| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
DCAF1 binder 1 specifically targets DCAF1 (also known as VprBP), a substrate receptor of the CUL4-DDB1 (CRL4) E3 ubiquitin ligase complex. The CRL4-DCAF1 complex is involved in the ubiquitination and proteasomal degradation of various cellular proteins. DCAF1 binder 1 acts as a ligand that binds to DCAF1 with high selectivity, occupying the substrate-binding pocket. By binding to DCAF1, the compound can be used as a “bait” to recruit the CRL4 ubiquitination machinery to a target protein of interest. This is typically achieved by conjugating DCAF1 binder 1 (via a linker) to a molecule that binds the target protein, forming a PROTAC. The PROTAC brings the target protein into proximity with DCAF1, leading to ubiquitination and degradation of the target. Thus, DCAF1 binder 1 enables the development of DCAF1-recruiting PROTACs.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，DCAF1结合剂1能选择性地结合CRL4-DCAF1 E3连接酶复合物，这已通过使用重组DCAF1蛋白或CRL4-DCAF1复合物的表面等离子共振(SPR)或生物层干涉(BLI)实验得到证实。其结合亲和力(KD)通常在纳摩尔至低微摩尔范围内，但具体数值未明确。该化合物本身不诱导降解；它是一种配体，旨在用作PROTAC分子的构建单元。作为PROTAC的组成部分，DCAF1结合剂1与靶标结合弹头偶联后，可促进靶向蛋白降解。除与DCAF1结合外，该化合物本身没有显著的生物活性，因此是募集该E3连接酶的理想支架。
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| 体内研究 (In Vivo) |
由于DCAF1结合剂1主要用作PROTAC的化学构建模块而非治疗药物，因此尚未有关于其体内活性的报道。含有DCAF1结合剂1的PROTAC的体内活性已在临床前模型中得到证实。例如，针对特定癌蛋白的DCAF1募集型PROTAC已被证明能够降解其靶蛋白并抑制异种移植小鼠模型中的肿瘤生长。然而，单独使用母体配体DCAF1结合剂1预计不会产生任何体内疗效或可测量的药效学效应，因为它不与特定的疾病相关靶点结合，而仅作为E3泛素连接酶的募集剂。
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| 酶活实验 |
DCAF1 结合剂 1 用于生化结合实验，以测定其与 DCAF1 蛋白或 CRL4-DCAF1 复合物的亲和力。表面等离子共振 (SPR) 分析方案如下：将重组人 DCAF1 蛋白（全长或 WD40 结构域）通过胺偶联固定在 CM5 传感器芯片上。运行缓冲液为 HBS-EP（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.005% Tween-20）。将 DCAF1 结合剂 1 溶解于 DMSO 中，并用运行缓冲液进行系列稀释（0.1 nM - 10 uM，最终 DMSO 浓度为 1%）。以 30 uL/min 的流速将化合物溶液注入 DCAF1 表面，持续 60 秒（结合阶段），随后进行 180 秒的解离阶段。芯片表面用 10 mM 甘氨酸-HCl 溶液（pH 2.0）进行再生。传感器图谱采用双参考，并全局拟合到 1:1 Langmuir 结合模型，以计算 ka、kd 和 KD 值。据报道，DCAF1 结合剂 1 的 KD 值在低纳摩尔范围内（具体数值未知）。此外，还可以开发一种使用标记的 DCAF1 和荧光示踪剂的 TR-FRET（时间分辨荧光能量转移）结合分析方法。DCAF1 结合剂 1 也用于竞争性结合分析，以确定其置换已知 DCAF1 配体的 IC50 值。
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| 细胞实验 |
为了验证基于 DCAF1 结合剂 1 的 PROTAC 的有效性，在培养的癌细胞系（例如 HEK-293T、HeLa、MCF-7 或取决于靶蛋白的特定癌细胞系）中进行细胞实验。单独使用 DCAF1 结合剂 1 作为阴性对照，以证明与 DCAF1 的结合不足以诱导降解。PROTAC 化合物（由 DCAF1 结合剂 1 + 连接子 + 靶蛋白结合剂组成）的标准实验方案包括：用不同浓度（例如 0.1 nM - 10 uM）的 PROTAC 处理细胞 4-24 小时。裂解细胞后，通过蛋白质印迹或定量免疫分析检测目标蛋白（例如癌蛋白）的丰度。通过比较目标蛋白水平与内参蛋白（例如 GAPDH、β-肌动蛋白）的表达水平来量化降解程度。 DCAF1结合剂1（单独使用，浓度为1-10 uM）用作对照，以确认降解依赖于二价PROTAC结构。此外，用过量的DCAF1结合剂1预先与细胞孵育的竞争性实验可以阻断PROTAC诱导的降解，证实该效应依赖于DCAF1。计算了DC50（50%降解浓度）和Dmax（最大降解浓度）。通过靶蛋白的免疫沉淀和泛素Western blot检测可以确认靶蛋白的泛素化。由于DCAF1结合剂1本身并非治疗剂，因此除了结合和竞争实验外，未进行针对该配体（不含连接子和靶标）的特异性细胞检测。
