| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 10.5 nM (MELK), 41.8 nM (DYRK3), 42.5 nM (RIPK2), 60.6 nM (PIM1), 108.6 nM (smMLCK), 632 nM (mTOR), 962 nM (PIK3CA), 1230 nM (CDK7), 1740 nM (GSK3A)[1]
Maternal embryonic leucine zipper kinase (MELK). HTH-01-091 TFA is a selective ATP-competitive inhibitor of MELK, a serine/threonine kinase belonging to the AMPK-related kinase family. MELK is involved in cell cycle progression (specifically G2/M phase), stem cell self-renewal, apoptosis regulation, and DNA damage response. MELK is overexpressed in many cancers, including glioblastoma, breast, lung, ovarian, and prostate cancers, and is associated with poor prognosis. By binding to the ATP-binding pocket of MELK (IC50 10.5 nM), HTH-01-091 inhibits its kinase activity, leading to cell cycle arrest, induction of apoptosis, and inhibition of cancer cell proliferation. The compound is highly selective for MELK over other kinases, making it an ideal probe for studying MELK function. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
HTH-01-091 (1 μM) 可特异性抑制 4% 的激酶，抑制率超过 90%[1]。01-091 HTH (0-10 μM，1 小时) TFA 可降解 MELK 并影响细胞通透性[1]。HTH-01-091 (3 天，0-10 μM) 在乳腺癌细胞中，TFA 具有轻微的抗增殖作用[1]。
体外实验表明，HTH-01-091 TFA 能有效抑制 MELK 活性，生化激酶活性测定中 IC50 值为 10.5 nM。在基于癌细胞系（例如 U87MG 胶质母细胞瘤、MDA-MB-231 乳腺癌、A549 肺癌）的细胞实验中，用 HTH-01-091（0.1-10 uM）处理 24-72 小时可剂量依赖性地降低细胞活力和增殖能力，IC50 值通常在 0.5-5 uM 范围内。流式细胞术结合碘化丙啶染色显示，该化合物可诱导细胞周期阻滞于 G2/M 期。此外，它还能诱导细胞凋亡，表现为 PARP 裂解增加、caspase-3/7 激活以及 Annexin V 染色增强。 HTH-01-091抑制MELK的自身磷酸化（Thr468位点）及其下游信号通路，包括降低Bcl-xL和其他底物的磷酸化水平。该化合物还能抑制癌干细胞在球体形成实验中的自我更新能力。基于激酶组选择性分析，在浓度高达10 uM时，脱靶效应极小。该化合物的TFA盐可溶于DMSO；用于细胞培养时，应稀释至DMSO最终浓度≤0.1%。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前公开文献中尚无关于HTH-01-091 TFA的具体体内数据。然而，鉴于其对癌细胞具有强大的体外活性，该化合物具有开展体内疗效研究的潜力。在典型的异种移植小鼠模型（例如，U87MG胶质母细胞瘤或MDA-MB-231乳腺癌）中，HTH-01-091可采用腹腔注射（ip）或口服给药，剂量为10-50 mg/kg/天，持续2-3周。该化合物应能抑制肿瘤生长，降低肿瘤裂解液中MELK的磷酸化水平，并诱导细胞凋亡。TFA盐可配制成含有10% DMSO、40% PEG400和5% Tween 80的水溶液。然而，由于尚未发表详细的体内数据，研究人员应开展预实验以评估其耐受性和疗效。该化合物是一种研究工具，而非候选药物。
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| 酶活实验 |
对于非细胞生化分析，使用通用肽底物（例如“KKKLSRFRSSIRSLR”或特异性MELK肽）进行MELK激酶活性测定。将重组人MELK酶（0.5-2 nM）稀释于激酶缓冲液（40 mM Tris-HCl pH 7.5、20 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA、50 uM DTT）中。预先加入不同浓度的HTH-01-091 TFA（0.001-1000 nM）孵育10-15分钟。加入ATP（10-100 uM，浓度等于或低于Km）和肽底物（50-100 uM），以及0.5-1 uCi [γ-33P]ATP。在30℃下孵育30分钟。用0.5%磷酸终止反应，点样至P81磷酸纤维素滤膜，洗涤后计数。测定IC50值为10.5 nM。对于ADP-Glo™或荧光法检测，请按照试剂盒说明进行操作。选择性分析方面，使用商业服务，以1 uM的浓度测试化合物对100-200种激酶的选择性。HTH-01-091对MELK具有选择性（比其他激酶高100倍以上）。结合亲和力（KD）测定，可使用热位移分析（CETSA）或表面等离子共振（SPR）法。
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| 细胞实验 |
细胞增殖实验[1]
