| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
UCHL1 50 nM (IC50)
UCHL1 (ubiquitin C-terminal hydrolase L1). GK13S is a selective ligand and inhibitor of the deubiquitinase UCHL1 (also known as PGP9.5). UCHL1 is a member of the ubiquitin-specific protease family responsible for hydrolyzing ubiquitin from small adducts and recycling free ubiquitin monomers. GK13S binds to UCHL1 and inhibits its enzymatic activity, leading to reduced hydrolysis of ubiquitin chains, accumulation of polyubiquitinated proteins, and depletion of free monoubiquitin. This results in altered ubiquitin homeostasis, disruption of protein degradation pathways, and modulation of cell survival, proliferation, and differentiation. GK13S is a cell-permeable inhibitor that can be used to investigate the role of UCHL1 in cancer, neurodegenerative disorders (Parkinson's disease, Alzheimer's disease), and other pathologies. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GK13S（0-1 μM，1 小时）对重组 UCHL1 的抑制 IC50 为 50 nM[1]。GK13S（1-10 μM，24 小时）可抑制 HEK293 细胞内的 UCHL1[1]。GK13S（5 μM，72 小时）对 HEK293 细胞的生长无影响[1]。GK13S（5 μM，48 小时）可降低 U-87 MG 细胞的泛素水平[1]。
体外实验表明，GK13S 能有效抑制重组 UCHL1 的活性，IC50 值为 50 nM。该化合物在 1-10 uM 的浓度下即可抑制 HEK293 细胞中的 UCHL1 活性。GK13S 处理可降低人胶质母细胞瘤 U87-MG 细胞中的单泛素水平，证实了其靶向结合并抑制了通常产生游离泛素的去泛素化酶活性。低浓度下，该化合物对其他去泛素化酶的抑制作用不显著，表明其具有选择性。GK13S 含有一个炔基，可用于基于点击化学的标记，从而能够可视化探针结合情况，并通过下拉实验和质谱分析鉴定潜在的脱靶蛋白。GK13S 还可用于研究 UCHL1 抑制对癌细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡等功能的影响。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无GK13S的具体体内数据。作为一种化学基因组学探针，GK13S主要用于基于细胞的实验，以研究UCHL1的功能。然而，基于其细胞渗透性和靶向特异性，理论上GK13S可用于动物模型，以评估UCHL1在疾病进展中的作用，例如在胶质母细胞瘤异种移植小鼠模型中进行癌症研究，或在神经退行性疾病模型中进行研究。典型的实验方案包括腹腔注射或静脉注射，剂量为10-50 mg/kg。但是，GK13S并非获批药物，仅供研究使用。体内研究需要使用非活性对照探针GK16S验证靶点结合情况并评估潜在的脱靶效应。
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| 酶活实验 |
对于直接结合实验，GK13S 可用于竞争性结合实验。将重组 UCHL1 蛋白 (10-50 nM) 与荧光标记的泛素-AMC 底物 (0.5 uM) 在测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、0.5 mM EDTA、5 mM DTT、0.05% Tween-20）中，加入不同浓度的 GK13S (0.1-1000 nM)，于 37℃ 孵育 30-60 分钟。通过荧光检测（激发波长 380 nm，发射波长 460 nm）监测游离 AMC 的释放。使用四参数逻辑模型，根据抑制曲线计算 IC50 值。或者，也可以使用表面等离子体共振（SPR）：将UCHL1固定在传感器芯片上，然后以递增的浓度（0.1-500 nM）通入GK13S溶液，以测量结合动力学（KD）。GK13S的炔基不会干扰其与UCHL1的结合。