Br-PEG4-THP

目录号: V82369 纯度: ≥98%
Br-PEG4-THP 是聚乙二醇 (PEG) 类别的 PROTAC(蛋白水解靶向嵌合体)接头,可用于制备 PROTAC 蛋白降解剂。
Br-PEG4-THP CAS号: 1803547-60-5
产品类别: E3 Ligase Ligand-Linker Conjugates
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
100mg
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产品描述
Br-PEG4-THP 是一种聚乙二醇 (PEG) 类 PROTAC (蛋白水解靶向嵌合体) 连接剂,可用于制备 PROTAC 蛋白降解剂。
Br-PEG4-THP(CAS号:1803547-60-5)是一种基于聚乙二醇(PEG)的PROTAC连接子,其结构包含一个四乙二醇(PEG4)间隔基,该间隔基末端带有溴(Br)基团和一个四氢吡喃基(THP)保护的羟基。这种异双功能连接子用于PROTAC(蛋白水解靶向嵌合体)蛋白降解剂的合成,能够连接E3泛素连接酶配体和靶蛋白配体。
生物活性&实验参考方法
靶点
PEGs
No direct pharmacological target; functions as a PEG-based PROTAC linker. The bromo group serves as an alkylating handle for nucleophilic substitution (SN2) reactions, enabling conjugation to thiols, amines, or hydroxyl groups on ligands. The THP (tetrahydropyranyl) group is an acid-labile protecting group for hydroxyl functionalities.
体外研究 (In Vitro)
其中一个配体与E3泛素连接酶结合,另一个配体与靶蛋白结合;这两个配体通过连接子连接形成PROTAC。PROTAC利用细胞内泛素-蛋白酶体系统特异性地降解靶蛋白[1]。
作为PROTAC连接子,Br-PEG4-THP本身不具有直接的生物活性;其活性只有在整合到完整的PROTAC分子中时才能实现。PROTAC包含两个不同的配体,这两个配体通过连接子连接;一个配体与E3泛素连接酶(例如cereblon或VHL)结合,另一个配体与目标蛋白结合。PROTAC与这两个蛋白结合后,目标蛋白被泛素化,随后被蛋白酶体降解。PEG4间隔臂提供了灵活性、水溶性和最佳长度(末端距离约为16-18埃),这通常是实现E3连接酶和目标蛋白之间正确空间取向的理想条件,从而实现高效的三元复合物形成和泛素化。
体内研究 (In Vivo)
无直接体内活性。当引入PROTAC分子中时,PEG4连接子会影响PROTAC的体内药代动力学性质。与纯烷基连接子相比,PEG连接子可提高水溶性、减少聚集、降低免疫原性,并通常延长血浆循环半衰期。由于其在柔性、极性和空间位阻特性方面具有最佳平衡,PEG4间隔基是PROTAC开发中最常用的PEG连接子之一。一些处于临床阶段的PROTAC采用了基于PEG4的连接子。
酶活实验
无特定检测方法;连接剂评价包括表征其结构(通过核磁共振和质谱)、纯度(通过高效液相色谱法测定≥95-98%)和反应活性(溴原子完整度应>95%以确保有效偶联)。标准质量控制参数:分子量(341.24 g/mol)、分子式(C13H2₅BrO₅)、外观(室温下为淡黄色油状物或固体)和沸点(402.2 +/- 45.0℃)。
细胞实验
(1) 直接细胞实验:无需处理;连接子本身不具有生物活性。(2) PROTAC 细胞实验:用以 Br-PEG4-THP 为连接子合成的完整 PROTAC 处理细胞(0.1-1000 nM,4-24 小时)。(3) 裂解细胞,进行 SDS-PAGE 电泳,并用针对靶蛋白(例如 BRD4、AR、ER、BTK 等)的抗体进行 Western blot 分析。(4) 通过密度分析定量降解,并以内参(GAPDH 或 β-肌动蛋白)进行标准化。(5) 使用非线性回归评估 DC50(50% 降解浓度)和 Dmax(最大降解浓度)。(6) 通过 CCK-8 或 MTT 法评估细胞毒性,处理时间为 48-72 小时。
动物实验
含有PEG4连接子的PROTAC分子通常在小鼠异种移植模型中进行测试:(1) 使用6-8周龄的雌性BALB/c裸鼠,其皮下移植有肿瘤异种移植瘤(100-250 mm³)。(2) 静脉注射(尾静脉)、腹腔注射或口服PROTAC(1-50 mg/kg,每日或隔日一次,持续2-4周)。(3) 制剂:10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水(用于腹腔注射/静脉注射)或0.5%甲基纤维素+0.2% Tween-80(用于口服)。(4) 每周两次监测肿瘤体积(使用卡尺)和体重。(5) 在末次给药后4-24小时收集肿瘤组织;进行Western blot分析以检测靶蛋白降解情况。(6) 通过LC-MS/MS测定血浆和肿瘤组织中PROTAC的浓度。 (7)进行 Ki-67、cleaved caspase-3 的 TUNEL 和 IHC 检测。
