MC0704

STAT3

MC0704（0–50 μM；72 h）具有细胞毒性，针对 HEK-293、肺上皮细胞 (MRC-5)、MDA-MB 231、MDA-MB 的 IC50 值为 3.11、33.25、2.98、3.24 和 2.87 μM -231 紫杉醇耐药 (MDA–MB-231-PTR) 和 MDA–MB–231 多西紫杉醇耐药 (MDA–MB-231-DTR) [1]。 STAT3 活性被 MC0704（0、0.4、2、10 和 50 μM；24 小时）抑制，IC50 值为 2.13 μM [1]。 MC0704（5 μM；24 小时）可防止 STAT3 被激活 [1]。 MC0704（0、2.5、5 和 10 μM；36-48 小时）会导致细胞凋亡并增强 MDA-MB-231-DTR 细胞在 G2/M 期的细胞周期停滞 [1]。

在移植 MDA-MB-231-DTR 细胞的小鼠中，MC0704（10 mg/kg，腹腔注射，每天一次，持续 12 天）抑制肿瘤生长 [1]。

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MC0704在植入MDA-MB-231-DTR细胞的裸鼠异种移植物模型中的抗肿瘤活性[1]
在MDA-MB-231-DTR细胞植入裸鼠异种移植物模型中评估了MC0704的体内抗肿瘤活性。当肿瘤体积达到约100 mm3时，每天腹膜内治疗载体（DMSO/cremophor/生理盐水=10:10:80）、多西他赛（5 mg/kg体重）、紫杉醇（5 mg/kg重量）、MC0704（10 mg/kg体重）或多西他赛和MC0704>的组合（10 mg/kg重量），持续12天。在实验期间，每2天测量一次肿瘤体积和体重变化。先前的研究报道，多西他赛或紫杉醇在MDA-MB-231细胞植入的小鼠模型中有效抑制肿瘤生长。然而，在本研究中，多西他赛和紫杉醇在MDA-MB-231-DTR细胞植入模型中的抗肿瘤活性可以忽略不计。这些数据表明，在肿瘤形成过程中，对多西他赛的获得性耐药性仍然存在，紫杉醇（一种紫杉烷类化合物）发生了交叉耐药性。然而，用MC0704（10mg/kg）治疗显著抑制了肿瘤生长，没有任何明显的毒性（图9A）。实验最后一天的肿瘤重量也通过MC0704治疗而减轻。此外，与体外联合抗增殖作用一致，与单独使用多西他赛或MC704相比，多西他赛和MC0704的联合治疗显示出显著增强的抗肿瘤活性（肿瘤体积和肿瘤重量）（图9A-C）。此外，肿瘤组织的免疫组织化学分析显示，与亲本MDA-MB-231细胞植入的肿瘤组织相比，p-STAT3（活化的STAT3）、Ki-67（一种众所周知的增殖标志物）和波形蛋白（一种间充质标志物）显著上调，但E-cadherin（一种上皮标志物）在耐药MDA-MB-231-DTR细胞植入的瘤组织中的表达下调。在MDA-MB-231-DTR细胞植入的肿瘤组织中，MC0704治疗有效地逆转了这些生物标志物蛋白的表达。

人磷酸激酶阵列[1]
MDA-MB-231-DTR细胞用10μM的MC0704处理24小时，并根据制造商的方案使用人磷酸激酶阵列试剂盒测定蛋白质表达水平。

细胞毒性测定[1]
细胞类型： HEK-293 和 MRC-5 细胞系
测试浓度： 0-50 μM
孵育持续时间：72 小时
实验结果：证明对 HEK-293 和 MRC-5 细胞具有细胞毒性。

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蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： MDA-MB-231 TNBC 细胞系
测试浓度： 5 μM
孵育时间：24小时
实验结果：抑制p-STAT3的表达。

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细胞周期分析[1]
使用流式细胞术测量细胞周期动力学。MDA-MB-231-DTR细胞在无血清培养基中培养24小时进行同步化。同步后，细胞在完全培养基中用载体（DMSO）或MC0704处理指定时间。孵育后，收集所有贴壁和漂浮细胞，用PBS洗涤两次，随后在-20°C的70%冷乙醇中固定过夜。用冷PBS洗涤固定的细胞，并将其重新悬浮在摇床中的100μg/mL RNase A中30分钟。然后在黑暗中用50μg/mL PI对细胞进行染色。然后对荧光激活的细胞进行分选，并使用流式细胞仪分析细胞DNA含量。使用CellQuest 3.0.1软件计算数据，并将细胞周期每个阶段的细胞分布显示为直方图。

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凋亡检测法（Annexin V-异硫氰酸荧光素和PI双重染色）[1]
MDA-MB-231-DTR细胞在完全培养基中用MC0704处理48小时，然后根据制造商的建议，使用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒用Annexin V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和PI染色。简而言之，收获孵育的细胞，在冷PBS中洗涤两次，重新悬浮在1倍结合缓冲液中，并在黑暗中用Annexin V-FITC和PI处理15分钟。将染色的细胞重新悬浮在一倍结合缓冲溶液中，并立即使用流式细胞仪进行分析。

