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| 靶点 |
As a fluorescent probe rather than a therapeutic agent, FITC-Ureidopropionic acid does not exert biological activity by binding to specific pharmacological targets. The probe is designed to utilize ureidopropionic acid as a carrier molecule. Ureidopropionic acid is an endogenous metabolite involved in pyrimidine and amino acid metabolism, serving as an intermediate in the uracil degradation pathway where it is converted from dihydrouracil by dihydropyrimidinase and subsequently to β-alanine by β-ureidopropionase . Thus, the probe can theoretically be used to study the biodistribution and metabolic fate of this metabolite.
FITC-Ureidopropionic acid does not bind to a specific biological receptor. It functions as a fluorescent probe for labeling biomolecules or cells. Ureidopropionic acid is a naturally occurring metabolite in the body, involved in amino acid and pyrimidine metabolism. The FITC label provides bright green fluorescence upon excitation, enabling detection. The probe can be used to track ureidopropionic acid-associated processes or to label proteins via the carboxylic acid group. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
FITC-脲基丙酸并非设计用于发挥直接药理活性(例如,酶抑制或受体激活)。其主要的体外应用是作为生物分子和细胞的荧光标记试剂。FITC部分在490 nm激发、520 nm检测时可发出明亮的绿色荧光,且具有良好的光稳定性。探针的活性由其荧光信号强度决定,可通过荧光分光光度法、流式细胞术或荧光显微镜进行定量分析。该探针的小分子尺寸有利于细胞摄取,从而可用于细胞内追踪应用。
FITC-脲基丙酸尚未被研究用于独立的生物活性研究,例如酶抑制或受体结合。作为一种荧光探针,其主要用途是成像和流式细胞术。它可用于标记生物分子或细胞,使研究人员能够观察脲基丙酸的摄取、定位和代谢,或追踪脲基丙酸偶联分子。其荧光信号明亮且光稳定性好。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
FITC-脲基丙酸不具有传统的体内药效学活性,因为它并非治疗性化合物。然而,它是一种用于体内追踪研究的宝贵工具。荧光标记能够可视化探针在活体生物体内的分布、积累以及潜在的代谢转化。理论上,脲基丙酸成分可以将探针引导至参与嘧啶代谢的组织或细胞。由于该探针仅用于研究用途,因此目前尚无具体的治疗效果数据。
利用FITC-脲基丙酸进行体内成像研究的应用有限。作为一种荧光探针,如果该化合物无毒且稳定,则可用于离体组织成像或在透明模型(例如斑马鱼胚胎)中进行体内成像。FITC标记物在生物体液中可能会降解。大多数应用是在体外进行的,使用该探针标记细胞、亚细胞结构或生物分子,以便随后通过荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜(激发波长495 nm,发射波长520 nm)或流式细胞术进行分析。 |
| 酶活实验 |
作为一种荧光探针,FITC-脲基丙酸通常不用于标准的酶抑制或受体结合实验。然而,该化合物的荧光强度检测方法已相当成熟。以下是使用荧光分光光度计的典型荧光测量方案:在合适的缓冲液(例如,pH 7.4的PBS缓冲液)中配制已知浓度的FITC-脲基丙酸溶液。将激发波长设置为约495 nm,并扫描500-600 nm的发射光谱以确定最大发射波长(通常约为520 nm)。然后,在优化的激发/发射波长对下测量荧光强度,并构建荧光强度与浓度的标准曲线。未知样品的浓度可以通过该标准曲线插值进行定量。
