- Binds to glucagon-like peptide-1 receptor (GLP-1R) and glucagon receptor (GCGR) (dual agonist); for human GLP-1R, the EC₅₀ is 0.08 nM (measured by cAMP accumulation assay), and for human GCGR, the EC₅₀ is 0.45 nM [1]
- Shows selective activation for GLP-1R and GCGR without significant binding to other related GPCRs (e.g., GIPR); the Ki value for GLP-1R is 0.05 nM, and for GCGR is 0.32 nM (detected by SPR binding assay) [1]
- In mouse models, the EC₅₀ for mouse GLP-1R is 0.12 nM and for mouse GCGR is 0.58 nM (measured by cAMP response in transfected cells) [3]

1. 受体激活与信号转导：在稳定表达人GLP-1R的CHO-K1细胞中，用IBI-362（Mazdutide；LY-3305677）（0.01-100 nM）处理可诱导浓度依赖性的cAMP积累，EC₅₀为0.08 nM；在表达人GCGR的CHO-K1细胞中，该药物诱导cAMP积累的EC₅₀为0.45 nM。Western blot分析显示，1 nM IBI-362可使GLP-1R表达细胞中ERK1/2磷酸化水平（p-ERK1/2）较对照组升高约2.5倍，在GCGR表达细胞中升高约1.8倍。即使在100 nM浓度下，也未观察到对GIPR的显著激活 [1]
2. 胰岛细胞胰岛素与胰高血糖素分泌调节：分离的人胰岛在高糖条件（16.7 mM葡萄糖）下用IBI-362（0.1-10 nM）处理，1 nM浓度时胰岛素分泌较仅糖组升高约1.8倍，胰高血糖素分泌较仅糖组降低约35%；在低糖条件（3.3 mM葡萄糖）下，10 nM IBI-362对胰高血糖素分泌无显著影响（无过度抑制），表明其对激素分泌的调节具有葡萄糖依赖性 [1]

1. db/db小鼠（2型糖尿病模型）药效：8-10周龄雄性db/db小鼠皮下注射IBI-362，剂量为0.1、0.3、1.0 mg/kg，每周1次，持续4周。与溶媒组相比：（1）第4周空腹血糖（FBG）：0.3 mg/kg组降低约30%，1.0 mg/kg组降低约45%；（2）第4周糖化血红蛋白（HbA₁c）：1.0 mg/kg组从8.5%降至7.3%，降低1.2%；（3）体重：1.0 mg/kg组第4周体重从52 g降至48 g，降低约8%；（4）能量消耗（间接测热法检测）：1.0 mg/kg组暗周期能量消耗较溶媒组升高约15%。脂肪组织组织学分析显示，1.0 mg/kg组附睾白色脂肪细胞平均体积较溶媒组缩小约25% [3]
2. 1b期临床试验（中国2型糖尿病患者）药效：一项随机、双盲、溶媒对照试验纳入68例中国2型糖尿病患者（HbA₁c 7.0%-10.0%），患者皮下注射IBI-362，剂量为0.5、1.0、1.5、2.0 mg，每周1次，持续12周。与溶媒组相比：（1）HbA₁c变化：1.5 mg组从基线8.2%降至第12周6.6%，降低1.6%；2.0 mg组降低1.8%；（2）空腹血糖（FPG）变化：2.0 mg组从基线9.5 mmol/L降至第12周6.3 mmol/L，降低3.2 mmol/L；（3）体重变化：2.0 mg组从基线82.5 kg降至第12周77.3 kg，降低5.2 kg；（4）餐后2小时血糖（PPG）：2.0 mg组降低4.5 mmol/L。所有剂量组均未观察到空腹胰高血糖素水平显著升高 [2]

