| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Duocarmycins
The Val-Cit (valine-citrulline) dipeptide linker is a substrate for cathepsin B, a lysosomal protease that is highly expressed in many cancer cells. Upon internalization of the ADC into cancer cells via receptor-mediated endocytosis, the linker is cleaved by cathepsin B in the lysosome, releasing the active Duocarmycin payload. Duocarmycin targets DNA in the nucleus, alkylating adenine residues and causing DNA damage, cell cycle arrest, and apoptosis. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明,有效载荷组分Duocarmycin™是一种高效的DNA烷基化剂,对多种癌细胞系的IC50值在皮摩尔至低纳摩尔范围内。Fmoc-Val-Cit-PAB连接子在血浆中稳定,但在酸性溶酶体环境中可被组织蛋白酶B高效切割。完整的药物-连接子偶联物在连接子被切割前处于非活性状态,从而确保靶向递送。在抗体药物偶联物(ADC)形式下,该偶联物仅在表达靶抗原且含有活性组织蛋白酶B的细胞中显示出强效的细胞毒性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内,基于Duocarmycin并采用Val-Cit-PAB连接子的抗体药物偶联物(ADC)在多种癌症的异种移植小鼠模型中展现出强大的抗肿瘤疗效。Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联物与肿瘤靶向抗体连接后,表现出选择性肿瘤蓄积、与游离有效载荷相比降低的全身毒性以及剂量依赖性的肿瘤生长抑制或消退。这种连接子-有效载荷组合已应用于临床前ADC开发研究。
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| 酶活实验 |
无细胞酶活性测定:将纯化的组织蛋白酶B(用DTT活化)与Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联物(1-100 uM)在含有1 mM EDTA和5 mM DTT的醋酸盐缓冲液(pH 5.0)中于37℃孵育1-24小时。终止反应,提取释放的Duocarmycin™,并通过LC-MS或HPLC分析以监测连接子的裂解。通过定量Duocarmycin峰面积随时间的变化来测定有效载荷的释放速率。稳定性研究中,将偶联物在人血浆(pH 7.4)中孵育长达48小时,并测定完整偶联物和释放的有效载荷。
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| 细胞实验 |
在合适的培养基中培养抗原阳性癌细胞系(例如,针对HER2靶向抗体偶联药物的HER2阳性细胞,或选择其他通用靶点)。进行细胞毒性试验时,用浓度递增的抗体-Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin ADC(0.1 pM-100 nM)或游离的Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联物(作为非靶向对照)处理细胞72-120小时。使用CellTiter-Glo(ATP定量)或MTT法评估细胞活力。进行内化和加工研究时,用荧光标记的ADC(例如,Alexa Fluor 488标记的抗体)处理细胞,并通过共聚焦显微镜观察。与溶酶体示踪剂共染色以确认溶酶体定位。用ADC(10-100 nM,4-24小时)处理细胞,洗涤、固定、透化,并用抗组织蛋白酶B和抗Duocarmycin抗体染色,以监测连接子裂解和有效载荷释放。对于DNA损伤研究,用ADC处理细胞4-24小时,然后通过免疫荧光染色检测γ-H2AX(DNA双链断裂的标志物),并定量每个细胞核内的γ-H2AX灶。对于细胞凋亡检测,用ADC处理细胞48-72小时,并用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色进行流式细胞术分析。
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| 动物实验 |
