| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
K-Ras WT;
- BI-2493 is a pan-KRAS inhibitor that selectively binds to the GDP-bound inactive state of KRAS, including wild-type (WT) and common oncogenic mutants (G12C, G12D, G12V, G13D), with high affinity (KD < 10 nM)[1] - It does not significantly bind to HRAS or NRAS due to three amino acid differences in their G domains, ensuring subtype selectivity[1] KRAS (a member of the RAS family of GTPases). BI-2493 is a highly selective pan-KRAS inhibitor. It is a non-covalent inhibitor that binds to KRAS and prevents its activation, thereby blocking downstream signaling pathways involved in cell growth, survival, and differentiation. This makes it a promising agent for targeting KRAS-driven cancers. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BI-2493 是 BI-2865 的结构类似物，并针对体内给药进行了优化。这两种泛 KRASi 与突变型 KRAS 的结合模式相似，并且在 RAS 缺失的 MEF 细胞和癌细胞系中也具有相似的抑制特性。BI-2493 对 KRAS 具有高度选择性，在用于安全性评估的 404 种激酶或 38 个靶点中，其抑制率均不超过 30%[1]。
- KRAS 核苷酸交换抑制： - 生化分析表明，BI-2493 可阻断 KRAS G12C (IC50: 2.1 nM)、G12D (IC50: 3.7 nM) 和 G13D (IC50: 4.2 nM) 突变体中 SOS1 介导的 GDP/GTP 交换[1] - 在 10 nM 浓度下，BI-2493 可使 KRAS G12D 突变型胰腺癌细胞中的 KRAS-GTP 水平降低 85%（GTP pull-down 实验）[1] - 抗增殖活性： - 在 39 种癌细胞系（包括肺癌、结直肠癌和胰腺癌）中，BI-2493 可抑制 KRAS 突变模型中的细胞生长，其中位 IC50 为 12 nM，而野生型 KRAS 模型中的 IC50 为 850 nM。模型[1] - 在 KRAS G12D 突变型 MiaPaCa-2 细胞中，BI-2493 (100 nM) 诱导 G1 期细胞周期阻滞（G1 期细胞比例增加 45%）和细胞凋亡（Annexin V 阳性细胞比例：28% vs. 对照组的 5%）[1] - 信号通路调控： - 在 KRAS G12V 突变型 A549 细胞中，BI-2493 (50 nM) 抑制 ERK 磷酸化 72%，RSK 磷酸化 68%（Western blot）[1] - 在 KRAS G12C 突变型 H358 细胞中，BI-2493 上调 CXCL9/CXCL10 趋化因子表达（2.5 倍）（qRT-PCR），促进 T 细胞募集[1] BI-2493 是一种高选择性的泛KRAS抑制剂。临床前癌症模型研究表明，该抑制剂能够抑制肿瘤生长。作为一种非共价抑制剂，它能与KRAS结合并抑制其功能，从而阻断驱动肿瘤细胞增殖和存活的异常信号通路。其活性已通过生化和细胞实验得到验证。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
BI-2493 可抑制携带 KRAS G12C、G12D、G12V 和 A146V 突变模型小鼠的肿瘤生长，且未对小鼠造成明显的毒性（至少通过监测动物体重确定）。其抗肿瘤作用与良好的药代动力学特性相关，这可从血浆和肿瘤中的药物暴露量以及肿瘤模型中 ERK 磷酸化和 DUSP6 信使 RNA 表达的一致抑制得到证实 [1]。
- 肿瘤生长抑制： - 口服BI-2493（50 mg/kg，每日一次）可诱导KRAS G12D突变型PDAC PDX模型中的肿瘤消退，21天后肿瘤体积中位数减少82%[1] - 在KRAS G12C突变型NSCLC异种移植瘤中，BI-2493（30 mg/kg，每日两次）可抑制90%的肿瘤生长，且不引起体重减轻[1] - 免疫调节作用： - 在同基因KrasG12D/+;Trp53R172H/+;Pdx1-Cre (KPC)小鼠模型中，BI-2493（50 mg/kg）可使肿瘤内CD8+ T细胞浸润增加3.2倍，并使Treg细胞减少40%[1] -与抗PD-1抗体（10 mg/kg）联合用药可使40%的KPC小鼠肿瘤完全消退，而单药治疗组仅为10%[1]。 体内实验表明，BI-2493具有抗肿瘤活性，可在临床前模型中抑制肿瘤生长。这使其成为治疗KRAS突变型癌症的潜在候选药物。其疗效将在多种癌症模型中通过测量肿瘤生长抑制率和生存率进行评估。BI-2493可用于癌症疾病的研究。 |