1. GLP-1R/GCGR的SPR（表面等离子体共振）结合实验：通过胺偶联法将重组人GLP-1R和GCGR（胞外域）固定在CM5传感芯片上。IBI-362用运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% Tween-20）配制为0.01-10 nM浓度，以30 μL/min的流速注入传感芯片（结合相120秒），随后通入运行缓冲液（解离相600秒）。采用1:1结合模型拟合传感图数据，计算平衡解离常数（Ki），其中GLP-1R的Ki为0.05 nM，GCGR的Ki为0.32 nM [1]
2. 受体活性的HTRF（均相时间分辨荧光）cAMP实验：将表达人GLP-1R或GCGR的CHO-K1细胞以1×10⁴个/孔接种于384孔板，过夜培养。培养基替换为含IBI-362（0.001-100 nM）和cAMP HTRF检测试剂盒（含穴状化合物标记的抗cAMP抗体和d2标记的cAMP）的实验缓冲液（含5 mM HEPES pH 7.4、0.1% BSA的HBSS）。37°C孵育60分钟后，用HTRF酶标仪检测620 nm和665 nm处荧光强度，以665 nm/620 nm荧光比值计算cAMP浓度，通过四参数逻辑曲线拟合确定EC₅₀ [1]

1. 受体表达细胞的ERK1/2磷酸化实验：将稳定表达人GLP-1R或GCGR的CHO-K1细胞以5×10⁵个/孔接种于6孔板，血清饥饿16小时。用IBI-362（0.01-10 nM）处理细胞10分钟，冰浴PBS洗涤后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。裂解液在4°C下以12,000×g离心15分钟，收集上清液。取等量蛋白（每泳道30 μg）经10% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用含5%脱脂牛奶的TBST室温封闭1小时，随后加入抗p-ERK1/2、总ERK1/2和GAPDH（内参）一抗，4°C孵育过夜。TBST洗涤后，加入HRP标记的二抗室温孵育1小时，ECL试剂显影蛋白条带，ImageJ定量灰度值，p-ERK1/2相对水平以总ERK1/2归一化 [1]
2. 人胰岛激素分泌实验：分离人胰岛，用含10% FBS的CMRL 1066培养基培养48小时。将胰岛（每孔50个）接种于24孔板，在含3.3 mM葡萄糖的克雷布斯-林格碳酸氢盐缓冲液（KRBB）中预孵育1小时。缓冲液替换为含3.3 mM葡萄糖（低糖）或16.7 mM葡萄糖（高糖）及IBI-362（0.1-10 nM）的KRBB，37°C孵育2小时后收集上清液。用为人胰岛素ELISA试剂盒检测胰岛素浓度，人胰高血糖素ELISA试剂盒检测胰高血糖素浓度，结果以每孔胰岛数量归一化 [1]

1. db/db小鼠疗效研究：将雄性db/db小鼠（8-10周龄，体重45-55 g）随机分为4组（每组n=8）：赋形剂组（0.9%生理盐水，含0.1% Tween-80）、IBI-362 0.1 mg/kg组、0.3 mg/kg组和1.0 mg/kg组。每周皮下注射一次药物，持续4周（注射量为10 μL/g体重）。每周记录小鼠体重和空腹血糖（使用血糖仪通过尾静脉采血测定）。研究结束时，用异氟烷麻醉小鼠，经眼眶静脉丛采血，使用小鼠糖化血红蛋白（HbA₁c）检测试剂盒测定HbA₁c水平。在第 3 周，使用间接测热系统（记录 O₂ 消耗量和 CO₂ 生成量）测量 24 小时的能量消耗。收集附睾白色脂肪组织，用 4% 多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，并用苏木精-伊红 (HE) 染色，以分析脂肪细胞大小 [3]
2. 1b 期临床试验方案（中国 2 型糖尿病患者）：共 68 例患者（年龄 18-65 岁，HbA₁c 7.0%-10.0%，BMI 22-35 kg/m²）随机分为 5 组（1:1:1:1:1 比例）：赋形剂组、IBI-362 0.5 mg 组、1.0 mg 组、1.5 mg 组和 2.0 mg 组。该药物通过皮下注射（腹部、大腿或上臂）给药，每周一次，持续12周。患者被告知每次注射前禁食≥8小时，并在基线、第4周、第8周和第12周采集血样，以测量糖化血红蛋白（HbA₁c，采用高效液相色谱法）、空腹血糖（FPG，采用葡萄糖氧化酶法）和餐后2小时血糖（75克口服葡萄糖耐量试验后）。每次就诊时均测量体重和生命体征（血压、心率）。研究期间记录不良事件[2]

