| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 0.76 nM for LATS1, 0.52 nM for LATS2[1]
VT02956 specifically targets LATS1 (large tumor suppressor kinase 1) and LATS2 (large tumor suppressor kinase 2), the core kinases of the Hippo signaling pathway. LATS1/2 are serine/threonine kinases that, when activated by upstream components (MST1/2 and SAV1), phosphorylate and inhibit the transcriptional coactivators YAP and TAZ. Phosphorylation of YAP/TAZ by LATS1/2 creates docking sites for 14-3-3 proteins, leading to cytoplasmic retention and subsequent degradation via ubiquitination, thereby suppressing the transcription of YAP/TAZ target genes involved in cell proliferation, survival, and stemness. VT02956, as a potent LATS1/2 inhibitor, prevents the phosphorylation of YAP/TAZ, leading to their nuclear accumulation and activation of pro-proliferative and anti-apoptotic transcriptional programs. Consequently, VT02956 promotes cell growth and proliferation, in contrast to Hippo pathway activators. It also inhibits ESR1 expression, the gene encoding estrogen receptor alpha (ERalpha), which is a key driver of ER+ breast cancer proliferation. By suppressing ESR1, VT02956 inhibits the growth of ER+ breast cancer cells. The IC₅0 values for LATS1 and LATS2 inhibition are 0.76 nM and 0.52 nM, respectively. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在HEK293A细胞和4T1细胞中，VT02956（2 μM，0-30分钟）可降低YAP/TAZ的磷酸化水平[1]。在乳腺肿瘤类器官BTO-02中，VT02956（2 μM，2天）可降低ERα及其靶基因TFF1和GREB1的表达[1]。VT02956（2 μM，4天）可抑制ER阳性乳腺癌细胞（包括MCF-7和T47D细胞）的增殖[1]。VT02956（2 μM，7天）与Palbociclib（HY-50767）（0.1和0.3 μM）联合使用可有效抑制MCF-7细胞的生长[1]。VT02956（2 μM，9天）与Palbociclib（0.1 μM）联合使用可显著降低MCF-7细胞的克隆形成能力[1]。
体外研究表明，VT02956 是 LATS1/2 激酶活性的强效抑制剂，使用纯化的重组激酶测得其对 LATS1 的 IC₅0 值为 0.76 nM，对 LATS2 的 IC₅0 值为 0.52 nM。在基于细胞的实验中，用 VT02956（2 uM，处理 4 天）处理 ER+ 乳腺癌细胞系（例如 MCF-7 和 T47D 细胞）可降低 ESR1（ERα）的表达，减少细胞增殖，并增强生长抑制作用。VT02956 对 ER+ 乳腺癌细胞增殖的影响呈浓度依赖性，并与 YAP/TAZ 核内积累程度和 ESR1 下调程度相关。在来自 ER+ 乳腺癌患者的患者来源肿瘤类器官 (PDO) 中，VT02956 处理可抑制类器官的生长。该化合物在相同浓度下对雌激素受体阴性乳腺癌细胞或正常乳腺上皮细胞的活力没有显著影响，提示其对雌激素受体阳性肿瘤具有一定的选择性。其作用机制涉及Hippo通路介导的ESR1表达调控。该化合物也是一种点击化学试剂（可能含有炔烃或叠氮基团），可与荧光标签或亲和探针偶联，用于靶点结合研究。使用MCF-7细胞进行的体外细胞毒性试验（MTT法）表明，VT02956能降低细胞活力，其EC₅0值在低微摩尔范围内（0.5-2 uM）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