对于体内抗肿瘤疗效研究,使用免疫缺陷小鼠(例如,NSG小鼠、裸鼠)的皮下异种移植模型。接种抗原阳性癌细胞(例如,每只小鼠5 × 10^6个细胞)。当肿瘤体积达到约100-150 mm³时,将小鼠随机分组(每组n=8-10)。每周一次,静脉注射抗体偶联物(ADC,即与Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™偶联的抗体),剂量为1-10 mg/kg(基于抗体含量),共2-4次。对照组包括载体、同型对照ADC和游离Duocarmycin™(以最大耐受剂量给药)。每两周用游标卡尺测量肿瘤体积,并计算肿瘤生长抑制率(TGI%)。监测体重变化以评估毒性反应。研究结束时(通常当对照组肿瘤体积达到 1500-2000 mm³ 时),收集肿瘤进行离体分析:进行增殖(Ki-67)、凋亡(cleaved caspase-3)和 DNA 损伤(γ-H2AX)的免疫组化分析。采集血液进行药代动力学分析和血清细胞因子评估。对于生存研究,持续给药和监测直至达到人道终点,并绘制 Kaplan-Meier 生存曲线。对于生物分布研究,使用标记有近红外染料(例如 IRDye 800CW)的抗体药物偶联物 (ADC)。将 ADC 注射到小鼠体内,并在注射后多个时间点(1、24、48、72、96 和 120 小时)使用 IVIS 成像系统进行成像。在最后一个时间点,处死小鼠,取出主要器官和肿瘤,进行离体荧光测量,并计算每克组织中注射剂量的百分比 (%ID/g)。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Fmoc-Val-Cit-PAB 连接子的分子量约为 553.6 g/mol (Fmoc-Val-Cit-PAB-OH)。Duocarmycin™ 是一种高效的 DNA 烷基化剂,分子量约为 500-600 g/mol。该缀合物 (Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™) 的分子量约为 1050.59 g/mol。Val-Cit 二肽连接子在循环中稳定(血浆半衰期 >24 小时),但在溶酶体 pH 值 (5.0) 下,在组织蛋白酶 B 的作用下可高效裂解(t1/2 < 1 小时)。该连接子在循环中的稳定性可最大限度地减少有效载荷的过早释放和全身毒性。药物-连接子缀合物通常溶于 DMSO。储存:-20℃,避光防潮,惰性气体保护。溶液可在-80℃下长期保存。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Duocarmycin™ 是一种高效的 DNA 烷基化剂,若全身释放则具有显著毒性。在抗体偶联药物 (ADC) 形式下,由于靶向递送,其毒性得以降低。游离有效载荷的毒性包括骨髓抑制、胃肠道毒性和肝毒性,这些毒性在超治疗剂量下才会出现。对于单独的连接子-有效载荷偶联物(不含抗体靶向),由于非特异性摄取,预计会产生显著毒性。动物实验必须遵循适当的安全规程和废物处理方法。该化合物仅供研究使用,不得用于人体。操作时请使用适当的个人防护装备(手套、实验服、护目镜),并在通风橱内进行。Duocarmycin 是强效基因毒素;请参考机构关于处理高活性化合物的指南。所有被 Duocarmycin 污染的材料均应作为危险化学废物处理。如皮肤接触,请用肥皂和水彻底清洗;如眼睛接触,请用水冲洗 15 分钟并就医。
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| 其他信息 |
Fmoc-Val-Cit-PAB-Duocarmycin™ 是一种药物-连接子偶联物,专为构建用于靶向癌症治疗研究的抗体药物偶联物 (ADC) 而设计。Duocarmycin 家族天然产物来源于链霉菌属。Duocarmycin 通过与 DNA 小沟结合并在 N3 位烷基化腺嘌呤发挥细胞毒性作用,最终导致细胞死亡。Fmoc-Val-Cit-PAB 连接子是一种可被组织蛋白酶切割的连接子,已广泛应用于 ADC 的构建。Fmoc(9-芴甲氧羰基)基团在合成过程中保护 N 端。Val-Cit 二肽在溶酶体中被组织蛋白酶 B 识别并切割。PAB(对氨基苄醇)间隔基在切割后发生 1,6-消除反应,释放出游离的有效载荷。
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| 分子式 |
C58H60CLN7O10
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| 分子量 |
1050.59
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~95.18 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9518 mL | 4.7592 mL | 9.5185 mL | |
| 5 mM | 0.1904 mL | 0.9518 mL | 1.9037 mL | |
| 10 mM | 0.0952 mL | 0.4759 mL | 0.9518 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。