在中国 2 型糖尿病患者（每剂量组 n=13）皮下注射 IBI-362（0.5-2.0 mg，每周一次）后：（1）血浆峰浓度（Cₘₐₓ）：2.0 mg 组的 Cₘₐₓ 为 32.6 ng/mL（在第 12 周达到，稳态）；（2）达峰时间（Tₘₐₓ）：每次注射后 12-24 小时；（3）稳态浓度-时间曲线下面积（AUC₀₋₁₆₈ₕ）：2.0 mg 组的 AUC₀₋₁₆₈ₕ 为 1850 ng·h/mL； （4）消除半衰期（t₁/₂）：~72 小时（稳态）；（5）清除率（CL/F）：2.0 mg 组为 1.05 L/h；（6）分布容积（Vd/F）：2.0 mg 组为 105 L。第 8 周后未观察到药物蓄积[2]
- 在 db/db 小鼠皮下注射 IBI-362 (1.0 mg/kg) 后：（1）Cₘₐₓ：85.3 ng/mL (Tₘₐₓ=6 小时)；（2）t₁/₂：~48 小时；（3）AUC₀₋₁₂₀ₕ：3200 ng·h/mL。该药物主要分布于肝脏（24 小时浓度为 12.5 ng/g）和脂肪组织（24 小时浓度为 8.3 ng/g），脑组织浓度较低（24 小时浓度 <0.5 ng/g）[3]

在1b期临床试验（中国患者）中：最常见的治疗相关不良事件（TRAE）为胃肠道反应，包括恶心（发生率：2.0 mg组38.5%，1.5 mg组23.1%，安慰剂组7.7%）、腹泻（2.0 mg组23.1%，1.5 mg组15.4%，安慰剂组0%）和呕吐（2.0 mg组7.7%，其他组<5%）。所有TRAE均为轻度至中度（1-2级），无需干预即可缓解。未报告严重不良事件（3-4级）或严重不良事件。基线至第 12 周期间，肝功能（ALT、AST）、肾功能（Scr、BUN）或血脂水平（TC、TG、LDL-C、HDL-C）均未观察到显著变化[2]
- 在 db/db 小鼠皮下注射 IBI-362（每周一次，剂量高达 1.0 mg/kg）4 周后：未观察到明显的毒性反应（例如，体重减轻超过 10%、行为异常、器官肥大/萎缩）。主要器官（肝脏、肾脏、胰腺、心脏）的组织病理学检查未发现药物相关病变。与载体组相比，血清ALT、AST、Scr或BUN水平未见显著变化[3]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中，IBI-362的蛋白结合率为89.2%（采用超滤法测定），在小鼠血浆中为85.7%[2][3]

[1]. The Design and Optimization of Monomeric Multitarget Peptides for the Treatment of Multifactorial Diseases. J Med Chem. 2022 Mar 10;65(5):3685-3705.

[2]. A phase 1b randomised controlled trial of a glucagon-like peptide-1 and glucagon receptor dual agonist IBI362 (LY3305677) in Chinese patients with type 2 diabetes. Nat Commun. 2022 Jun 24;13(1):3613.

[3]. 682-P: novel dual glucagon and glucagon-like peptide-1 receptor agonist LY3305677 improves glucose control, reduces body weight, and increases energy expenditure in mice. Diabetes, 2021, 70(Supplement_1).

1. IBI-362（马杜肽；LY-3305677）是一种单体双重激动剂，可同时激动GLP-1R和GCGR受体。该药物通过优化肽序列设计，平衡了两种受体的激活——GLP-1R介导葡萄糖依赖性胰岛素分泌和饱腹感，而GCGR介导能量消耗增加和糖原分解（由于葡萄糖依赖性调节，不会导致过度高血糖）。这种设计克服了单一GLP-1R激动剂（例如，体重减轻有限）和单一GCGR激动剂（例如，高血糖风险）的局限性[1]。2. 1b期临床试验表明，IBI-362在中国2型糖尿病患者中具有良好的疗效和安全性，每周一次≥1.5 mg的剂量可显著降低HbA1c、空腹血糖和体重。该药物的半衰期较长（约72小时），支持每周一次给药，从而提高患者的依从性[2]
3. 在db/db小鼠中，IBI-362不仅通过增加胰岛素分泌和抑制胰高血糖素分泌来改善血糖控制，而且还通过增强胰岛素敏感性来改善血糖控制（通过胰岛素耐量试验测定：与载体组相比，1.0 mg/kg组的葡萄糖AUC₀₋₶₀ₘᵢₙ降低了30%）。体重减轻与食物摄入量减少（1.0 mg/kg组的每日食物摄入量减少了15%）和能量消耗增加有关[3]

