HEP-1 Acetate (Human ezrin peptide (324-337))

别名: HEP-1; gepon; Human ezrin peptide (324-337); 174641-44-2; orb1942551; SCHEMBL30942637;
目录号: V76178 纯度: ≥98%
HEP-1(人埃兹蛋白肽 (324-337))是一种口服肽,具有抗 HIV 活性。
HEP-1 Acetate (Human ezrin peptide (324-337)) CAS号: 174641-44-2
产品类别: HIV
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: ≥98%

纯度: =99.54%

产品描述
HEP-1(人埃兹蛋白肽 (324-337))是一种口服肽,具有抗 HIV 活性。 HEP-1 增强乙型肝炎疫苗接种产生的抗体滴度。 HEP-1 可用于研究抗病毒感染。
GEPON (HEP1) 是一种合成十四肽(序列 TEKKRRETVEREKE),模拟人埃兹蛋白(ezrin)α结构域中的Hep受体。自2001年起在俄罗斯注册为免疫调节剂(商品名 Gepon),用于局部和全身给药,以恢复对病毒、细菌和真菌感染的有效免疫力。该药临床使用超过20年,安全记录良好。Gepon可抑制炎症细胞因子(尤其是IL-6),并增强适应性B细胞和T细胞免疫。已成功用于HIV患者的机会性感染、慢性念珠菌病、小肠结肠炎、消化道溃疡,以及作为吸入喷雾治疗轻中度COVID-19。 [1]
生物活性&实验参考方法
靶点
Ezrin (Hep-receptor in the α domain, amino acids 308–372). No IC50, Ki, EC50, or DC50 values reported. [1]
B-cell receptor (BCR) complex; ezrin-actin cytoskeleton. [1]
Antiviral against various viruses such as HIV, HCV, herpes viruses, HPV, and influenza viruses
HEP-1 enhances antibody titers generated by hepatitis B vaccination and is effective against infections by various viruses including HIV, HCV, herpes viruses, HPV, and influenza viruses. As an immunomodulator, it enhances immune responses to vaccination and viral infection.
体外研究 (In Vitro)
在PHA(3 μg/mL,24小时,37°C)刺激的人外周血白细胞中,GEPON(Rupe312,RepG3的活性序列)在1、3、10、30、100 ng/mL浓度下抑制IL-6、IL-1β、IL-8和TNFα的表达。在100 ng/mL时,IL-6表达相对对照(零肽)降低95%。IL-2表达不受影响。[1]
在小鼠DSS诱导的结肠炎模型中,HEP1 (Gepon) 和RepG3(GEKKRRETVEREGG)在有无LPS存在下均降低结肠组织IL-6 mRNA表达。RepG3的抗炎活性是HEP1的两倍。[1]
在NIH/3T3成纤维细胞中,GEPON 诱导分化,激活ERK1/2依赖性信号通路,划痕试验中细胞迁移率增加25%。GEPON还诱导FAK磷酸化。[2]
从DSS结肠炎小鼠分离的骨髓Ly6C+单核细胞体外培养,加入GEPON(50 μg/mL,14小时,37°C,5% CO2)后,IL-1β和IL-6的mRNA表达显著下降(p=0.034和p=0.022)。[2]
体内研究 (In Vivo)
在DSS诱导的小鼠结肠炎模型(C57BL/6小鼠,2.5% DSS两周期,每周期5天间隔5天,GEPON 2.25 mg/kg腹腔注射,每48小时一次,第1天至第19天)中,GEPON显著减轻体重下降(DSS组下降14%,GEPON组下降<6%,p<0.0001),降低疾病活动指数(DAI从5-6降至2-3),降低死亡率,并防止结肠缩短(DSS组:7.0±0.6 cm;GEPON组:8.5±0.6 cm,p=0.008;健康组:9.6±0.5 cm)。GEPON使结肠组织中Il1b、Il6和Nos2的mRNA分别降低2.8倍、3.4倍和3.2倍。Tgfb1、Il10和Arg1无显著变化。[2]
GEPON使结肠CD45+白细胞浸润从1.2×10⁶降至0.7×10⁶个细胞/结肠(p=0.009),Ly6G+粒细胞从5.6×10⁴降至2.5×10⁴(p=0.012),Ly6C+单核细胞从9.3×10⁴降至4.5×10⁴(p=0.008)。巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、CD4+和CD8+ T细胞无显著变化。单核细胞:巨噬细胞比值降低2倍(p=0.003)。[2]
