| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PKA 2.8 nM (Ki)
PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide specifically targets the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase A (PKA). The peptide acts as a pseudosubstrate inhibitor: it binds to the substrate-binding site of the PKA catalytic subunit with high affinity, blocking the access of natural protein substrates. The Ki is 2.8 nM, indicating potent inhibition. The sequence is derived from the active site of PKI, a naturally occurring PKA inhibitor. The C-terminal amidation (instead of a free carboxyl group) enhances the peptide's stability against exopeptidase degradation. The compound exhibits high selectivity for PKA and does not significantly inhibit other protein kinases at concentrations used for PKA inhibition. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，该肽是一种强效的PKA抑制剂，在以纯化的PKA催化亚基和肽底物（例如Kemptide）进行的酶活性测定中，其Ki值为2.8 nM。在无细胞体系中，该肽可用于选择性阻断裂解液中的PKA活性或验证PKA特异性信号通路。体内实验表明，该肽能够显著逆转小鼠的低水平吗啡镇痛耐受性，证明其具有调节中枢神经系统PKA依赖性过程的能力。
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| 体内研究 (In Vivo) |
体内实验表明，PKA抑制剂片段(6-22)酰胺TFA能够显著逆转小鼠的低水平吗啡镇痛耐受性。这表明，当给药途径适当时，该肽能够到达中枢神经系统神经元内的靶点。该化合物在神经药理学研究中用于探究PKA在阿片类药物耐受机制中的作用。它可以通过脑室内(ICV)注射、鞘内(it)注射或全身给药（如果添加细胞穿透序列）。目前尚无其他体内应用方面的更多细节。
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| 酶活实验 |
采用标准的体外PKA激酶活性测定来确认抑制效果。反应混合物（25-50 uL）包含：40 mM Tris-HCl（pH 7.4）、10 mM MgCl2、0.1 mM ATP（含0.1 uCi/uL γ-32P-ATP）、50 uM Kemptide底物（Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-Gly）和0.5-1 ng纯化的PKA催化亚基。加入不同浓度（0.1-1000 nM）的PKA抑制剂片段(6-22)酰胺TFA。加入酶启动反应，于30℃孵育10-20分钟，然后加入0.5%磷酸终止反应。将反应混合物点样至P81磷酸纤维素滤纸片上。将滤纸用0.75%磷酸溶液洗涤3次（每次5分钟），用丙酮洗涤1次，风干后放入闪烁瓶中。计数放射性（肽链中掺入的32P）。使用Cheng-Prusoff方程，根据剂量反应曲线确定Ki值（2.8 nM）。对于非放射性形式，可以使用ADP-Glo™或发光激酶检测试剂盒，并按照制造商的说明进行操作。
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| 细胞实验 |
研究PKA抑制对吗啡耐受性影响的典型方案是体内给药，而非体外细胞实验。然而，也可以进行基于细胞的实验来评估神经元中的PKA活性：从E16-E18大鼠胚胎中分离出原代皮层或海马神经元，并培养7-14天。用PKA抑制剂片段(6-22)酰胺TFA（1-20 uM）处理神经元1-4小时，处理前或不处理吗啡（0.1-10 uM，处理24-48小时以诱导耐受性）。处理后，用含有磷酸酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液裂解细胞。使用PKA活性检测试剂盒（例如，非放射性ELISA试剂盒）按照制造商的说明书测定裂解液中的PKA活性。或者，可以使用磷酸化特异性抗体，通过蛋白质印迹法检测已知PKA底物（例如PKA底物（RRXS/T）或CREB（pS133））的磷酸化水平。细胞活力则通过MTT法进行评估。
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| 动物实验 |
标准的体内实验方案包括小鼠吗啡耐受性。实验采用雄性ICR或C57BL/6小鼠（25-30 g，每组n=8-12）。通过皮下注射吗啡（10-20 mg/kg），每日两次，持续5-7天，诱导吗啡耐受性。PKA抑制剂片段(6-22)酰胺TFA溶解于无菌生理盐水、5% DMSO/PBS或人工脑脊液(aCSF)中。该肽通过脑室内(ICV)途径给药：小鼠麻醉后，在颅骨上钻一个小孔（坐标：前囟后方0.5 mm，侧方1.0 mm，深度2.5 mm）。在每次吗啡注射前15分钟，使用微量注射器注射3-5微升肽溶液（例如，1-10微克/只小鼠）。或者，也可以在L5-L6节段进行鞘内注射（5微升，0.5-5微克/只小鼠）。在第1、3、5和7天，吗啡给药后30分钟，通过甩尾试验或热板试验评估镇痛效果。记录甩尾潜伏期（小鼠将尾巴甩离辐射热源的时间）或热板潜伏期（舔舐后爪或跳跃的时间）。设置截止时间（例如，10-15秒）以防止组织损伤。耐受性定义为镇痛反应随时间显著降低。 PKA 抑制剂组应该表现出这种耐受性的逆转（即，在第 7 天，镇痛效果保持或明显高于仅使用吗啡的对照组）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无该肽的详细药代动力学数据。该肽由17个氨基酸组成（TFA盐的分子量为1982.08 g/mol），由于易被蛋白酶快速降解，预计其在循环中的半衰期极短（<15分钟），且其穿过血脑屏障的能力也极低。因此，对于中枢神经系统应用，局部给药（脑室内或静脉注射）是达到脑内有效浓度的首选方法。C端酰胺化可能对羧肽酶具有一定的保护作用，但该肽仍易受内肽酶和氨肽酶的降解。TFA盐赋予其水溶性。目前尚无口服生物利用度方面的信息。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无PKA抑制剂片段(6-22)酰胺TFA的毒性数据。在动物研究中（脑室内注射或静脉注射，剂量与吗啡耐受逆转剂量相同），未报告明显的神经毒性症状（例如癫痫发作、运动障碍或死亡）。该肽来源于内源性蛋白质，通常认为其固有毒性较低。应遵循标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PKA抑制剂片段(6-22)酰胺TFA是一种研究级肽，尚未获准用于临床。它是一种强效的cAMP依赖性PKA抑制剂，Ki值为2.8 nM。C端酰胺修饰增强了肽的稳定性。该化合物可显著逆转小鼠的低水平吗啡镇痛耐受性。本产品仅供研究使用，不得用于人体治疗。请将冻干粉末密封保存于-20℃，并防潮。体内使用时，请将其溶解于无菌生理盐水、人工脑脊液或合适的溶剂中。
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| 分子式 |
C80H130N28O24.XC2HF3O2
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| 相关CAS号 |
PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide;121932-06-7
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~50 mg/mL
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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