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： HEK293 细胞 测试浓度： 1、5、10 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 在 1 μM 时几乎完全抑制 UCHL1。 对于细胞实验，将HEK293或U87-MG胶质母细胞瘤细胞接种于6孔板（5 × 10⁵个细胞/孔）或96孔板（1 × 10⁴个细胞/孔）中，并过夜培养。加入浓度为0.1-10 uM的GK13S（最终DMSO浓度≤0.1%），并孵育24-72小时。为了评估UCHL1抑制情况，用0.5% NP-40或RIPA裂解缓冲液裂解细胞，并将裂解液（10-20 ug蛋白）与0.5 uM泛素-AMC底物在37℃的检测缓冲液中孵育。测量30-60分钟的荧光强度以确定残余的UCHL1活性。单泛素检测方面，使用抗泛素抗体（例如FK2克隆）对细胞裂解液进行Western blotting分析，该抗体可检测单泛素。细胞活力检测方面，在处理48-72小时后进行MTT或CellTiter-Glo检测。点击化学标记方面，将细胞用GK13S处理2-4小时后裂解，并在Cu(I)催化下，使细胞裂解液与TAMRA-叠氮化物或生物素-叠氮化物反应，通过凝胶内荧光或下拉实验可视化探针-蛋白加合物。 |
| 动物实验 |
对于体内研究，目前尚无针对 GK13S 的典型方案。对于通用型 UCHL1 抑制剂，将成年雄性 C57BL/6 小鼠（6-8 周龄）腹腔注射 GK13S，剂量为 10-30 mg/kg/天，持续 5-14 天。化合物配制于含 10% DMSO、40% PEG400 和 5% Tween 80 的水溶液中。采集血液进行药代动力学分析，并收集组织（脑、肝、肾、肿瘤）用于 UCHL1 活性测定（采用泛素-AMC 法）和单泛素蛋白印迹法。肿瘤异种移植模型：将 U87-MG 细胞植入裸鼠体内，当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，给予 GK13S 治疗。每 2-3 天监测一次肿瘤体积和体重。然而，GK13S 主要是一种用于体外研究的研究工具，其体内应用尚未得到广泛报道。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无GK13S的具体药代动力学数据。作为一种小分子UCHL1抑制剂（分子量390.44 g/mol），GK13S预计具有细胞渗透性，并可能具有中等的口服生物利用度。该化合物含有一个炔基，可能发生代谢，但尚未发表详细的药代动力学研究。对于典型的小分子探针，腹腔注射后小鼠的血浆半衰期为1-4小时。GK13S不适用于治疗用途，其使用仅限于研究。该化合物可溶于DMSO，DMSO通常用作体外实验的储备液。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于GK13S的具体毒性数据。作为UCHL1（一种对神经元存活和癌症进展至关重要的去泛素化酶）的抑制剂，长期抑制UCHL1可能产生功能性后果。然而，GK13S通常在体外使用浓度不超过10 μM，且尚未有报道显示在此浓度下，GK13S在细胞活力测定中引起急性细胞毒性。在动物体内，UCHL1抑制的潜在毒性尚未得到充分表征。目前尚未报道GK13S具有遗传毒性、器官毒性或致癌性。该化合物仅供研究使用，不得用于人体或治疗用途。使用时应遵循标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
UCHL1 是一种去泛素化酶，在神经元（占脑总蛋白的 1-2%）和某些癌症（例如胶质母细胞瘤、肺癌、前列腺癌）中高表达。UCHL1 的功能是水解小分子加合物中的泛素，并维持游离泛素池，这对于泛素依赖性蛋白降解至关重要。UCHL1 的失调与帕金森病（UCHL1 突变导致活性降低）和癌症（UCHL1 通常过表达并促进细胞存活）有关。GK13S 是一种首创的选择性小分子 UCHL1 抑制剂，通过化学基因组学方法发现，其 IC50 值为 50 nM。该化合物含有炔基，可用于点击化学反应，进行靶点结合研究。为了进行化学基因组学验证，使用非活性对照探针GK16S（该探针不抑制UCHL1，但会结合非靶标蛋白）与GK13S一起，以确认UCHL1依赖性表型。GK13S仅供研究使用。
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| 分子式 |
C21H22N6O2
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|---|---|
| 分子量 |
390.44
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5612 mL | 12.8061 mL | 25.6121 mL | |
| 5 mM | 0.5122 mL | 2.5612 mL | 5.1224 mL | |
| 10 mM | 0.2561 mL | 1.2806 mL | 2.5612 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
LC-U7-44
USP1-IN-13
USP7 activator 1
USP25/28-IN-2
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