在DSS小鼠分选的结肠Ly6C+单核细胞中,GEPON治疗使Tnf mRNA降低4.1倍(p=0.004),Nos2 mRNA降低4.5倍(p=0.009),Arg1 mRNA降低2.5倍(p=0.035)。在Ly6G+粒细胞中,Tnf mRNA降低3.6倍(p=0.017),Nos2 mRNA降低4.3倍(p=0.048)。对巨噬细胞无影响。[2]
在绵羊红细胞或卵清蛋白免疫的小鼠中,HEP1 (Gepon)(腹腔注射0.1 μg/只,免疫前1小时)使脾脏中IgM抗体形成细胞数量增加2.5倍(从600增至1500个/脾)。口服HEP1预处理(0.5 mg/只/天,持续20天)使加强免疫后血清血凝素和溶血素滴度提高2-3倍。[1]
在致死性疱疹病毒感染小鼠模型(HSV-1,1000 LD50)中,HEP1预处理(100 ng/只,腹腔注射,感染前48小时和24小时)将存活期延长至10.1天,未处理对照组为1.25天,Ridostin组(100 μg/只)为6天。[1]
在一项儿童乙肝疫苗接种研究(Kombiotech疫苗,4次注射)中,舌下给予HEP1(每次接种前2 mg/2 mL)使平均抗-HBs滴度从90.4升至181.1 mIU/mL,并将100–1000 mIU/mL范围的患者比例提高2倍,>1000 mIU/mL的比例提高4倍。[1]
细胞实验
分离人外周血白细胞,用植物血凝素(PHA,3 μg/mL)在37°C刺激24小时。向培养基中加入不同浓度的GEPON(Rupe312,1、3、10、30、100 ng/mL)。孵育后,以pg/mL测量细胞因子浓度(IL-6、IL-1β、IL-8、TNFα、IL-2),并相对于零肽对照(设为100)表示。100 ng/mL肽时IL-6表达降低95%。[1]
从naive小鼠和DSS结肠炎小鼠(第6天)分离骨髓Ly6C+单核细胞和Ly6G+粒细胞。通过FACS分选细胞,以DMEM培养基(含FBS)在96孔板中培养,密度分别为每孔50,000个Ly6C+细胞或150,000个Ly6G+细胞,三复孔。GEPON以50 μg/mL加入。细胞在37°C、5% CO2孵育14小时,然后收获用于实时定量PCR分析mRNA。GEPON显著降低Ly6C+单核细胞中IL-1β和IL-6的mRNA(p=0.034和p=0.022)。[2]
培养NIH/3T3成纤维细胞,加入GEPON评估分化和迁移。进行划痕试验,GEPON处理使细胞迁移率增加25%。观察到ERK1/2依赖性细胞内信号级联激活和FAK磷酸化。[2]
动物实验
DSS结肠炎模型:8-10周龄雄性C57BL/6小鼠(21-23 g),饮用水中加入2.5% DSS聚合物,连续5天,然后换普通水5天,再重复一个DSS周期,之后继续普通水4天。GEPON(2.25 mg/kg体重)溶于水,腹腔注射,体积50 μL,每48小时一次,从第1天至第19天。对照组仅给予水或DSS+溶剂(水,腹腔注射)。第19天处死小鼠,收集结肠用于长度测量、流式细胞术和PCR分析。[2]
小鼠免疫研究:(CBA × C57Bl)F1小鼠,HEP1口服给药0.5 mg/0.2 mL/只/天,持续20天,然后在第1天腹腔注射2000万绵羊红细胞进行免疫,第21天加强免疫(同样剂量)。每周测量血清血凝素和溶血素滴度。或者,小鼠在腹腔注射500万绵羊红细胞前1小时,腹腔注射HEP1(0.01-10 μg/只)。4天后收集脾脏计数抗体形成细胞。[1]
致死性疱疹感染模型:B/P白化小鼠(10-12 g),在感染前48小时和24小时腹腔注射HEP1(1、10或100 ng/只,溶于0.2 mL生理盐水),然后腹腔注射1000 LD50的1型单纯疱疹病毒(HSV-1 L2株,滴度3.5 Log/0.2 mL)。观察14天。阳性对照给予Ridostin(100 μg/只),阴性对照不给佐剂。[1]
儿童乙肝疫苗接种研究:患有恶性肿瘤的儿童接受Kombiotech乙肝疫苗(KHBV)注射,每月一次共3次,并在开始后第6个月注射第4次。HEP1组(n=15)在每次疫苗接种前舌下给予2 mg/2 mL HEP1溶液,含在口中2分钟后吞咽。对照组(n=16)接种疫苗但不给HEP1。测量抗-HBs滴度。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
接受鼻内GEPON(2 mg溶于2 mL水,每鼻孔5滴,每日2次,共5天)的儿童未观察到不良反应、副作用、过敏反应、超敏反应或禁忌症。未发现特应性皮炎加重。未报告药物不良相互作用。[1]
在俄罗斯超过20年的临床使用中,GEPON具有极好的安全性记录。[1]
参考文献
[1]. Ezrin Peptide Therapy from HIV to COVID: Inhibition of Inflammation and Amplification of Adaptive Anti-Viral Immunity. Int J Mol Sci. 2021 Oct 28;22(21):11688.