药代性质 (ADME/PK)
作为连接子,它有助于共轭PROTAC的药代动力学。PEG4间隔基可提高水溶性并减少聚集。连接子的标准操作规程:储存于2-8℃(长期储存可储存于-20℃)。溶解性:可溶于有机溶剂(DMSO、DMF、DCM、THF、氯仿),中等溶于水。对于含有PEG4连接子的PROTAC:通常具有中等清除率(CL ~ 10-30 mL/min/kg)、中等分布容积(Vd ~ 1-3 L/kg)、半衰期(t1/2)~ 2-6 h(静脉注射),口服生物利用度约为10-40%,具体取决于靶蛋白配体。THP保护基可在弱酸性条件下去除(例如,在乙醇或甲醇中使用对甲苯磺酸吡啶鎓(PPTS),或在THF中使用0.1 M HCl)。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
连接子本身通常无毒,但当其被整合到完整的PROTAC分子中时,需评估其细胞毒性。体外实验:使用连接子单独对HEK293细胞进行CCK-8检测(IC50 > 200 μM)。溴原子具有反应活性,如果未正确偶联,则可烷基化生物亲核试剂;但当按设计使用时(在连接子合成过程中被消耗),最终的PROTAC分子中不含游离的溴原子。单独使用连接子无体内毒性。对于含有该连接子的完整PROTAC分子,需在啮齿动物中进行最大耐受剂量(MTD)研究(通常为10-100 mg/kg,腹腔注射,每日一次,持续14天)。监测体重、临床症状和临床化学指标(ALT、AST、BUN、肌酐)。本产品仅供研究使用,不得用于人体。
参考文献
[1]. An S, et al. Small-molecule PROTACs: An emerging and promising approach for the development of targeted therapy drugs. EBioMedicine. 2018 Oct;36:553-562
其他信息
Br-PEG4-THP 是一种基于 PEG 的 PROTAC 连接剂,可用于合成一系列 PROTAC。其主要特点包括:(1) 末端溴原子提供了一个高反应活性的烷基化基团,可通过 SN2 亲核取代反应与含硫醇、胺或羟基的配体偶联;(2) PEG4 间隔基具有最佳的柔性、长度(16-18 埃)和亲水性,适用于 PROTAC 的设计;(3) THP(四氢吡喃基)基团是一种酸不稳定的羟基保护基,可实现顺序脱保护和偶联策略。本产品仅供研究使用,不得用于人体治疗或诊断,且未获得 FDA 或 EMA 的批准。它常用于学术和工业药物化学实验室,用于开发靶向蛋白质降解疗法。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C13H25BRO5
分子量
341.2386
精确质量
340.088
CAS号
1803547-60-5
PubChem CID
156597089
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
LogP
1.3
tPSA
46.2
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
12
重原子数目
19
分子复杂度/Complexity
194
定义原子立体中心数目
0
SMILES
BrC([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])OC1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])O1
InChi Key
PITHQIWYWBVVCG-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C13H25BrO5/c14-4-6-15-7-8-16-9-10-17-11-12-19-13-3-1-2-5-18-13/h13H,1-12H2
化学名
2-[2-[2-[2-(2-bromoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]oxane
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.9305 mL 14.6524 mL 29.3049 mL
5 mM 0.5861 mL 2.9305 mL 5.8610 mL
10 mM 0.2930 mL 1.4652 mL 2.9305 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们