11R-VIVIT

别名: NFAT Inhibitor; 249537-73-3; VIVIT peptide; NFAT Inhibitor trifluoroacetate salt; ...; VIVIT peptide;11R-VIVIT;ABM-7733; 细胞渗透性NFAT抑制剂;L-Glutamic acid,L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginyl-L-arginylglycylglycylglycyl-L-methionyl-L-alanylglycyl-L-prolyl-L-histidyl-L-prolyl
目录号: V77334 纯度: ≥98%
11R-VIVIT TFA 是活化 T 细胞的细胞通透性核因子 (NFAT) 抑制剂。
11R-VIVIT CAS号: 592517-80-1
产品类别: NFAT
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
11R-VIVIT TFA 是一种活化 T 细胞核因子(NFAT)抑制剂。11R-VIVIT TFA 可用于足细胞和糖尿病肾病的研究。
11R-VIVIT 是一种可透过细胞膜的肽类抑制剂,可抑制活化 T 细胞核因子(NFAT)。它基于 NFAT 家族成员中保守的钙调磷酸酶(CaN)结合位点而开发,能够选择性地干扰 CaN-NFAT 相互作用,而不影响 CaN 磷酸酶活性。本研究探讨了其在保护 db/db 小鼠足细胞免受损伤和预防糖尿病肾病(DN)方面的潜在治疗作用。[1]
11R-VIVIT TFA 是一种细胞渗透性肽,可抑制活化T细胞核因子 (NFAT)。它是一种高亲和力肽,能特异性阻断钙调磷酸酶与 NFAT 的相互作用,从而阻止 NFAT 的核转位,且不影响钙调磷酸酶的磷酸酶活性。它是研究 T 细胞活化、足细胞生物学和糖尿病肾病的重要研究工具。
生物活性&实验参考方法
靶点
NFAT[1]; 11R-VIVIT is a cell-permeable peptide inhibitor of the nuclear factor of activated T-cells (NFAT). It was developed based on the conserved calcineurin (CaN) docking site within the NFAT family member, selectively interfering with the CaN-NFAT interaction without affecting CaN phosphatase activity. In this study, it was investigated for its potential therapeutic role in protecting against podocyte injury and diabetic nephropathy (DN) in db/db mice. [1]
The target is the calcineurin-NFAT signaling axis. Specifically, VIVIT binds to the docking site on calcineurin (the "VIVIT" binding groove) that is normally recognized by the NFAT transcription factor. 11R-VIVIT acts as a calcineurin inhibitor by blocking NFAT docking, preventing its dephosphorylation and subsequent nuclear translocation. This blocks NFAT-dependent gene expression.
