| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HPK1-IN-8 targets Hematopoietic Progenitor Kinase 1 (HPK1, MAP4K1). It is an allosteric inhibitor that binds to a pocket consisting of residues both inside and outside the kinase domain, thereby stabilizing the inactive conformation of the full-length enzyme. This binding attenuates kinase autophosphorylation. Its mechanism is distinct from ATP-competitive inhibitors, offering an alternative strategy for blocking HPK1 function.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在无细胞实验中，HPK1-IN-8 作为一种变构 HPK1 抑制剂，能够减弱激酶的自身磷酸化。它并非与 ATP 竞争，而是稳定全长 HPK1 酶的非活性构象。它被描述为一种“非活性、构象选择性”抑制剂，表明它优先结合并锁定激酶的催化非活性状态，从而阻止其在信号级联反应中的激活。
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| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚未发表HPK1-IN-8的具体体内活性数据。作为一种变构HPK1抑制剂，它预计可通过阻断HPK1介导的负反馈来增强T细胞受体信号传导。它可能增强TCR刺激后IL-2的产生和T细胞的增殖。可在小鼠癌症模型（例如B16-F10黑色素瘤或MC38结肠癌模型）中进行研究，以评估其作为单一药物或与免疫检查点抑制剂联合用药的抗肿瘤免疫效果。
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| 酶活实验 |
HPK1-IN-8 的具体实验方案采用激酶级联反应分析法，具体方法参见 Biochemistry (2021) 文献。为评估非活性 HPK1 构象的稳定性，采用差示扫描荧光法 (DSF) 或热位移分析法 (TSA)。将重组全长 HPK1 蛋白与系列稀释的 HPK1-IN-8 (0.1-10 uM) 和荧光染料 (SYPRO Orange) 混合。温度以每分钟 1 摄氏度的速率从 25 摄氏度升至 95 摄氏度。监测反映蛋白质变性的荧光强度变化。熔解温度 (Tm) 的升高表明该化合物与非活性构象结合并使其稳定。
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| 细胞实验 |
在体外细胞实验中，使用Jurkat T细胞（一种人T淋巴细胞系）来评估HPK1的自磷酸化。将细胞用浓度为0.1 nM至1 uM的HPK1-IN-8处理2小时。然后用抗CD3抗体（10 ug/mL）刺激细胞以激活TCR信号通路。10分钟后，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解细胞。使用抗HPK1抗体从裂解液中免疫沉淀HPK1。使用抗磷酸酪氨酸抗体（pY）通过Western blotting分析免疫沉淀物，以检测HPK1的自磷酸化水平，并以总HPK1抗体作为上样对照。
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| 动物实验 |
一项用于测试变构HPK1抑制剂的体内实验方案将采用卵清蛋白（OVA）特异性T细胞过继转移小鼠模型来检测T细胞的启动。将OVA特异性CD8+ T细胞（OT-I细胞）静脉注射到CD45.1+同源受体小鼠体内。次日，小鼠皮下注射OVA蛋白和CFA佐剂进行免疫。HPK1-IN-8以1-30 mg/kg的剂量每日两次口服给药，连续4天。第4天，收集引流淋巴结和脾脏。通过流式细胞术分析CFSE稀释或Ki-67染色来评估OT-I细胞的增殖。用OVA肽进行体外再刺激后，通过细胞内细胞因子染色来检测细胞因子（IFN-γ、TNF-α）的产生。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
标准数据库中未详细列出HPK1-IN-8的具体药代动力学参数。作为一种具有独特结合口袋的变构激酶抑制剂，通常会在C57BL/6小鼠中进行口服药代动力学研究。HPK1-IN-8以单次口服剂量（例如10 mg/kg）给药，制剂形式包括10% DMSO/90% PEG400。在给药后24小时内的多个时间点采集血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆化合物浓度。计算的关键参数包括半衰期（T1/2）、峰浓度（Cmax）、达峰时间（Tmax）、曲线下面积（AUC）和口服生物利用度（%F）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无HPK1-IN-8的毒理学数据。由于HPK1主要在造血细胞中表达，其主要靶向毒性可能与免疫相关。HPK1介导的负调控过度解除理论上可能导致自身免疫性疾病。标准的安全性评估将包括一项为期14天的大鼠重复给药口服毒理学研究，研究终点包括临床化学、血液学（包括通过流式细胞术进行T细胞亚群分析）、淋巴器官组织病理学和尸检。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
HPK1-IN-8 是一种研究级工具化合物，尚未获准用于临床。其作为一种变构、非活性构象选择性抑制剂的发现于 2021 年 10 月 19 日发表在《生物化学》（Biochemistry）杂志上。其分子式为 C19H17FN6O2S，分子量为 412.44，可溶于 DMSO。该化合物是解析 HPK1 生物学特性和验证其治疗潜力的重要药理学工具。
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| 分子式 |
C19H17FN6O2S
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|---|---|
| 分子量 |
412.440685033798
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| 精确质量 |
412.111
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| CAS号 |
1214561-09-7
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| PubChem CID |
46969799
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
1.7
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| tPSA |
127
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
798
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C12NN=C(C)N1C(=O)C(CC(NC1=NC=C(CC3=CC=CC=C3F)S1)=O)=C(C)N=2
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| InChi Key |
DKCQZXASVNYNLW-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H17FN6O2S/c1-10-14(17(28)26-11(2)24-25-18(26)22-10)8-16(27)23-19-21-9-13(29-19)7-12-5-3-4-6-15(12)20/h3-6,9H,7-8H2,1-2H3,(H,22,25)(H,21,23,27)
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| 化学名 |
2-(3,7-dimethyl-5-oxo-1H-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrimidin-6-yl)-N-[5-[(2-fluorophenyl)methyl]-1,3-thiazol-2-yl]acetamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 10 mg/mL (24.25 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4246 mL | 12.1230 mL | 24.2460 mL | |
| 5 mM | 0.4849 mL | 2.4246 mL | 4.8492 mL | |
| 10 mM | 0.2425 mL | 1.2123 mL | 2.4246 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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