Fmoc-Val-Cit-PAB-DuocarmycinTM

目录号: V77005 纯度: ≥98%
Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin TM 是一种ADC抗体连接物缀合物,由抗肿瘤抗生素Duocarmycin TM 和Fmoc-Val-Cit-PAB组成。
Fmoc-Val-Cit-PAB-DuocarmycinTM 产品类别: Drug-Linker Conjugates for ADC
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
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产品描述
Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin TM 是一种用于 ADC 的抗体-连接子偶联物,由抗肿瘤抗生素 Duocarmycin TM 和 Fmoc-Val-Cit-PAB 组成。
Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™ 是一种用于抗体药物偶联物 (ADC) 的药物-连接子偶联物。它由强效抗肿瘤抗生素 Duocarmycin™ 通过蛋白酶可切割的肽连接子 Fmoc-Val-Cit-PAB 连接而成。Duocarmycin 是一种 DNA 烷基化剂,可与 DNA 小沟结合,并在 N3 位烷基化腺嘌呤。该偶联物能够将细胞毒性有效载荷选择性地递送至癌细胞。
生物活性&实验参考方法
靶点
Duocarmycins
The Val-Cit (valine-citrulline) dipeptide linker is a substrate for cathepsin B, a lysosomal protease that is highly expressed in many cancer cells. Upon internalization of the ADC into cancer cells via receptor-mediated endocytosis, the linker is cleaved by cathepsin B in the lysosome, releasing the active Duocarmycin payload. Duocarmycin targets DNA in the nucleus, alkylating adenine residues and causing DNA damage, cell cycle arrest, and apoptosis.
体外研究 (In Vitro)
体外实验表明,有效载荷组分Duocarmycin™是一种高效的DNA烷基化剂,对多种癌细胞系的IC50值在皮摩尔至低纳摩尔范围内。Fmoc-Val-Cit-PAB连接子在血浆中稳定,但在酸性溶酶体环境中可被组织蛋白酶B高效切割。完整的药物-连接子偶联物在连接子被切割前处于非活性状态,从而确保靶向递送。在抗体药物偶联物(ADC)形式下,该偶联物仅在表达靶抗原且含有活性组织蛋白酶B的细胞中显示出强效的细胞毒性。
体内研究 (In Vivo)
在体内,基于Duocarmycin并采用Val-Cit-PAB连接子的抗体药物偶联物(ADC)在多种癌症的异种移植小鼠模型中展现出强大的抗肿瘤疗效。Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联物与肿瘤靶向抗体连接后,表现出选择性肿瘤蓄积、与游离有效载荷相比降低的全身毒性以及剂量依赖性的肿瘤生长抑制或消退。这种连接子-有效载荷组合已应用于临床前ADC开发研究。
酶活实验
无细胞酶活性测定:将纯化的组织蛋白酶B(用DTT活化)与Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联物(1-100 uM)在含有1 mM EDTA和5 mM DTT的醋酸盐缓冲液(pH 5.0)中于37℃孵育1-24小时。终止反应,提取释放的Duocarmycin™,并通过LC-MS或HPLC分析以监测连接子的裂解。通过定量Duocarmycin峰面积随时间的变化来测定有效载荷的释放速率。稳定性研究中,将偶联物在人血浆(pH 7.4)中孵育长达48小时,并测定完整偶联物和释放的有效载荷。
细胞实验
在合适的培养基中培养抗原阳性癌细胞系(例如,针对HER2靶向抗体偶联药物的HER2阳性细胞,或选择其他通用靶点)。进行细胞毒性试验时,用浓度递增的抗体-Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin ADC(0.1 pM-100 nM)或游离的Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联物(作为非靶向对照)处理细胞72-120小时。使用CellTiter-Glo(ATP定量)或MTT法评估细胞活力。进行内化和加工研究时,用荧光标记的ADC(例如,Alexa Fluor 488标记的抗体)处理细胞,并通过共聚焦显微镜观察。与溶酶体示踪剂共染色以确认溶酶体定位。用ADC(10-100 nM,4-24小时)处理细胞,洗涤、固定、透化,并用抗组织蛋白酶B和抗Duocarmycin抗体染色,以监测连接子裂解和有效载荷释放。对于DNA损伤研究,用ADC处理细胞4-24小时,然后通过免疫荧光染色检测γ-H2AX(DNA双链断裂的标志物),并定量每个细胞核内的γ-H2AX灶。对于细胞凋亡检测,用ADC处理细胞48-72小时,并用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色进行流式细胞术分析。