体外研究 (In Vitro)
在培养的条件永生化小鼠足细胞中,高糖(HG,30 mM)处理48小时可诱导NFAT2激活(核内积累)并增加uPAR mRNA和蛋白表达。向高糖处理的细胞中加入11R-VIVIT(100 nM)48小时后,可完全阻断高糖诱导的NFAT2核内积累。[1]
蛋白质印迹分析显示,高糖处理可增加足细胞核提取物中NFAT2的表达,而11R-VIVIT(100 nM)处理可显著降低这种效应。[1]
11R-VIVIT(100 nM)显著降低了高糖诱导的培养足细胞中uPAR mRNA(Plaur基因)和蛋白表达的增加。 [1]
免疫荧光染色显示,11R-VIVIT(100 nM)处理可抑制高糖诱导的培养足细胞中NFAT2核定位(红色荧光)的增加。[1]
使用在Transwell滤膜上培养的足细胞单层进行的白蛋白内流实验表明,高糖(30 mM,48小时)可显著增加白蛋白跨单层的通量。11R-VIVIT(100 nM)处理可显著减弱高糖诱导的滤过屏障功能障碍(白蛋白内流)。[1]
与正常葡萄糖处理的足细胞相比,11R-VIVIT(100 nM)处理可显著降低高糖处理的足细胞中NFAT2的表达。11R-VIVIT可减轻高糖引起的足细胞滤过屏障功能障碍[1]。
体外实验表明,与正常葡萄糖处理的足细胞相比,11R-VIVIT (100 nM) 可显著降低高糖处理的足细胞中 NFAT2 的表达。它是一种高选择性的 NFAT 抑制剂,与环孢素 A 或 FK506 不同,它对钙调磷酸酶活性没有影响。此外,它还可用于免疫测定中抑制 T 细胞活化。
体内研究 (In Vivo)
在糖尿病db/db小鼠中,与载体对照组db/db小鼠相比,接受11R-VIVIT治疗(1 mg•kg⁻¹,腹腔注射,每周三次,持续8周)可显著降低尿白蛋白排泄量(白蛋白尿)的增加。[1]
与载体对照组db/db小鼠相比,11R-VIVIT治疗显著提高了db/db小鼠的肌酐清除率(肾功能指标)。[1]
组织学分析(PAS染色)显示,11R-VIVIT治疗显著改善了糖尿病db/db小鼠肾小球系膜基质的扩张,这可通过系膜基质的比例来量化。 [1]
电子显微镜观察显示,11R-VIVIT治疗可减轻db/db小鼠肾小球基底膜(GBM)增厚和足细胞足突消失。[1]
WT1(足细胞标志物)免疫染色显示,11R-VIVIT治疗显著改善了db/db小鼠每个肾小球的足细胞数量减少(13.8 ± 0.86 vs. db/db+PBS组的10.85 ± 0.81,P<0.05)。[1]
db/db小鼠肾小球足细胞免疫荧光染色显示,11R-VIVIT治疗抑制了NFAT2的激活(核内积累),并恢复了突触蛋白和uPAR的表达。 [1]
除了减轻肾小球基底膜 (GBM) 增厚和足细胞足突消失外,11R-VIVIT 还能部分恢复足细胞数量,抑制 NFAT2 激活,并揭示足细胞相关受体 (uPAR) 的表达[1]。这些作用可被 11R-VIVIT 显著逆转。
体内实验表明,11R-VIVIT 可显著降低 db/db 小鼠尿白蛋白排泄率,减轻肾小球基底膜 (GBM) 增厚和足细胞足突消失,并部分恢复足细胞数量。此外,它还能抑制肾小球足细胞中 NFAT2 的激活和 uPAR 的表达,从而在糖尿病肾病模型中显示出疗效。
酶活实验
11R-VIVIT 是一种细胞渗透性肽,旨在选择性抑制 NFAT(活化 T 细胞核因子)转录因子,而不影响钙调磷酸酶的活性。在典型的非细胞结合或活性测定中,通常使用竞争性结合模型来评估其作用机制。尽管由于其肽的特性,直接酶动力学研究较少见,但体外细胞实验表明,11R-VIVIT(例如,浓度为 100 nM)可显著抑制 NFAT2 的表达并阻止其核转位。与直接抑制钙调磷酸酶的传统药物不同,11R-VIVIT 特异性地阻断钙调磷酸酶与 NFAT 之间的相互作用,使其成为一种底物拮抗剂。标准测定方案包括用该肽(溶于水,浓度为 100 mg/mL)处理细胞或分离的细胞组分,并测量下游转录活性的抑制情况。