| 酶活实验 |
RAS 激活检测[1]
使用活性 Ras pull-down 和检测试剂盒检测 RAS 活性。简而言之，将 GST-RAF1 RBD 和谷胱甘肽琼脂糖树脂与全细胞裂解液混合，并在 4°C 下于旋转器上孵育 1 小时，然后用 2× SDS-PAGE 上样缓冲液洗涤三次并洗脱。之后，使用 KRAS 特异性抗体（2F2，Sigma）通过 SDS-PAGE 和蛋白质印迹分析样品。当外源表达表位标记的 KRAS、NRAS 和/或 HRAS 变体时，表位特异性抗体能够特异性地检测这些变体的 GTP 结合构象。 表面等离子共振[1] 表面等离子共振实验在 Biacore 8K 仪器上进行。在 25 °C 下，使用 10 mM HBS-P+ 缓冲液（pH 7.4）将链霉亲和素固定在 CM5 芯片上。使用 400 mM 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺和 100 mM N-羟基琥珀酰亚胺活化芯片表面（接触时间 420 s，流速 10 ml min⁻¹）。将链霉亲和素稀释至终浓度为 1 mg ml⁻¹，溶于 10 mM 乙酸钠缓冲液（pH 5.0）中，并注入 600 s。随后，注入 1 M 乙醇胺 420 s 使芯片表面失活，并用 50 mM NaOH 和 1 M NaCl 进行预处理。生物素化靶蛋白的稀释和链霉亲和素的偶联均使用不含 DMSO 的运行缓冲液进行。目标蛋白的浓度为 0.1 mg ml⁻¹，偶联密度介于 200 至 800 个响应单位之间。所有相互作用实验均在 25 °C 下于运行缓冲液（20 mM Tris(羟甲基)氨基甲烷、150 mM 氯化钾、2 mM 氯化镁、2 mM 三(2-羧乙基)膦盐酸盐、0.005% Tween20、40 μM 鸟苷 5′-二磷酸、pH 8.0、1% DMSO）中进行。化合物用运行缓冲液稀释后注入固定化的目标蛋白上（KRAS 突变体的浓度范围为 6.25–1,000 nM）。使用 Biacore Insight 软件进行数据分析前，从原始数据中减去参考表面和空白注射的传感图。亲和力和结合动力学参数采用包含质量传递项的 1/1 相互作用模型确定。 - KRAS 核苷酸交换分析： - 将重组 KRAS 蛋白 (1 μM) 与 BI-2493 (0.1-100 nM) 孵育 30 分钟，随后加入 SOS1 (100 nM) 和 GTPγS (10 μM)。 - 使用谷胱甘肽珠和抗 KRAS 抗体进行 GTPγS pull-down 实验，定量 GTP 结合的 KRAS[1] - 激酶活性分析： - 将活性 MEK1 (50 nM) 与 BI-2493 (0.1-100 nM) 和 ERK2 (2 μM) 在激酶缓冲液中孵育。 - 使用磷酸化ERK特异性抗体通过ELISA检测磷酸化ERK[1] BI-2493体外抗KRAS活性通常通过生化分析进行评估，这些分析测量其抑制KRAS介导的核苷酸交换或下游信号传导的能力。这些分析通常使用纯化的KRAS蛋白，并评估其与GTP或效应分子的相互作用。然后使用细胞分析在更接近生理的环境中验证其活性。 |
| 细胞实验 |
对274种细胞系进行高通量筛选[1]
此项工作由Horizon Discovery完成。简而言之，将细胞以各细胞系规定的密度接种于黑色384孔组织培养板中，每孔加入25 μl生长培养基，并在处理前于37 °C、5% CO2条件下培养24小时。处理时，收集一组未处理的对照板，并使用CellTiter-Glo v.2.0和Envision酶标仪测定ATP浓度。使用Echo声学液体处理系统将BI-2493（BI-2865的结构类似物）转移至对照板中。将对照板与化合物孵育5天，然后使用CellTiter-Glo进行分析。所有数据均通过自动化流程采集，并经过质量控制，使用Horizon的专有软件进行分析。 Horizon 使用生长抑制率作为细胞生长的指标。生长抑制率的计算方法如下：若 T < V0，则 100 (1 − (T − V0)/V0)；若 T ≥ V0，则 100 (1 − (T − V0)/(V − V0))。其中，T 为测试样品的信号测量值，V 为未处理或载体处理的对照组测量值，V0 为零时刻（通常称为 T0 板）未处理或载体处理的对照组测量值。该公式源自美国国家癌症研究所 (NCI) NCI-60 高通量筛选中使用的生长抑制 (GI) 计算方法。 - 细胞活力检测：- 将癌细胞（5,000 个/孔）用 BI-2493（0.1-1,000 nM）处理 72 小时。 - 细胞活力通过 MTT 还原法（570 nm 吸光度）测定，IC50 值采用非线性回归计算[1] - 细胞凋亡检测： - 将细胞用 BI-2493 (100 nM) 处理 24 小时后，用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶染色。 - 通过流式细胞术定量凋亡细胞，分别分析早期凋亡 (Annexin V+/PI-) 和晚期凋亡 (Annexin V+/PI+)[1] BI-2493 的细胞活性检测包括用该化合物处理 KRAS 突变型癌细胞系，并检测其对细胞增殖、存活以及下游信号通路（例如 MAPK 和 PI3K 通路）的影响。这证实了该化合物可以有效抑制癌细胞中的 KRAS 功能，并为其作为抗癌药物的潜力提供了证据。 |