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Transwell细胞侵袭试验[1]
简而言之，24孔Transwell膜插入物（直径6.5 mm；孔径8μm）用10μL I型胶原（0.5 mg/mL）和20μL 1:20的Matrigel PBS混合物涂覆。用MC0704处理24小时后，收获MDA-MB-231人TNBC细胞（亲本或多西他赛抗性），重新悬浮在无血清培养基中，并在Matrigel涂覆的Transwell插入物的上室中铺板（3×105个细胞/室）。含有30%FBS的培养基用作下腔室的化学引诱剂。孵育24小时后，将侵入下腔室外表面的细胞固定，使用Diff-Quik染色试剂盒进行染色，并使用Vectra 3.0自动定量病理成像系统进行成像。对来自三个单独实验的代表性图像进行了评估，并使用ImageJ 1.52a软件对侵袭细胞的数量进行了半定量。

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细胞迁移试验（伤口愈合试验）[1]
MDA-MB-231人TNBC细胞（亲本或多西他赛抗性）在六孔板中生长至90%融合。随后，使用SPL Scar Scratcher对细胞单层进行人工损伤，用PBS洗涤后取出分离的细胞。然后将受伤的细胞培养物与含有1%FBS和不同浓度MC0704的培养基一起孵育24小时。在倒置显微镜下于0和24小时拍摄伤口照片。使用ImageJ 1.52a软件量化伤口面积，并以0小时时相对于伤口面积的细胞迁移百分比（%）表示。

Animal/Disease Models: Female BALB/c-nu (nude) mice with MDA-MB-231-DTR cells transplant[1]
Doses: 10 mg/kg
Route of Administration: intraperitoneal (ip)injection; 10 mg/kg, one time/day for 12 days
Experimental Results: Dramatically inhibited tumor growth without overt toxicity, and reversed the mesenchymal marker vimentin and epithelial marker E-cadherin expression changes.

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In Vivo Tumor Xenograft Model [1]
Female nude mice (BALB/c-nu, aged 5–6 weeks, and weighing 18 g) were housed under pathogen-free conditions with a 12 h light–dark schedule. MDA-MB-231 or MDA-MB-231-DTR cells were injected subcutaneously into the flanks of mice (4 × 106 cells in 200 μL of PBS), and tumors were allowed to grow for 10 days until the tumor volume reached approximately 100 mm3. The mice were randomized into vehicle control and treatment groups (n = 6). Vehicle control (DMSO/cremophor/normal saline = 10:10:80), docetaxel (5 mg/kg body weight), paclitaxel (5 mg/kg body weight), MC0704 (10 mg/kg body weight), or a combination of docetaxel (5 mg/kg body weight) and MC0704 (10 mg/kg body weight) was administered intraperitoneally (i.p.) daily for 12 days, and mice were euthanized 3 days later. Tumors were excised, weighed, and frozen for biochemical analysis. Tumor volume was measured using an electronic caliper according to the following formula: tumor volume (mm3) = 3.14 × length × width × height/6. Toxicity was evaluated based on body weight loss.

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Ex Vivo Immunohistochemical Analysis 1]
Tumor tissues fixed in 10% neutral buffered formalin solution were embedded in paraffin, sectioned, mounted onto slides, deparaffinized with xylene, rehydrated with an ethanol series, and subjected to antigen retrieval. The slides were incubated with the indicated antibodies, which were detected using the LSAB2 System-HRP kit. Stained sections were observed and imaged using the Vectra 3.0 Automated Quantitative Pathology Imaging System

[1]. Design, Synthesis, and Biological Activity of Marinacarboline Analogues as STAT3 Pathway Inhibitors for Docetaxel-Resistant Triple-Negative Breast Cancer. J Med Chem. 2023 Feb 23;66(4):3106-3133.

Metastatic triple-negative breast cancer (mTNBC) is a fatal type of breast cancer (BC), and signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) has emerged as an effective target for mTNBC. In the present study, compound MC0704 was found to be a novel synthetic STAT3 pathway inhibitor, and its potential antitumor activity was demonstrated using in vitro and in vivo models in docetaxel-resistant TNBC cells. Based on marinacarboline (MC), a series β-carboline derivatives were synthesized and investigated for their antitumor activities against docetaxel-resistant MDA-MB-231 (MDA-MB-231-DTR) cells. Combining antiproliferation and STAT3 inhibitory activities, MC0704 was selected as the most promising β-carboline compound. MC0704 effectively impeded the metastatic potential of MDA-MB-231-DTR cells in vitro, and the combination of MC0704 and docetaxel exhibited potent antitumor activities in a xenograft mouse model. These findings suggested that MC0704 can be a lead candidate as a target therapeutic agent for TNBC patients with docetaxel resistance. [1]

C29H21BRN4O2

537.41

536.0847

C, 64.81; H, 3.94; Br, 14.87; N, 10.43; O, 5.95

3034176-57-0

Typically exists as solid at room temperature

6.4

90.6Ų

3

3

6

36

802

0

C1=CC=C2C(=C1)C3=CC(=NC(=C3N2)C(=O)C4=CC=C(C=C4)Br)C(=O)NCCC5=CNC6=CC=CC=C65

DLOFNWDJTXTZPF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H21BrN4O2/c30-19-11-9-17(10-12-19)28(35)27-26-22(21-6-2-4-8-24(21)33-26)15-25(34-27)29(36)31-14-13-18-16-32-23-7-3-1-5-20(18)23/h1-12,15-16,32-33H,13-14H2,(H,31,36)

1-(4-bromobenzoyl)-N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-9H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxamide

MC0704; MC 7404; 74V87G4R62; MC-0704; 1-(4-bromobenzoyl)-N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-9H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxamide;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。