| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36): Human MLKL (dissociation constant \(K_{d}<10 nM\)) and Cereblon (CRBN); no detectable binding to human RIPK1 and RIPK3 up to 10 μM [1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)在HT29细胞中表现出强效的剂量依赖性MLKL降解活性:降解半数最大浓度(DC₅₀)为2.4 ± 0.5 μM,10 μM时最大降解率(Dmax)超过90%,仅剩余7% ± 3%的MLKL [1]
2. 在TSZ诱导的HT29细胞坏死性凋亡模型中,PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)具有剂量依赖性的抗坏死性凋亡活性,10 μM时可完全保护细胞,EC₅₀为1.2 μM [1] 3. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)在多种人源细胞系中具有MLKL降解活性:在胃癌MKN74细胞和肾上皮HK-2细胞中表现出与HT29细胞相当的降解效果,但在原代角质形成细胞HEK-a和小鼠成纤维细胞NIH-3T3细胞中活性显著减弱 [1] 4. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)在HT29细胞中对MLKL的降解具有时间依赖性:处理后5小时内,MLKL剩余量不足10%,8小时前达到最大降解效果,且低MLKL水平可持续24小时;降解作用最长可维持72小时 [1] 5. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)不影响HT29细胞中RIPK1和RIPK3的蛋白水平,也不调节TSZ诱导的RIPK1和RIPK3磷酸化 [1] 6. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)对MLKL的降解具有蛋白酶体依赖性:与蛋白酶体抑制剂MG-132预孵育可完全抑制其对MLKL的降解 [1] 7. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的抗坏死性凋亡活性可被MLKL配体1和CRBN配体来那度胺拮抗:与这些配体共孵育会降低Compound 36的MLKL降解能力和抗坏死性凋亡活性,而配体本身对MLKL水平和细胞保护无作用 [1] 8. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)对MLKL的降解程度与其抗坏死性凋亡功效之间呈近似线性相关 [1] |
| 酶活实验 |
1. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的激酶结合实验:通过激酶结合实验测定化合物对MLKL、RIPK1和RIPK3的解离常数(\(K_{d}\)),评估化合物与靶标激酶的结合亲和力,结果显示其对MLKL具有强效结合(\(K_{d}<10 nM\)),在浓度高达10 μM时对RIPK1和RIPK3无检测到的结合 [1]
2. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的对接实验:导入MLKL的晶体结构(PDB: 5KNJ)并进行预处理,将化合物以SMILES字符串形式导入、能量最小化后,采用“非常精确”的计算方法进行对接。对铰链结合残基Cys-286的羰基氧施加对接约束,以优先考虑包含该关键氢键相互作用的构象,并根据LF Rank Score和LF dG对排名前10的构象进行排序 [1] |
| 细胞实验 |
1. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的MLKL降解及蛋白水平检测实验:将HT29、MKN74、HK-2和HEK-a细胞在处理前24小时接种到相应的孔板中。将化合物稀释在饥饿培养基中,与细胞在37℃、5% CO₂条件下孵育24小时(时间进程实验为指定时间点)。处理后,用含磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物的裂解液裂解细胞30分钟,离心去除不溶性成分。通过BCA法测定裂解液的蛋白浓度,并将样品稀释至相同浓度。使用毛细管免疫测定(JESS系统)结合特异性抗体分析MLKL、RIPK1和RIPK3的水平,结果以相对于载体对照的百分比表示,并归一化至总蛋白信号 [1]
2. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的TSZ诱导坏死性凋亡抑制实验:将HT29细胞以每孔2×10⁴个细胞的密度接种到96孔板中,加入100 μL培养基,在37℃、5% CO₂条件下孵育24小时。将化合物稀释至指定浓度,加入含肿瘤坏死因子-α(20 ng/mL)、SMAC模拟物LCL-161(1 μM)和ZVAD-FMK(20 μM)的饥饿培养基中。吸弃原有培养基,替换为含化合物的培养基或DMSO载体(作为高、低对照)。孵育24小时后,使用细胞活力检测试剂通过ATP定量测定细胞活力。用酶标仪检测发光值,并通过归一化至对照孔计算功效(\(E_{TSZ}\))[1] 3. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的蛋白酶体依赖性验证实验:将HT29细胞用MG-132(3 μM)或DMSO载体预孵育30分钟,然后单独或联合MG-132处理Compound 36(10 μM)。孵育8小时后,裂解细胞,通过毛细管免疫测定检测MLKL水平,验证其降解效果是否依赖蛋白酶体 [1] 4. PROTAC MLKL Degrader-1 (Compound 36)的竞争实验:将HT29细胞单独用Compound 36处理,或与MLKL配体1或CRBN配体来那度胺联合处理。孵育24小时后,通过毛细管免疫测定检测MLKL水平,并进行TSZ诱导的坏死性凋亡实验评估抗坏死性凋亡活性,以验证Compound 36的靶向特异性 [1] |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C46H55F2N9O9S
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|---|---|
| 分子量 |
948.045616388321
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| 精确质量 |
947.38115186
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| CAS号 |
3032600-90-8
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| PubChem CID |
168476062
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
5.5
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| tPSA |
247 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
14
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| 可旋转键数目(RBC) |
19
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| 重原子数目 |
67
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| 分子复杂度/Complexity |
1800
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
COC1C(N2C(=O)NC(=O)CC2)=CC(C(N2CCC3(CCN(C(CCCCCCCOC4C=CC=C(NC5NN=C(C6C=CC(NS(C(F)F)(=O)=O)=CC=6)C=5C(=O)N)C=4)=O)CC3)CC2)=O)=CC=1
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| InChi Key |
XDPRKJSOJYMCMZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C46H55F2N9O9S/c1-65-36-16-13-31(28-35(36)57-22-17-37(58)51-45(57)62)43(61)56-25-20-46(21-26-56)18-23-55(24-19-46)38(59)10-5-3-2-4-6-27-66-34-9-7-8-33(29-34)50-42-39(41(49)60)40(52-53-42)30-11-14-32(15-12-30)54-67(63,64)44(47)48/h7-9,11-16,28-29,44,54H,2-6,10,17-27H2,1H3,(H2,49,60)(H2,50,52,53)(H,51,58,62)
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| 化学名 |
5-[4-(difluoromethylsulfonylamino)phenyl]-3-[3-[8-[3-[3-(2,4-dioxo-1,3-diazinan-1-yl)-4-methoxybenzoyl]-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-9-yl]-8-oxooctoxy]anilino]-1H-pyrazole-4-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (105.5 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0548 mL | 5.2740 mL | 10.5480 mL | |
| 5 mM | 0.2110 mL | 1.0548 mL | 2.1096 mL | |
| 10 mM | 0.1055 mL | 0.5274 mL | 1.0548 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。