[2]. Pharmaceutical grade synthetic peptide Thr-Glu-Lys-Lys-Arg-Arg-Glu-Thr-Val-Glu-Arg-Glu-Lys-Glu ameliorates DSS-induced murine colitis by reducing the number and pro-inflammatory activity of colon tissue-infiltrating Ly6G+ granulocytes and Ly6C+ monocytes. Peptides. 2020 Oct;132:170364.
其他信息
GEPON (HEP1) 自2001年起在俄罗斯联邦注册用于人体,是一种局部和全身给药的免疫调节剂。对HIV患者的机会性感染、慢性复发性阴道念珠菌病、急慢性小肠结肠炎、菌群失调、胃十二指肠溃疡和炎症性肠病有效。已作为吸入喷雾用于治疗轻中度COVID-19。[1]
机制假说:埃兹蛋白肽结合到细胞表面(淋巴细胞、上皮细胞、成纤维细胞、单核细胞、巨噬细胞)埃兹蛋白的“受体”构象,诱导活性埃兹蛋白的变构打开,进而组织信号复合物(Ras>Raf>MEK>ERK,PI3K>AKT),增强B细胞活化和抗体产生。抑制IL-6可能通过激活CREB,与NFκB竞争CBP/p300辅因子实现。[1]
GEPON 也称为HEP1(人埃兹蛋白肽一号),其活性药物成分为TEKKRRETVEREKE。衍生物RepG3(GEKKRRETVEREGG)在DSS结肠炎模型中的抗炎活性是HEP1的两倍。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C74H132N26O27
分子量
1817.99789619446
精确质量
1816.975
CAS号
174641-44-2
PubChem CID
25078222
序列
Thr-Glu-Lys-Lys-Arg-Arg-Glu-Thr-Val-Glu-Arg-Glu-Lys-Glu
短序列
TEKKRRETVEREKE
外观&性状
White to off-white solid at room temperature
LogP
-20.3
tPSA
940
氢键供体(HBD)数目
31
氢键受体(HBA)数目
34
可旋转键数目(RBC)
69
重原子数目
127
分子复杂度/Complexity
3730
定义原子立体中心数目
16
SMILES
O=C([C@H](CCCCN)NC([C@H](CCCCN)NC([C@H](CCC(=O)O)NC([C@H]([C@@H](C)O)N)=O)=O)=O)N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@@H]([C@@H](C)O)C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(=O)O)CCC(=O)O)=O)CCCCN)=O)CCC(=O)O)=O)CCC/N=C(\N)/N)=O)CCC(=O)O)=O)C(C)C)=O)=O)CCC(=O)O)=O)CCC/N=C(\N)/N)=O)CCC/N=C(\N)/N
InChi Key
HTQONPPEZULJKY-XRBNWYQFSA-N
InChi Code
InChI=1S/C74H132N26O27/c1-36(2)56(69(124)97-47(22-27-52(107)108)66(121)93-44(19-13-35-87-74(83)84)61(116)94-45(20-25-50(103)104)64(119)90-41(16-7-10-32-77)63(118)98-49(71(126)127)24-29-54(111)112)99-70(125)57(38(4)102)100-67(122)48(23-28-53(109)110)95-62(117)43(18-12-34-86-73(81)82)92-60(115)42(17-11-33-85-72(79)80)91-59(114)39(14-5-8-30-75)88-58(113)40(15-6-9-31-76)89-65(120)46(21-26-51(105)106)96-68(123)55(78)37(3)101/h36-49,55-57,101-102H,5-35,75-78H2,1-4H3,(H,88,113)(H,89,120)(H,90,119)(H,91,114)(H,92,115)(H,93,121)(H,94,116)(H,95,117)(H,96,123)(H,97,124)(H,98,118)(H,99,125)(H,100,122)(H,103,104)(H,105,106)(H,107,108)(H,109,110)(H,111,112)(H,126,127)(H4,79,80,85)(H4,81,82,86)(H4,83,84,87)/t37-,38-,39+,40+,41+,42+,43+,44+,45+,46+,47+,48+,49+,55+,56+,57+/m1/s1
化学名
(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]pentanedioic acid
别名
HEP-1; gepon; Human ezrin peptide (324-337); 174641-44-2; orb1942551; SCHEMBL30942637;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: ~ 50 mg/mL (27.5 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.5501 mL 2.7503 mL 5.5006 mL
5 mM 0.1100 mL 0.5501 mL 1.1001 mL
10 mM 0.0550 mL 0.2750 mL 0.5501 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT04627233 Covid19; Corona Virus Infection PHASE1
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