| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Nucleobase-modified nucleotide for synthesis of mRNA
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| 体外研究 (In Vitro) |
信使RNA作为一种治疗方式，在基因治疗领域越来越受欢迎。核碱基修饰可以通过降低免疫原性和增加RNA分子的稳定性来大大增强mRNA的性质（Kariko范式），这一认识对于这场革命至关重要。在这里，研究人员发现，单独含有N（1）-甲基假尿苷（m1Ψ）修饰和/或与5-甲基胞苷（m5C）结合的mRNAs在转染到细胞系或小鼠中时，分别提供高达~44倍（当比较双修饰mRNAs时）或~13倍（当比较单修饰mRNA斯时）的报告基因表达，优于目前最先进的假尿苷和/或m5C/Ψ修饰的mRNA平台。研究人员表明，与经（m5C/）Ψ修饰的mRNA相比，经（m5C/）m1Ψ修饰过的mRNA在体外转染后导致细胞内先天免疫原性降低，细胞存活率提高。（m5C/）m1Ψ修饰的mRNA表达蛋白质的能力增强，可能至少部分是由于mRNA逃避内体Toll样受体3（TLR3）激活和下游先天免疫信号传导的能力增强。据信，这里提出的（m5C/）m1Ψ-mRNA平台可以作为修饰mRNA治疗领域的新标准[1]。
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| 酶活实验 |
体外mRNA脂质体转染和萤火虫荧光素酶检测[1]
在Opti-MEM I中，mRNA与Lipo 2 K以1:2的比例混合（μg mRNA:μl Lipo 2 K）。在室温下使复合物形成30分钟。如前所述，使用Zetasizer Nano ZS通过动态光散射和激光多普勒电泳测定RNA/脂质复合物的平均流体动力学尺寸和ζ电位。通过向预先接种在24孔板中的细胞中加入1μg复合mRNA进行转染。4小时后，将复合物与Opti-MEM I一起移除，并用ATCC推荐的含血清的培养基替换。转染后24小时，用100μl 1×被动裂解缓冲液裂解细胞，并根据制造商的方案用萤光素酶检测试剂盒测量萤火虫萤光素酶活性。使用GloMax光度计测量生物发光。 酶联免疫吸附试验（ELISA）[1] 除非另有说明，否则在用mRNA转染后24小时收集细胞培养上清液，并将其储存在-80°C下，直至进行ELISA。人干扰素-β（IFN-β）和趋化因子（C-C基序）配体5（CCL5；也称为RANTES）的ELISA试剂盒分别购自BioLegend和Life Technologies。如前所述，ELISA是根据制造商的建议进行的。 蛋白质浓度测定[1] 使用Pierce™Micro-BCA™蛋白质检测试剂盒测量细胞裂解物的蛋白质浓度。在用被动裂解缓冲液裂解细胞并在水中稀释裂解液（1:10）后，遵循标准制造商的方案。 |
| 细胞实验 |
细胞活性[1]
如上所述，用1μg未修饰或修饰的RNA在24孔板中转染哺乳动物细胞。转染后24小时，根据制造商的方案，使用MTT增殖测定法测量mRNA转染细胞的存活率。 TLR3免疫染色和流式细胞术[1] 用mRNA转染24小时后，收集细胞，用不含钙或镁的磷酸盐缓冲盐水（DPBS，无钙，无镁）洗涤，并在室温下在1 x固定缓冲液中孵育1小时。固定的细胞用1×渗透缓冲液洗涤两次，重新悬浮在1×渗透缓冲剂中，并与藻红蛋白（PE）偶联的抗TLR3抗体在黑暗中孵育30分钟。然后用PBS洗涤细胞两次，以去除任何未结合的抗体，并重新悬浮在PBS中。在BD Accuri™C6流式细胞仪上通过流式细胞术测量荧光信号。使用CFlow Plus Analysis软件对数据进行分析。活细胞根据前/侧散射的面积进行门控，单个细胞根据前散射的宽度进行门控。基于活的单细胞群体计算PE染料（激发激光：488nm，发射滤光片：585/40nm）的平均荧光强度（MFI）。 |
| 动物实验 |
小鼠实验[1]
7周龄Balb/c小鼠饲养于独立通风笼中，光照周期为12:12小时（暗/光）。小鼠可自由摄取食物和水。在皮内（id）或肌肉内（im）注射过程中，使用异氟烷持续麻醉小鼠。将20 μg mRNA与Lipo 2 K以1:1（μg mRNA: μl Lipo 2 K）的比例混合，并重悬于PBS缓冲液中，然后皮内或肌肉注射至胫前肌。 萤火虫荧光素酶表达的体内成像[1] 使用体内生物发光成像系统IVIS Lumina II，测量小鼠体内萤火虫荧光素酶的表达水平，直至注射的mRNA信号达到背景水平。将50 mg/kg的D-荧光素腹腔注射（ip）给小鼠，并在注射后10分钟测量生物发光强度。采集参数设置为：光圈：1，像素合并：8，自动曝光。 |
| 参考文献 |
[1]. Andries O, Mc Cafferty S, De Smedt SC, Weiss R, Sanders NN, Kitada T. N(1)-methylpseudouridine-incorporated mRNA outperforms pseudouridine-incorporated mRNA by providing enhanced protein expression and reduced immunogenicity in mammalian cell lines and mice. J Control Release. 2015;217:337-344.
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| 分子式 |
C10H13LI4N2O15P3
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|---|---|
| 分子量 |
521.90
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| 相关CAS号 |
N1-Methylpseudouridine-5′-triphosphate trisodium;N1-Methylpseudouridine-5′-triphosphate;1428903-59-6
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9161 mL | 9.5804 mL | 19.1608 mL | |
| 5 mM | 0.3832 mL | 1.9161 mL | 3.8322 mL | |
| 10 mM | 0.1916 mL | 0.9580 mL | 1.9161 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
MOMA-341
Morpholino G phosphoramidite
MRL-436
TBIA
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