采用表面等离子共振(SPR)技术进行非细胞竞争性结合实验。将重组钙调磷酸酶蛋白固定在芯片上。将不同浓度的11R-VIVIT肽流过芯片,以测量其结合亲和力(Kd)。在竞争实验中,使用荧光标记的NFAT肽,并测量加入VIVIT后信号的降低情况。
细胞实验
足细胞培养和处理:将条件永生化的小鼠足细胞在含10% FBS和IFN-γ的RPMI1640培养基中于33°C培养。在不添加IFN-γ的情况下,于37°C培养10-14天诱导分化。在无血清DMEM培养基中同步化24小时后,分别用正常葡萄糖(NG,5.3 mM)、高葡萄糖(HG,30 mM)或渗透压对照(NG + 24.7 mM甘露醇)处理细胞48小时。为抑制分化,在高葡萄糖处理的细胞中加入11R-VIVIT(100 nM)继续培养48小时。[1]
培养足细胞的免疫荧光:用4%多聚甲醛固定足细胞,封闭后,与兔抗NFAT2抗体于4°C孵育过夜。洗涤后,将细胞与山羊抗兔 Alexa Fluor 555 二抗在室温下孵育 1 小时,然后用 DAPI 染色以显示细胞核。使用共聚焦显微镜采集图像。[1]
蛋白质印迹分析:用 RIPA 裂解缓冲液裂解足细胞。使用试剂盒提取核蛋白和胞质蛋白。将 30 μg 蛋白在 10% SDS-PAGE 凝胶上进行分离,转移至 PVDF 膜,并与一抗(抗 NFAT2、抗组蛋白 3、抗 uPAR、抗 GAPDH)在 4°C 下孵育过夜。然后将膜与 HRP 标记的二抗在室温下孵育 1 小时,并用 ECL 检测信号。[1]
实时定量 RT-PCR (qRT-PCR):使用 Trizol 试剂从培养的足细胞中提取总 RNA。以 2 μg 总 RNA 为模板合成 cDNA。使用 SYBR Green Master Mix 和 Plaur (uPAR) 及 GAPDH(内参)特异性引物进行 qRT-PCR。采用 2⁻ΔΔCt 法计算表达倍数变化。[1]
白蛋白内流实验(滤过屏障功能):将足细胞 (5×10³) 接种于胶原蛋白包被的 Transwell 小室(3 μm 孔径)上室,培养 10 天。血清饥饿后,细胞预先用或不用 11R-VIVIT (100 nM) 孵育 30 分钟,然后用或不用 30 mM 葡萄糖孵育 48 小时。上室加入 RPMI 1640 培养基,下室加入含 40 mg/mL BSA 的 RPMI 1640 培养基。在 37°C 下孵育 6 小时后,收集上室培养基,使用 BCA 蛋白测定试剂盒测定白蛋白浓度。[1]
在T细胞活化研究中,用PMA和离子霉素刺激原代人T细胞或Jurkat细胞。细胞预先与11R-VIVIT(1-100 nM)孵育1小时。通过免疫荧光或核/胞质组分Western blot检测NFAT核转位。细胞因子(例如IL-2)的产生通过ELISA测定。这证实了钙调磷酸酶-NFAT通路被阻断。
动物实验
动物:本研究使用雄性C57BL/KsJ db/db小鼠(2型糖尿病模型)和年龄匹配的野生型BKS小鼠(实验开始时12周龄)。共使用15只小鼠(每组n=5:BKS+PBS组、db/db+PBS组、db/db+11R-VIVIT组)。[1]
治疗方案:11R-VIVIT溶于PBS,以1 mg·kg⁻¹体重的剂量进行腹腔注射(ip)。每周注射三次,共8周。对照组(BKS组和db/db组)注射等体积的PBS,但不注射11R-VIVIT。[1]
样本采集和监测:每周采集小鼠尾静脉血,空腹6小时后测量空腹血糖。每周测量体重。每两周将小鼠单独放入代谢笼中,收集24小时尿液。治疗8周后,用氯胺酮(70 mg•kg⁻¹,腹腔注射)麻醉小鼠,并从眼眶后静脉丛采集血样。称量心脏、肝脏和肾脏组织。[1]
肾脏组织学和分析:将石蜡包埋的肾脏组织切成4 μm厚的切片,并用过碘酸雪夫氏染色(PAS染色)。使用Image-Pro Plus 6.0软件,通过将系膜中PAS阳性且无核的区域面积除以肾小球毛细血管袢面积,来量化系膜扩张。[1]
足细胞计数:使用抗WT1抗体对4 μm厚的切片进行免疫染色,检测足细胞。每个动物随机选取20个肾小球,计算每个肾小球中WT1阳性细胞的平均值。[1]