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| 动物实验 |
由于DCAF1结合剂1本身不具有治疗作用，因此不进行体内疗效研究。对于含有DCAF1结合剂1的PROTAC，小鼠异种移植瘤实验是标准流程。典型实验方案如下：将表达靶蛋白的癌细胞（例如，5 × 10⁶个细胞）皮下注射到雌性NOD/SCID或NSG小鼠体内。当肿瘤体积达到150-200 mm³时，将小鼠随机分组（每组n = 8-10只）。将DCAF1募集PROTAC配制于10% DMSO/40% PEG300/5% Tween-80/45%生理盐水或20% Captisol的PBS溶液中。PROTAC以1-30 mg/kg的剂量腹腔注射或静脉注射，每日或隔日一次，持续2-4周。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积。监测体重变化以评估毒性反应。载体组接受不含PROTAC的相同制剂。对照组接受含有突变（失活）DCAF1结合剂1的PROTAC，以确认靶向降解是疗效的必要条件。研究结束时，切除肿瘤组织，称重，并进行Western blot分析以确认靶点降解，以及免疫组织化学（Ki67、cleaved caspase-3）和组织学分析。这些实验表明，DCAF1募集型PROTAC能够显著抑制肿瘤生长。由于游离的DCAF1结合剂1缺乏靶点结合基团，因此未对其进行此类研究。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于 DCAF1 结合剂 1 是一种研究用化学中间体而非候选药物，因此通常不对其进行药代动力学研究。然而，DCAF1 结合剂 1 的理化性质是可以预测的。其分子量为 507.07 g/mol。该化合物可能具有中等亲脂性，并可能具有可接受的渗透性。该配体旨在用作 PROTAC 的结构单元。在 PROTAC 分子（完全降解剂）的背景下，其药代动力学性质将主要由整个 PROTAC（通常具有更高的分子量，>1000 Da）决定，而不是由 DCAF1 结合配体本身决定。当与 PROTAC 偶联时，DCAF1 结合剂 1 可溶于 DMSO 以及用于体内制剂的 DMSO/PEG/Tween/生理盐水混合物中。目前尚未发表 DCAF1 结合剂 1 的详细药代动力学参数（t½、Cmax、AUC、清除率、蛋白结合率）。该化合物仅供研究使用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于DCAF1结合剂1仅用作靶向蛋白降解的研究工具，而非候选药物，因此其毒性尚未进行正式研究。由于DCAF1并非大多数成人组织中的必需基因，且DCAF1结合配体在临床前模型中作为PROTAC方案的一部分使用时通常耐受性良好，因此预计其毒性较低。目前尚无具体的毒性数据（LD50、急性毒性、遗传毒性、器官毒性）。然而，与所有小分子研究化学品一样，在处理DCAF1结合剂1时，应遵循标准的实验室安全预防措施（佩戴手套、实验服、护目镜，并确保通风良好）。避免吸入、皮肤接触和摄入。该化合物应储存在-20℃的密封容器中，并避光防潮。DCAF1结合剂1仅供研究使用，不得用于人体治疗、诊断或临床用途。该化合物未经任何监管机构批准。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
E3泛素连接酶是泛素-蛋白酶体系统的关键组成部分，该系统控制蛋白质降解。CRL4（Cullin-4 RING E3连接酶）家族是人类中最大且功能最多样的E3连接酶家族之一。DCAF1（DDB1和CUL4相关因子1）是CRL4复合物的底物识别受体。DCAF1最初被鉴定为HIV-1 Vpr蛋白（病毒蛋白R）的结合伴侣，Vpr蛋白通过靶向宿主蛋白进行降解来诱导G2期细胞周期阻滞。DCAF1与DDB1和CUL4A/B结合形成CRL4-DCAF1复合物，该复合物可泛素化包括DNA损伤反应蛋白、组蛋白（H3和H4）以及其他调控蛋白在内的底物。DCAF1在某些癌症中过表达，是一个潜在的治疗靶点。然而，DCAF1结合蛋白1本身并不作为治疗药物使用。它并非一种蛋白质降解剂，而是一种用于设计PROTAC的化学工具，该PROTAC能够募集CRL4-DCAF1 E3连接酶，从而降解与疾病相关的靶点（例如BRD4、BRD9、BTK、EGFR等）。与广泛使用的E3连接酶募集剂（CRBN结合剂、VHL结合剂、IAP结合剂）相比，DCAF1募集PROTAC提供了一种替代的降解途径，并可能克服CRBN或VHL通路突变引起的耐药性。DCAF1结合剂1是靶向蛋白降解化学生物学工具箱中的重要补充。它也被称为靶向蛋白降解的E3连接酶配体。该研究化合物的CAS号尚未公开。DCAF1结合剂1仅供研究使用。
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| 分子式 |
C28H35CLN6O
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| 分子量 |
507.07
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~50 mg/mL (~98.61 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9721 mL | 9.8606 mL | 19.7211 mL | |
| 5 mM | 0.3944 mL | 1.9721 mL | 3.9442 mL | |
| 10 mM | 0.1972 mL | 0.9861 mL | 1.9721 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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