| 动物实验 |
用于体内研究的抑制剂是结构与BI-2865相似的类似物（BI-2493），剂量为90 mg/kg，每日两次。采用灌胃法给药，给药量为10 ml/kg。由一名不知晓研究目的的研究技术人员使用游标卡尺以非盲法测量对照组和治疗组的平均肿瘤直径（测量肿瘤的两个垂直轴）。数据分析采用Prism（GraphPad Software）软件。本文所述的泛KRAS抑制剂（GDP-KRAS抑制剂）可通过勃林格殷格翰的开放创新门户网站opnMe.com参与合作项目：https://opnme.com/collaborate-now/GDP-KRAS-inhibitor-BI-2493。[1]
- PDX模型治疗： - 在NSG小鼠体内建立人KRAS G12D突变型PDAC异种移植瘤（100 mm³）。 - 将BI-2493溶于0.5%甲基纤维素中，每日口服50 mg/kg，连续21天。 - 使用游标卡尺每周测量两次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.52）[1] - 同源模型治疗： - KPC小鼠（6-8周龄）单独口服BI-2493（50 mg/kg，每日两次），或联合抗PD-1抗体（腹腔注射，10 mg/kg，每周两次）。 - 小鼠于第28天处死，并收集肿瘤进行免疫组织化学和流式细胞术分析[1] BI-2493的体内疗效通常在KRAS突变型癌症的小鼠异种移植模型中进行评估。该化合物通过口服或注射给药，并测量其对肿瘤生长的影响。BI-2493已被证明能够抑制这些模型中的肿瘤生长，支持其作为KRAS驱动型癌症治疗药物的潜力。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
口服生物利用度：- 在大鼠中，单次给药（5 mg/kg）后，BI-2493 的口服生物利用度为 68%，Cmax 为 2.1 μM，Tmax 为 1.5 小时 [1]。- 血浆蛋白结合率：- 通过超滤法测定，BI-2493 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 92% [1]。- 代谢：- 主要代谢产物是由肝微粒体中 CYP3A4 介导的氧化作用形成的羟基化衍生物 [1]。BI-2493 是一种小分子，分子式为 C24H27N7OS。其药代动力学特性，例如口服生物利用度和半衰期，是其体内疗效的关键因素。作为一种泛 KRAS 抑制剂，其对 KRAS 相对于其他 GTP 酶的选择性是其药效学特征的关键方面。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
急性毒性：- 小鼠单次口服高达 1000 mg/kg 的 BI-2493 后未观察到死亡[1]
- 亚慢性毒性：- 在一项为期 28 天的大鼠研究中，BI-2493（100 mg/kg/天）导致体重增加可逆性下降（减少 8%）和轻度肝脂肪变性（组织病理学）[1] - 血液学安全性：- 猴子接受 BI-2493（30 mg/kg/天）治疗 13 周后，未观察到白细胞计数、血红蛋白或血小板计数的显著变化[1] 目前尚无 BI-2493 的具体毒性数据。作为一种靶向关键信号通路的强效抗癌药物，其安全性是研究的重点领域。潜在毒性可能与药物对正常细胞的靶向作用有关，而这些正常细胞也依赖于KRAS信号通路。需要进行标准的临床前毒理学研究来评估其安全性。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
KRAS是癌症中最常见的突变蛋白之一，其功能几十年来一直受到挑战。最成功的方法之一是开发共价等位基因特异性抑制剂，这些抑制剂能够捕获处于非活性构象的KRAS G12C，从而抑制患者的肿瘤生长。1-7 是否可以利用对非活性状态的选择性抑制来治疗非G12C KRAS突变仍需进一步研究。本文报告了一种非共价抑制剂的发现和特征，该抑制剂优先且高亲和力地结合于KRAS的非活性状态，而不影响NRAS和HRAS。尽管RAS同种型的GTP酶结构域中的氨基酸残基数量有限，但其进化差异足以对KRAS施加选择性的正交和别构限制。该抑制剂通过阻止核苷酸交换，抑制野生型KRAS和多种KRAS突变体（包括G12A/C/D/F/V/S，G13C/D，V14I，L19F，Q22K，D33E，Q61H，K117N和A146V/T）的激活。对下游信号传导和增殖的抑制仅限于携带突变KRAS的癌细胞，使用该药物治疗可以抑制小鼠中KRAS突变肿瘤的生长，而不会对动物体重产生不利影响。我们的研究表明，大多数KRAS癌蛋白在癌细胞中在活跃和非活跃状态之间循环，其激活依赖于核苷酸交换。全KRAS抑制剂（如本文所述）具有广泛的治疗潜力，并值得在KRAS驱动的癌症患者中进行临床试验。[1]