C210H322N46O67.XC2HF3O2

4563.06 (free base)

4475.295

Mazdutide;2259884-03-0

His-{Aib}-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-{AEEA-AEEA-γGlu-Nonadecanoic acid}-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-NH2

Typically exists as solid at room temperature

1750

XRBYWQZGSZWYEJ-HMQIFOERSA-N

InChI=1S/C207H317N45O65/c1-116(2)93-144(189(295)230-138(70-76-168(271)272)179(285)221-107-162(264)219-109-166(268)252-86-46-57-157(252)201(307)245-154(110-253)181(287)220-106-159(213)261)234-190(296)145(94-117(3)4)236-194(300)151(100-127-104-218-133-52-37-36-51-131(127)133)240-188(294)142(73-79-171(277)278)233-202(308)174(119(7)8)249-197(303)149(96-123-47-30-28-31-48-123)238-187(293)141(72-78-170(275)276)231-183(289)135(56-41-45-83-215-164(266)113-316-91-90-315-88-85-217-165(267)114-317-92-89-314-87-84-216-160(262)75-69-143(205(311)312)225-161(263)58-34-26-24-22-20-18-16-14-15-17-19-21-23-25-27-35-59-167(269)270)226-177(283)120(9)224-182(288)134(53-38-42-80-208)227-184(290)136(54-39-43-81-209)228-186(292)140(71-77-169(273)274)232-195(301)152(102-172(279)280)241-191(297)146(95-118(5)6)235-192(298)147(98-125-60-64-129(258)65-61-125)237-185(291)137(55-40-44-82-210)229-199(305)155(111-254)244-193(299)148(99-126-62-66-130(259)67-63-126)239-196(302)153(103-173(281)282)242-200(306)156(112-255)246-204(310)176(122(11)257)250-198(304)150(97-124-49-32-29-33-50-124)243-203(309)175(121(10)256)248-163(265)108-222-180(286)139(68-74-158(212)260)247-206(313)207(12,13)251-178(284)132(211)101-128-105-214-115-223-128/h28-33,36-37,47-52,60-67,104-105,115-122,132,134-157,174-176,218,253-259H,14-27,34-35,38-46,53-59,68-103,106-114,208-211H2,1-13H3,(H2,212,260)(H2,213,261)(H,214,223)(H,215,266)(H,216,262)(H,217,267)(H,219,264)(H,220,287)(H,221,285)(H,222,286)(H,224,288)(H,225,263)(H,226,283)(H,227,290)(H,228,292)(H,229,305)(H,230,295)(H,231,289)(H,232,301)(H,233,308)(H,234,296)(H,235,298)(H,236,300)(H,237,291)(H,238,293)(H,239,302)(H,240,294)(H,241,297)(H,242,306)(H,243,309)(H,244,299)(H,245,307)(H,246,310)(H,247,313)(H,248,265)(H,249,303)(H,250,304)(H,251,284)(H,269,270)(H,271,272)(H,273,274)(H,275,276)(H,277,278)(H,279,280)(H,281,282)(H,311,312)/t120-,121+,122+,132-,134-,135-,136-,137-,138-,139-,140-,141-,142-,143-,144-,145-,146-,147-,148-,149-,150-,151-,152-,153-,154-,155-,156-,157-,174-,175-,176-/m0/s1

20-[[(1S)-4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(5S)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[2-[[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-2-methylpropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]propanoyl]amino]-6-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-6-oxohexyl]amino]-2-oxoethoxy]ethoxy]ethylamino]-2-oxoethoxy]ethoxy]ethylamino]-1-carboxy-4-oxobutyl]amino]-20-oxoicosanoic acid TFA salt

Mazdutide TFA; IBI362 TFA; 2259884-03-0; GTPL13924 TFA; IBI-362 TFA; compound 1 [US9938335B2];

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。