电子显微镜:将肾脏组织块(1 mm)固定于2.5%戊二醛溶液中,再用1%四氧化锇溶液后固定,脱水后包埋于Epon树脂中。将切片(80 nm)用醋酸铀和柠檬酸铅染色,并在电子显微镜下观察。每个样本选取2-3个肾小球,每张照片测量5个点的肾小球基底膜(GBM)厚度。[1]
在体内研究中,db/db小鼠(一种2型糖尿病和肾病模型)腹腔注射11R-VIVIT TFA,剂量为0.5-5 mg/kg/天,持续4-8周。收集尿液以测定尿白蛋白排泄量(UAE)。通过组织学(PAS染色)分析肾脏切片中的肾小球基底膜(GBM)厚度,并通过电子显微镜分析足细胞足突消失情况。
药代性质 (ADME/PK)
标准产品数据表中并未详细列出全身药代动力学 (PK) 的具体数据,例如血浆半衰期 (t1/2) 和生物利用度。然而,功能性分析估计 11R-VIVIT 在 Jurkat T 细胞中的细胞内功能半衰期约为 30 小时,表明其内化后具有较高的稳定性。该肽具有很强的极性(预测 LogP 值为 -17.4),这通常意味着其口服生物利用度较差;因此,在动物研究中,通常采用腹腔注射 (ip) 给药(例如,5 mg/kg 的给药方案)。由于存在 11-精氨酸 (11R) 转导结构域,尽管该化合物分子量较大(约 3573 g/mol)且具有极性,但仍表现出较高的细胞渗透性。
11R-VIVIT 可溶于水(100 mg/mL,27.99 mM)。该肽的分子式为 C1,0H2,38N6O36S,分子量为 3573.15。在 -20℃ 干燥条件下储存稳定。用于体内给药时,通常配制于生理盐水或 PBS 缓冲液中。11R 肽序列(11 个精氨酸残基)可增强其跨细胞膜的通透性。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
11R-VIVIT(1 mg•kg⁻¹,腹腔注射,每周三次,持续8周)治疗,对糖尿病db/db小鼠或非糖尿病BKS小鼠的体重、食物摄入量或饮水量均无影响。[1]
11R-VIVIT治疗对db/db小鼠(治疗组为29.8 ± 1.1 mmol•L⁻¹,未治疗组为30.8 ± 0.9 mmol•L⁻¹)或BKS小鼠的血糖水平均无影响,表明其肾脏保护作用与降血糖作用无关。 [1]
各治疗组间心脏重量无显著差异,11R-VIVIT 显著抑制了 db/db 小鼠肾脏重量的增加(0.33 ± 0.02 g vs. db/db+PBS 组 0.44 ± 0.01 g)。肝脏重量不受治疗影响(db/db+11R-VIVIT 组 2.82 ± 0.18 g vs. db/db+PBS 组 2.83 ± 0.26 g)。[1]
由于 11R-VIVIT 仅供研究使用 (RUO),因此其毒理学数据有限。目前的材料安全数据表 (MSDS) 将其归类为“非危险物质或混合物”,未根据 GHS 标准列出任何特定的靶器官毒性。体内动物研究(小鼠)表明,11R-VIVIT 给药不会产生传统钙调磷酸酶抑制剂(如环孢素 A 或 FK506)的典型副作用,例如肾毒性、肝毒性或神经毒性。具体而言,研究未发现对心脏和肝脏的毒性副作用,并且在功能剂量(例如 100 nM 至 5 mg/kg)下,未观察到对骨髓巨噬细胞 (BMM) 或肾细胞的细胞毒性。然而,标准安全警告建议将其视为一般刺激物(吞咽有害,可引起皮肤/眼睛刺激),直至获得更多数据。
动物研究表明,11R-VIVIT 在所用剂量(0.5-5 mg/kg)下耐受性良好。由于其选择性阻断 NFAT 而不影响钙调磷酸酶的磷酸酶活性,因此预计其安全性优于环孢素 A。未报告明显的毒性或不良反应。TFA 盐在这些浓度下无毒。
参考文献

[1]. NFAT2 inhibitor ameliorates diabetic nephropathy and podocyte injury in db/db mice. Br J Pharmacol. 2013;170(2):426-439.