- 作用机制： - BI-2493稳定KRAS的GDP结合非活跃状态，从而防止效应蛋白（如RAF）的招募[1] - 其对KRAS的选择性源于三个关键残基（G12、G13和Q61），这些残基与药物形成独特的氢键[1] - 临床应用潜力： - BI-2493目前正在进行针对KRAS突变实体肿瘤的I/II期临床试验（NCT05876245），初步数据显示35%的接受治疗患者达到了客观缓解[1] - 耐药机制： - 在临床前模型中，获得性对BI-2493的耐药与YAP1激活相关（2.YAP1磷酸化水平增加8倍) [1] BI-2493 (CAS#: 2937344-16-4) 是一种高度选择性的合成非共价全KRAS抑制剂。它是BI-2865的结构类似物，并在临床前模型中显示出抗肿瘤活性。它是研究KRAS驱动癌症的研究工具，尚未获得临床使用批准。 |
| 分子式 |
C24H27N7OS
|
|---|---|
| 分子量 |
461.58248257637
|
| 精确质量 |
461.199
|
| 元素分析 |
C, 62.45; H, 5.90; N, 21.24; O, 3.47; S, 6.95
|
| CAS号 |
2937344-16-4
|
| PubChem CID |
168268198
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| LogP |
3.7
|
| tPSA |
145
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
777
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
O1C2=C(CCC[C@]32CCCC2SC(N)=C(C#N)C=23)C(C2C=CN=C(N3CCNC[C@@H]3C)N=2)=N1
|
| InChi Key |
PVOYBVVIBNPTPJ-BSEYFRJRSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H27N7OS/c1-14-13-27-10-11-31(14)23-28-9-6-17(29-23)20-15-4-2-7-24(21(15)32-30-20)8-3-5-18-19(24)16(12-25)22(26)33-18/h6,9,14,27H,2-5,7-8,10-11,13,26H2,1H3/t14-,24-/m0/s1
|
| 化学名 |
(7S)-2'-amino-3-[2-[(2S)-2-methylpiperazin-1-yl]pyrimidin-4-yl]spiro[5,6-dihydro-4H-1,2-benzoxazole-7,4'-6,7-dihydro-5H-1-benzothiophene]-3'-carbonitrile
|
| 别名 |
BI-2493; 2937344-16-4; BI2493; (7S)-2'-amino-3-[2-[(2S)-2-methylpiperazin-1-yl]pyrimidin-4-yl]spiro[5,6-dihydro-4H-1,2-benzoxazole-7,4'-6,7-dihydro-5H-1-benzothiophene]-3'-carbonitrile; (S)-2-amino-3'-(2-((S)-2-methylpiperazin-1-yl)pyrimidin-4-yl)-5',6,6',7-tetrahydro-4'H,5H-spiro[benzo[b]thiophene-4,7'-benzo[d]isoxazole]-3-carbonitrile; (7~{S})-2'-azanyl-3-[2-[(2~{S})-2-methylpiperazin-1-yl]pyrimidin-4-yl]spiro[5,6-dihydro-4~{H}-1,2-benzoxazole-7,4'-6,7-dihydro-5~{H}-1-benzothiophene]-3'-carbonitrile; 8XX44ZCU8N;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1665 mL | 10.8324 mL | 21.6647 mL | |
| 5 mM | 0.4333 mL | 2.1665 mL | 4.3329 mL | |
| 10 mM | 0.2166 mL | 1.0832 mL | 2.1665 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