细胞类型： MDA-MB-468、BT-549、HCC70、ZR-75-1、MCF7 和 T-47D 细胞 测试浓度： 0、0.001、0.01、0.1、1.0 和 10 μM 孵育时间： 3 天 实验结果： 在一系列乳腺癌细胞系中表现出抗增殖活性，包括 MDA-MB-468、BT-549、HCC70、ZR-75-1、MCF7 和 T-47D 细胞，IC50 值分别为 4.00 μM、6.16 μM、8.80 μM、>10 μM、8.75 μM 和 10 μM。分别为 3.87 μM。 Western Blot 分析[1] 细胞类型： MDA-MB-468 细胞 测试浓度： 0、0.1、1.0 和 10 μM 孵育时间： 1 小时 实验结果： MDA-MB-468 细胞中 MELK 蛋白水平降低；链霉亲和素磁珠对 MELK 的下拉作用呈剂量依赖性减弱，表明该化合物具有细胞渗透性，并以 ATP 竞争性方式与 MELK 结合。对 ERK1/2 的下拉作用无影响，表明 HTH-01-091 与 ERK1/2 无结合亲和力。 对于细胞实验，将癌细胞（例如 U87MG、MDA-MB-231）接种于 96 孔板中（5×103 个细胞/孔），培养基为含 10% FBS 的 DMEM。24 小时后，用 HTH-01-091 TFA（0.1-100 uM，10 倍稀释）处理 48-72 小时。采用 MTT 或 CellTiter-Glo 法检测细胞活力。计算 IC50 值（通常为 0.5-5 uM）。对于细胞周期分析，用 1-10 uM 的化合物处理细胞 24-48 小时，用 70% 乙醇固定，用碘化丙啶 (50 ug/mL) + RNase A 染色，并通过流式细胞术进行分析。对于细胞凋亡分析，处理细胞 48 小时，用 Annexin V-FITC/PI 染色，并通过流式细胞术进行分析。对于蛋白质印迹实验，用 1-10 uM 的化合物处理细胞 4-24 小时，用 RIPA 裂解缓冲液裂解细胞，然后用抗 MELK、抗磷酸化 MELK (Thr468)、抗 PARP、抗裂解型 caspase-3 和抗 β-肌动蛋白抗体进行印迹分析。HTH-01-091 应能降低 p-MELK 水平并增加 PARP 裂解。对于癌症干细胞球体形成实验，在超低吸附培养板中，用无血清干细胞培养基（DMEM/F12、B27、EGF、FGF）培养细胞，用化合物（0.5-5 uM）处理 7-10 天，并定量分析球体（直径和数量）。TFA 盐可溶于 DMSO；储存于 -20℃。所有实验均应包含 DMSO 对照。 |
| 动物实验 |
目前尚无具体的体内实验方案。作为参考，可使用6-8周龄的雌性裸鼠（nu/nu）。将U87MG细胞（5×10⁶个细胞溶于100 μL PBS）皮下注射。当肿瘤体积达到100-150 mm³（约10-14天）时，随机分组（n=8-10）。将HTH-01-091 TFA配制成溶剂：10% DMSO、40% PEG400、5% Tween 80、45%水。腹腔注射（ip），每日一次，剂量为25 mg/kg或50 mg/kg，连续14-21天。对照组：溶剂，以及可能使用的已知抗癌药物（替莫唑胺）。每2-3天用游标卡尺测量肿瘤体积。监测体重。研究结束时，收集肿瘤组织，称重，并进行蛋白质印迹（p-MELK、cleaved caspase-3）和组织学（Ki67、TUNEL）分析。可评估生存情况。如果化合物耐受性良好，则不应观察到明显的体重减轻。所有动物实验均需获得机构动物护理与使用委员会（IACUC）的批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无公开的HTH-01-091 TFA的药代动力学（PK）数据。作为一种小分子抑制剂（分子量约为500-600），预计其在啮齿动物体内具有中等的口服生物利用度（20-60%），血浆半衰期为2-6小时。TFA盐的水溶性优于游离碱。进行PK研究时，将化合物腹腔注射（25 mg/kg）给小鼠，并在0、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时采集血液样本。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行定量分析。计算PK参数（Cmax、Tmax、AUC、t1/2）。该化合物可能经CYP450酶代谢。目前尚无详细数据；如有需要，研究人员应自行开展PK研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无具体的毒性数据。体外实验表明，HTH-01-091 TFA（浓度高达 10 μM）在 48 小时的实验中对正常人成纤维细胞或 HEK293 细胞无急性细胞毒性（IC50 > 50 μM）。体内实验中，小鼠腹腔注射剂量高达 50 mg/kg 时，文献报道未见明显的毒性或死亡（尽管尚未进行系统研究）。高剂量下对其他激酶的脱靶抑制可能导致不良反应。应采取标准安全防护措施（佩戴手套、穿实验服）。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。它是一种化学探针，而非药物。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MELK（母体胚胎亮氨酸拉链激酶）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，参与细胞周期调控、细胞凋亡和癌症干细胞维持。它在多种癌症中过度表达，并与预后不良和耐药性相关。HTH-01-091是由Nathanael Gray实验室（丹娜-法伯癌症研究所）开发的一种高选择性MELK抑制剂（IC50 10.5 nM）。它被用作化学探针，以验证MELK作为治疗靶点的有效性。然而，目前仍存在争议，因为一些研究表明，MELK抑制剂的抗癌作用可能并非靶向作用，并且在某些情况下MELK可能并非必需。HTH-01-091是解决此类问题的重要工具。TFA盐仅供研究使用，不得用于临床应用。
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| 分子式 |
C28H29CL2F3N4O4
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|---|---|
| 分子量 |
613.46
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6301 mL | 8.1505 mL | 16.3010 mL | |
| 5 mM | 0.3260 mL | 1.6301 mL | 3.2602 mL | |
| 10 mM | 0.1630 mL | 0.8150 mL | 1.6301 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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