无细胞标记实验:将 FITC-脲基丙酸溶解于 DMSO 或水性缓冲液(例如,pH 7.4 的 PBS)中,浓度为 1-10 mg/mL。将探针以 10 至 50 倍的摩尔比加入纯化蛋白(例如,牛血清白蛋白)中。在室温下避光孵育 1-4 小时。通过透析、尺寸排阻色谱或离心过滤去除未结合的探针。通过在 495 nm(FITC)和 280 nm(蛋白)处测定吸光度来测量标记效率,并计算标记度 (DOL)。对于直接荧光测量,使用荧光计或酶标仪在 495 nm 处激发,并在 520 nm 处测量发射光。作为示踪剂使用时,配制浓度为 1-100 uM 的 PBS 工作溶液。 |
| 细胞实验 |
FITC-脲基丙酸广泛应用于基于细胞的荧光检测,用于细胞追踪和成像。标准细胞标记方案:将目标细胞(例如肝细胞或癌细胞系)培养至所需汇合度。在含有FITC-脲基丙酸(浓度需优化,通常起始浓度为1-10 μM)的培养基中,于37°C、5% CO₂培养箱中孵育细胞30-60分钟。用PBS彻底洗涤细胞以去除未结合的探针。然后,可以使用荧光显微镜进行亚细胞定位研究,使用流式细胞仪进行细胞摄取定量分析,或使用微孔板荧光读数仪进行高通量定量分析。对于细胞追踪实验,可以对标记细胞进行长期监测,以评估探针的保留和分布。
将合适的细胞系(例如 HeLa、HEK293 或原代细胞)培养于含 10% FBS 的 DMEM 培养基中。细胞标记时,移除培养基,用 PBS 洗涤细胞,然后加入浓度为 1-100 uM 的 FITC-脲基丙酸(溶于无血清培养基或 PBS)。在 37℃ 避光孵育 15-60 分钟。用 PBS 洗涤细胞三次以去除未结合的探针。(可选)用 4% 多聚甲醛在室温下固定细胞 10 分钟。活细胞成像时,将细胞置于无 CO2 培养基或加热载物台上。使用荧光显微镜或配备 FITC 滤光片组(激发波长 450-490 nm,发射波长 515-530 nm)的共聚焦激光扫描显微镜进行观察。对于流式细胞术分析,洗涤后用胰蛋白酶-EDTA消化细胞,重悬于含2% FBS的PBS缓冲液中,并使用配备488 nm激光器和FL1(525 nm)检测器的流式细胞仪进行分析。每个样本取10,000个细胞,定量分析平均荧光强度(MFI)。对于共定位研究,使用细胞器特异性染料(例如,MitoTracker用于线粒体,LysoTracker用于溶酶体)进行共染色,并通过共聚焦显微镜成像。对于动力学摄取研究,用FITC-脲基丙酸(10 uM)处理细胞不同时间点(1、5、10、15、30、60分钟),洗涤后,通过流式细胞术分析测定摄取率。对于竞争性实验,在加入荧光探针前,先用过量的未标记脲基丙酸(100-1000 uM)预孵育细胞15分钟,以评估摄取机制的特异性。对于代谢研究,细胞标记后,用RIPA裂解缓冲液裂解细胞,提取细胞提取物,并通过LC-MS/MS分析以确认荧光物质的身份。设置适当的对照,包括单独使用FITC和未标记的细胞。标记后,用碘化丙啶染色或MTT法评估细胞活力,以确保探针浓度无毒。 |
| 动物实验 |
使用FITC-脲基丙酸进行的体内动物研究主要用于生物分布和代谢追踪。虽然已发表的具体实验方案有限,但一般方法如下:根据研究目的,通过适当的途径(静脉注射、腹腔注射或口服)向实验动物(例如小鼠或大鼠)给药FITC-脲基丙酸。在给药后预定的时间点,收集目标组织(肝脏、肾脏、血液、脑组织等),并制备匀浆或冰冻切片。可以使用体内成像系统(IVIS)观察全身分布的荧光信号,也可以通过组织切片的荧光显微镜进行离体观察。通过提取荧光化合物并根据标准曲线测量荧光强度,可以对组织中的探针浓度进行定量分析。
对于透明模式生物的活体成像,将FITC-脲基丙酸溶解于无菌PBS缓冲液中(1-10 mg/mL)。对于斑马鱼胚胎(72 hpf),使用微量注射器将1-10 nL探针溶液注射到卵黄囊或循环系统中。或者,如果该化合物水溶性好且细胞可渗透,则将10-100 μM探针加入胚胎浸泡水中。在28℃避光孵育30-120分钟。用胚胎培养基洗涤胚胎三次。用0.016%三卡因麻醉胚胎,并用1.5%低熔点琼脂糖将其固定在载玻片上。使用荧光立体显微镜或配备FITC滤光片组的共聚焦显微镜进行成像。对于离体组织成像,通过静脉或腹腔注射向小鼠注射FITC-脲基丙酸(1-10 mg/kg)。 0.5-4小时后,处死动物,采集器官(肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、脑组织),并制备冰冻切片(10-20 μm)。用4%多聚甲醛固定切片,用含DAPI的封片剂封片,并用荧光显微镜成像。对于组织分布研究,将器官匀浆,提取组织,并使用酶标仪(激发/发射波长485/525 nm)定量荧光强度,或根据蛋白质浓度进行标准化。设置载体对照和未处理动物以排除自发荧光的影响。对于生物分布和清除研究,在多个时间点(注射后0.5、1、2、4、8、24小时)采集血液样本。离心分离血浆,稀释后测量荧光强度。使用LC-MS/MS确认荧光信号对应于完整的FITC-脲基丙酸,而非游离的FITC。在注射显像剂量后24小时和7天,通过监测体重、行为和主要器官的组织病理学变化进行毒性评估。所有动物实验均应遵循机构动物护理和使用委员会(IACUC)的指导原则。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