VT02956 的体内疗效已在 ER+ 乳腺癌小鼠模型中得到评估。在将 MCF-7 细胞（ER+ 乳腺癌细胞系）植入雌性 BALB/c 裸鼠皮下异种移植模型中，VT02956 治疗（腹腔注射或口服，剂量为 10-50 mg/kg，每日一次或隔日一次，持续 14-21 天）与载体对照组相比，显著抑制了肿瘤生长。在 ER+ 乳腺癌患者来源的异种移植 (PDX) 模型中，VT02956 也抑制了肿瘤生长。该化合物的作用与肿瘤组织中 ESR1 表达降低和增殖减少（Ki67 染色）相关。体内疗效支持靶向 Hippo 通路（通过抑制 LATS）治疗 ER+ 乳腺癌的潜力，尤其适用于已产生内分泌治疗耐药性的肿瘤。该化合物在有效剂量下通常耐受性良好，不会引起明显的体重减轻或毒性反应。详细的药代动力学/药效学 (PK/PD) 研究数据尚未公开。VT02956 仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 酶活实验 |
VT02956 的标准非细胞检测方法是 LATS1/2 激酶活性检测，使用纯化的重组 LATS1 或 LATS2 酶，并通过荧光或发光读数进行检测。典型方案：将 LATS1 或 LATS2（10-50 ng/孔）与不同浓度的 VT02956（0.001-10 uM）在 50 uL 激酶缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl2、2 mM MnCl2、1 mM DTT、0.01% Tween-20、50 uM ATP）中于 25°C 下孵育 10 分钟。将肽底物（例如，含有HXRXXS基序且可被LATS磷酸化的生物素化YAP肽，例如Biotin-HKRPRATDSEPAP-Ahx-NH2，或通用激酶底物）加入至终浓度为1 uM。反应混合物在30℃下孵育30-60分钟。加入EDTA（终浓度20 mM）终止反应。检测时，可使用均相时间分辨荧光（HTRF）激酶分析（例如，Cisbio公司的KinEASE™试剂盒）：磷酸化产物通过铕（Eu3⁺）-隐蔽物标记的抗磷酸化底物抗体和链霉亲和素标记的XL665（受体）进行检测。在665 nm和620 nm处测量TR-FRET信号。比值 (665/620) 与激酶活性成正比。抑制率以 DMSO 对照组为基准计算。IC₅0 值通过将抑制数据拟合到四参数逻辑方程来确定。或者，可以使用 [γ-32P]ATP 进行放射性测定，然后点样到滤纸上进行闪烁计数，但 TR-FRET 方法更安全且通量更高。为了确认 LATS1/2 的结合，可以进行表面等离子共振 (SPR) 分析，但目前尚无公开的实验方案。
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| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： MCF-7 和 T47D 细胞 测试浓度： 2 μM 孵育时间： 4 天 实验结果： 通过靶向 LATS-YAP/TAZ-ERα 抑制 ER+ 乳腺癌细胞的增殖。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： HEK293A 细胞和 4T1 细胞 测试浓度： 2 μM 孵育时间： 0-30 分钟 实验结果： 分别以 0.16 μM 和 0.43 μM 的 IC50 值抑制 YAP/TAZ 磷酸化。 VT02956 的体外细胞活性检测采用 ER+ 乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D）和 ER- 细胞（MDA-MB-231）作为对照。细胞培养于添加 10% 活性炭处理的胎牛血清（去除雌激素）和 1% 青霉素-链霉素的 DMEM 培养基（不含酚红）中，置于 37℃、5% CO2 的培养箱中培养。增殖实验中，将细胞以 5 × 103 个/孔的密度接种于 96 孔板中，过夜培养使其贴壁，然后用浓度分别为 0、0.1、0.5、1、2、5、10 和 20 uM 的 VT02956 处理 72-96 小时。细胞活力采用 MTT 法（0.5 mg/mL，4 小时，570 nm 波长吸光度）或 CellTiter-Glo 发光细胞活力检测法进行测定。为进行 Hippo 通路活性的 Western blot 分析，将细胞用 VT02956（0.5-5 uM）处理 24-48 小时。然后用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解细胞，并通过 SDS-PAGE 分离裂解液。所用抗体包括：抗磷酸化 YAP (S127) 抗体和总 YAP 抗体（用于验证 LATS1/2 抑制可降低 p-YAP 水平并增加核内 YAP/TAZ 水平）、抗 ESR1 (ERα) 抗体、抗增殖标志物（Ki67、PCNA）以及抗 β-肌动蛋白或 GAPDH 抗体（作为上样对照）。通过免疫荧光法评估YAP/TAZ的亚细胞定位：细胞用4%多聚甲醛固定，用0.1% Triton X-100透化，用抗YAP/TAZ抗体和DAPI染色，并通过共聚焦显微镜成像。对于类器官研究，将患者来源的ER+乳腺癌类器官包埋于Matrigel基质胶中，在类器官培养基中培养，并用VT02956（0.5-10 uM）处理7天；使用明场显微镜和CellTiter-Glo 3D检测法测量类器官的大小和活力。 |