动物实验
对于体内抗肿瘤疗效研究,使用免疫缺陷小鼠(例如,NSG小鼠、裸鼠)的皮下异种移植模型。接种抗原阳性癌细胞(例如,每只小鼠5 × 10^6个细胞)。当肿瘤体积达到约100-150 mm³时,将小鼠随机分组(每组n=8-10)。每周一次,静脉注射抗体偶联物(ADC,即与Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联的抗体),剂量为1-10 mg/kg(基于抗体含量),共2-4次。对照组包括载体、同型对照ADC和游离Duocarmycin™(以最大耐受剂量给药)。每两周用游标卡尺测量肿瘤体积,并计算肿瘤生长抑制率(TGI%)。监测体重变化以评估毒性反应。研究结束时(通常当对照组肿瘤体积达到 1500-2000 mm³ 时),收集肿瘤进行离体分析:进行增殖(Ki-67)、凋亡(cleaved caspase-3)和 DNA 损伤(γ-H2AX)的免疫组化分析。采集血液进行药代动力学分析和血清细胞因子评估。对于生存研究,持续给药和监测直至达到人道终点,并绘制 Kaplan-Meier 生存曲线。对于生物分布研究,使用标记有近红外染料(例如 IRDye 800CW)的抗体药物偶联物 (ADC)。将 ADC 注射到小鼠体内,并在注射后多个时间点(1、24、48、72、96 和 120 小时)使用 IVIS 成像系统进行成像。在最后一个时间点,处死小鼠,取出主要器官和肿瘤,进行离体荧光测量,并计算每克组织中注射剂量的百分比 (%ID/g)。
药代性质 (ADME/PK)
Fmoc-Val-Cit-PAB 连接子的分子量约为 553.6 g/mol (Fmoc-Val-Cit-PAB-OH)。Duocarmycin™ 是一种高效的 DNA 烷基化剂,分子量约为 500-600 g/mol。该缀合物 (Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™) 的分子量约为 1050.59 g/mol。Val-Cit 二肽连接子在循环中稳定(血浆半衰期 >24 小时),但在溶酶体 pH 值 (5.0) 下,在组织蛋白酶 B 的作用下可高效裂解(t1/2 < 1 小时)。该连接子在循环中的稳定性可最大限度地减少有效载荷的过早释放和全身毒性。药物-连接子缀合物通常溶于 DMSO。储存:-20℃,避光防潮,惰性气体保护。溶液可在-80℃下长期保存。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Duocarmycin™ 是一种高效的 DNA 烷基化剂,若全身释放则具有显著毒性。在抗体偶联药物 (ADC) 形式下,由于靶向递送,其毒性得以降低。游离有效载荷的毒性包括骨髓抑制、胃肠道毒性和肝毒性,这些毒性在超治疗剂量下才会出现。对于单独的连接子-有效载荷偶联物(不含抗体靶向),由于非特异性摄取,预计会产生显著毒性。动物实验必须遵循适当的安全规程和废物处理方法。该化合物仅供研究使用,不得用于人体。操作时请使用适当的个人防护装备(手套、实验服、护目镜),并在通风橱内进行。Duocarmycin 是强效基因毒素;请参考机构关于处理高活性化合物的指南。所有被 Duocarmycin 污染的材料均应作为危险化学废物处理。如皮肤接触,请用肥皂和水彻底清洗;如眼睛接触,请用水冲洗 15 分钟并就医。
其他信息
Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™ 是一种药物-连接子偶联物,专为构建用于靶向癌症治疗研究的抗体药物偶联物 (ADC) 而设计。Duocarmycin 家族天然产物来源于链霉菌属。Duocarmycin 通过与 DNA 小沟结合并在 N3 位烷基化腺嘌呤发挥细胞毒性作用,最终导致细胞死亡。Fmoc-Val-Cit-PAB 连接子是一种可被组织蛋白酶切割的连接子,已广泛应用于 ADC 的构建。Fmoc(9-芴甲氧羰基)基团在合成过程中保护 N 端。Val-Cit 二肽在溶酶体中被组织蛋白酶 B 识别并切割。PAB(对氨基苄醇)间隔基在切割后发生 1,6-消除反应,释放出游离的有效载荷。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C58H60CLN7O10
分子量
1050.59
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~100 mg/mL (~95.18 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9518 mL 4.7592 mL 9.5185 mL
5 mM 0.1904 mL 0.9518 mL 1.9037 mL
10 mM 0.0952 mL 0.4759 mL 0.9518 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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