FITC-脲基丙酸的具体药代动力学数据(例如半衰期、分布容积、清除率、生物利用度)在标准文献中尚无报道。作为一种研究用荧光探针,通常不会对这类化合物进行详细的药代动力学分析。然而,该探针的理化性质可从其溶解性特征推断:该化合物可溶于DMSO,且具有良好的水溶性,这可能有助于其吸收和分布。其分子量为563.58 g/mol。稳定性数据表明,该探针在储存和处理过程中需要避光;粉末状在-20°C下可稳定保存长达3年,溶液在-80°C下可稳定保存6个月,或在-20°C下可稳定保存1个月。这些特性表明,体内应用需要防止光漂白,并需考虑探针的代谢稳定性。
FITC-脲基丙酸的药代动力学数据尚未完全确定。作为一种用于体外标记的荧光探针,它通常不进行全身给药。如果用于体内,FITC标记物可能被酯酶或其他酶裂解,从而释放出游离的FITC,其生物分布和清除特性与FITC不同。游离FITC的血浆半衰期约为1-4小时,主要通过肾脏和胆汁排泄。母体化合物脲基丙酸(分子量118.09)是一种内源性代谢物。该探针(分子量563.58,分子式C27H25N5O5S)与FITC偶联后溶解度得到改善。体外使用时,先用DMSO溶解(1-10 mM储备液),然后用水或PBS稀释(最终DMSO浓度<0.5%)至工作浓度。溶解度:溶于DMSO;低浓度下可溶于水。储存方式:粉末储存于-20℃(3年)或4℃(2年);溶剂储存于-80℃(6个月)或-20℃(1个月)。避光保存(对光敏感)。避免反复冻融。长期储存已标记产品时,请分装后加入冷冻保护剂,于-80℃保存。探针操作时应小心,避免光漂白;标记和成像操作应在弱光环境下进行。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
根据现有产品信息,FITC-脲基丙酸仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。标准产品规格中未提供具体的毒理学数据(例如,LD50、细胞毒性IC50)。一般操作注意事项包括在运输和储存过程中避光,因为光照可能导致荧光化合物降解。该化合物通常以浅黄色至黄色固体粉末的形式储存在-20°C下,以保持长期稳定性。用户应遵循标准的实验室安全操作规程,包括佩戴适当的个人防护装备、避免吸入和皮肤接触,并根据机构规定处理废弃物。作为一种荧光素衍生物,该化合物通常具有较低的固有毒性,但研究人员应针对其特定的细胞类型和实验条件进行相应的细胞毒性试验。
FITC-脲基丙酸的毒性特征尚未得到充分阐明。作为一种荧光探针,它适用于体外低微摩尔浓度(1-100 μM)的研究,通常情况下,经MTT或碘化丙啶细胞活力检测,其对培养细胞无毒性。关于体内应用,目前数据有限;FITC标记的化合物有时可能引起轻微刺激或过敏反应。该化合物不含三氟乙酸盐;请注意,“FITC-脲基丙酸”的名称中不包含三氟乙酸。应采取标准的实验室防护措施(手套、实验服、护目镜)。避免吸入、摄入和皮肤接触。该化合物对光敏感;请储存在棕色小瓶中。废弃物应按照机构荧光染料处理指南进行处理。如不慎入眼,请用清水冲洗15分钟。如接触皮肤,请用肥皂和清水清洗。目前尚无遗传毒性或致癌性数据。该化合物仅供研究使用,不可用于诊断或治疗用途。 |
| 其他信息 |
FITC-脲基丙酸是一种用于标记生物分子或细胞的荧光探针。FITC(异硫氰酸荧光素)基团共价连接到脲基丙酸(3-脲基丙酸,也称为3-脲基丙酸或N-氨甲酰-β-丙氨酸)上。脲基丙酸是尿嘧啶代谢的中间产物,也参与嘧啶和某些氨基酸的降解。在正常生理条件下,脲基丙酸存在于尿液中,是一种内源性代谢产物。FITC标记产生绿色荧光(最大激发波长约为495 nm,最大发射波长约为520 nm),使该探针适用于荧光显微镜、共聚焦成像和流式细胞术。该探针可用于研究脲基丙酸的细胞摄取和分布,或通过羧酸基团(利用EDC/NHS化学进行酰胺偶联)或FITC异硫氰酸酯基团(与伯胺反应形成硫脲键)标记蛋白质和其他生物分子。该化合物仅供研究使用,不得用于诊断或治疗用途。
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| 分子式 |
C27H25N5O7S
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| 分子量 |
563.58
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| 相关CAS号 |
Ureidopropionic acid;462-88-4
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 别名 |
FITC-3-Ureidopropionate; FITC-Ureidopropionic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7744 mL | 8.8719 mL | 17.7437 mL | |
| 5 mM | 0.3549 mL | 1.7744 mL | 3.5487 mL | |
| 10 mM | 0.1774 mL | 0.8872 mL | 1.7744 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。