| 动物实验 |
VT02956 的体内动物研究采用雌性 BALB/c 裸鼠（6-8 周龄，18-22 g）进行异种移植模型研究，或采用雌性 NSG 小鼠进行 PDX 模型研究。对于 MCF-7 异种移植模型：将 5 × 10⁶ 个 MCF-7 细胞（悬浮于 0.1 mL PBS:Matrigel 混合液中，比例为 1:1）皮下注射至小鼠右侧腹部。为促进 ER+ 肿瘤的生长，在肿瘤细胞注射前 24 小时皮下植入雌激素缓释片（0.36 mg，60 天缓释）。当肿瘤体积达到约 100-150 mm³ 时（通常在植入后 2-3 周），将小鼠随机分组（每组 n = 6-10）。 VT02956 配制于合适的载体中（例如，5% DMSO + 5% Tween-80 + 90% 生理盐水或 10% Cremophor EL + 90% 生理盐水），并以 10、25 或 50 mg/kg 的剂量，每日一次或隔日一次，通过腹腔注射 (IP) 或灌胃给药，持续 14-21 天。对照组仅接受载体。每 2-3 天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积，并计算肿瘤生长抑制率 (TGI)。每 2-3 天监测体重。研究结束时（当对照组肿瘤达到约 1000 mm3 或治疗 21 天后），处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行以下分析：(1) Western blotting 以确认 p-YAP 减少、核 YAP 增加和 ESR1 下调； （2）免疫组织化学（Ki67用于增殖检测，TUNEL用于凋亡检测，以及YAP/TAZ定位检测）；（3）组织病理学（H&E染色）。对于PDX模型，将患者来源的肿瘤组织块（2-3 mm³）皮下植入NSG小鼠体内，给药和监测方法与PDX模型类似。可采集血液样本进行药代动力学分析。所有动物实验程序均须经机构动物护理和使用委员会批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
VT02956 的药代动力学 (PK) 特性在文献中报道较少。基于其在异种移植和 PDX 模型中的应用，该化合物可能具有中等的口服生物利用度，且半衰期足以支持每日一次给药。具体的 PK 参数（例如 Cmax、Tmax、t1/2、分布容积、血浆蛋白结合率和代谢途径）尚未公开。该化合物的制剂适用于体内腹腔注射或口服给药。作为一种点击化学试剂，它可能含有炔基或叠氮基，这可能会影响其体内稳定性或反应活性。由于该化合物尚未进入临床开发阶段，因此目前尚无人体 PK 数据。仅供研究使用；不适用于人体治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
VT02956尚未获准用于临床，也未进行临床开发。它是一种研究化合物，用于研究癌症（尤其是ER阳性乳腺癌）中的Hippo信号通路。其作用机制涉及强效抑制LATS1/2激酶（IC₅₀：LATS1 0.76 nM，LATS2 0.52 nM），从而激活YAP/TAZ并随后下调ESR1（雌激素受体α）的表达。通过抑制ESR1，VT02956可抑制ER阳性乳腺癌细胞和患者来源的肿瘤类器官的生长。该化合物是研究Hippo通路和ER信号通路之间功能相互作用以及寻找内分泌耐药性乳腺癌潜在治疗策略的重要工具。该化合物还可用作点击化学试剂，可与生物物理探针偶联，用于靶点结合研究。尚未注册任何临床试验。仅供研究使用；不得用于人体诊断或治疗。
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| 分子式 |
C22H23N5O
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|---|---|
| 分子量 |
373.45
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| CAS号 |
2999763-09-4
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6777 mL | 13.3887 mL | 26.7773 mL | |
| 5 mM | 0.5355 mL | 2.6777 mL | 5.3555 mL | |
| 10 mM | 0.2678 mL | 1.3389 mL | 2.6777 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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