其他信息
11R-VIVIT是一种选择性钙调磷酸酶-NFAT相互作用抑制剂。与环孢素A不同,它不影响钙调磷酸酶的活性。它最初是基于NFAT家族成员中保守的钙调磷酸酶对接位点(VIVIT基序)而开发的。本研究首次证实,这种细胞渗透性NFAT抑制剂对db/db小鼠糖尿病肾病中的足细胞损伤具有保护作用,其机制可能与CaN/NFAT2/uPAR信号通路有关。[1]
11R-VIVIT TFA 是一种研究级的钙调磷酸酶-NFAT 通路肽抑制剂。它并非药物,也未获得美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准用于人体治疗。它用于研究免疫调节、足细胞生物学和糖尿病肾病。关键研究表明,它在 db/db 小鼠模型中对治疗糖尿病肾病有效。本品仅供研究使用 (RUO)。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C147H259N67O36S
分子量
3573.15
CAS号
592517-80-1
相关CAS号
11R-VIVIT;592517-80-1
序列
Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Gly-Gly-Gly-Met-Ala-Gly-Pro-His-Pro-Val-Ile-Val-Ile-Thr-Gly-Pro-His-Glu-Glu
短序列
R R R R R R R R R R R G G G M A G P H P V I V I T G P H E E
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
-3.6
tPSA
651 Ų
氢键供体(HBD)数目
19
氢键受体(HBA)数目
26
可旋转键数目(RBC)
48
重原子数目
118
分子复杂度/Complexity
3550
定义原子立体中心数目
17
SMILES
CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@H](CC4=CN=CN4)NC(=O)[C@@H]5CCCN5C(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)N
InChi Key
QPMHUXBSHGAVGD-MCDIZDEASA-N
InChi Code
InChI=1S/C75H118N20O22S/c1-12-39(7)59(90-70(111)57(37(3)4)88-68(109)52-19-16-27-95(52)74(115)49(30-44-32-78-36-82-44)87-67(108)51-18-15-26-94(51)53(97)33-79-62(103)41(9)83-63(104)45(76)24-28-118-11)72(113)89-58(38(5)6)71(112)91-60(40(8)13-2)73(114)92-61(42(10)96)69(110)80-34-54(98)93-25-14-17-50(93)66(107)86-48(29-43-31-77-35-81-43)65(106)84-46(20-22-55(99)100)64(105)85-47(75(116)117)21-23-56(101)102/h31-32,35-42,45-52,57-61,96H,12-30,33-34,76H2,1-11H3,(H,77,81)(H,78,82)(H,79,103)(H,80,110)(H,83,104)(H,84,106)(H,85,105)(H,86,107)(H,87,108)(H,88,109)(H,89,113)(H,90,111)(H,91,112)(H,92,114)(H,99,100)(H,101,102)(H,116,117)/t39-,40-,41-,42+,45-,46-,47-,48-,49-,50-,51-,52-,57-,58-,59-,60-,61-/m0/s1
化学名
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[2-[[(2S,3R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-1-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]pentanedioic acid
别名
NFAT Inhibitor; 249537-73-3; VIVIT peptide; NFAT Inhibitor trifluoroacetate salt; ...; VIVIT peptide;11R-VIVIT;ABM-7733;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O :~100 mg/mL (~27.99 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.2799 mL 1.3993 mL 2.7987 mL
5 mM 0.0560 mL 0.2799 mL 0.5597 mL
10 mM 0.0280 mL 0.1399 mL 0.2799 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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