1]. The quaternary structure of Thermus thermophilus aldehyde dehydrogenase is stabilized by an evolutionary distinct C-terminal arm extension. Sci Rep. 2018 Sep 6;8(1):13327.

Aldehyde dehydrogenases (ALDH) form a superfamily of dimeric or tetrameric enzymes that catalyze the oxidation of a broad range of aldehydes into their corresponding carboxylic acids with the concomitant reduction of the cofactor NAD(P) into NAD(P)H. Despite their varied polypeptide chain length and oligomerisation states, ALDHs possess a conserved architecture of three domains: the catalytic domain, NAD(P)+ binding domain, and the oligomerization domain. Here, we describe the structure and function of the ALDH from Thermus thermophilus (ALDHTt) which exhibits non-canonical features of both dimeric and tetrameric ALDH and a previously uncharacterized C-terminal arm extension forming novel interactions with the N-terminus in the quaternary structure. This unusual tail also interacts closely with the substrate entry tunnel in each monomer providing further mechanistic detail for the recent discovery of tail-mediated activity regulation in ALDH. However, due to the novel distal extension of the tail of ALDHTt and stabilizing termini-interactions, the current model of tail-mediated substrate access is not apparent in ALDHTt. The discovery of such a long tail in a deeply and early branching phylum such as Deinococcus-Thermus indicates that ALDHTt may be an ancestral or primordial metabolic model of study. This structure provides invaluable evidence of how metabolic regulation has evolved and provides a link to early enzyme regulatory adaptations.[1]

9028-88-0

White to light yellow solid powder

Aldehyde dehydrogenase (NAD(P))

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O: ≥ 20 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。