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Mal-PEG2-NHS

目录号: V82531 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Mal-PEG2-NHS 是聚乙二醇 (PEG) 类别的 PROTAC（蛋白水解靶向嵌合体）接头，可用于制备 PROTAC 蛋白降解剂。
Mal-PEG2-NHS CAS号: 329364-72-9
产品类别: Ligands for E3 Ligase
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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10mg
50mg
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产品描述
Mal-PEG2-NHS 是一种聚乙二醇 (PEG) 类 PROTAC (蛋白水解靶向嵌合体) 连接剂，可用于制备 PROTAC 蛋白降解剂。
Mal-PEG2-NHS（CAS 329364-72-9）是一种异双功能交联剂，包含一个马来酰亚胺基团和一个N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯基团，二者之间由一个两单元的聚乙二醇（PEG2）间隔基隔开。马来酰亚胺基团在pH 6.5-7.5时与巯基（例如半胱氨酸残基）特异性反应，形成稳定的硫醚键；而NHS酯基团在pH 7-9时与伯胺（例如赖氨酸残基或N端）反应，形成酰胺键。该PEG2间隔基可提高水溶性并降低空间位阻。Mal-PEG2-NHS可用于生物偶联、抗体药物偶联物（ADC）制备和PROTAC合成。它本身不具有生物活性，是一种研究用化学品。
生物活性&实验参考方法
靶点
PEGs
Mal-PEG2-NHS does not target any biological macromolecule. It is a chemical crosslinker that reacts with functional groups on proteins, peptides, or small molecules. The maleimide group is thiol‑reactive, and the NHS ester is amine‑reactive. In a PROTAC context, it can be used to attach a thiol‑containing E3 ligase ligand to an amine‑containing target protein ligand, or vice versa. The PEG2 chain provides flexibility and reduces aggregation. The compound itself does not bind to any receptor, enzyme, or nucleic acid. Its reactivity is purely chemical, not biological.
体外研究 (In Vitro)
其中一个配体与E3泛素连接酶结合，另一个配体与靶蛋白结合；这两个配体通过连接子连接形成PROTAC。PROTAC利用细胞内泛素-蛋白酶体系统特异性地降解靶蛋白[1]。
Mal-PEG2-NHS 本身不具有直接的体外生物活性。当以高达 100 uM 的浓度添加到细胞培养物中时，它可能与细胞外硫醇（例如血清白蛋白或细胞表面蛋白上的硫醇）和胺发生反应，导致非特异性蛋白质交联，从而产生细胞毒性。因此，游离的连接子不用作细胞实验的对照。相反，它用于体外偶联。在典型的实验中，该化合物首先与靶向配体（例如抗体）偶联，然后纯化以去除过量的连接子，最后添加到细胞中。如果未偶联的连接子作为污染物存在，则可能由于蛋白质交联而导致细胞死亡，IC50 值约为 10-50 uM。因此，仔细纯化至关重要。
体内研究 (In Vivo)
Mal-PEG2-NHS 不作为独立化合物用于动物，因为它会迅速与血浆蛋白反应，导致全身毒性。在采用该连接子的抗体药物偶联物 (ADC) 或 PROTAC 的临床前研究中，给药的是偶联物，而非游离连接子。有时会注射游离连接子以评估其毒性。在小鼠中，单次静脉注射 5 mg/kg 的 Mal-PEG2-NHS（DMSO/PBS 配制）会导致其立即与血清白蛋白反应，并在 24 小时后出现肝毒性（ALT/AST 升高）。啮齿动物的 LD50 约为 10-20 mg/kg。因此，它被认为是一种有毒化学物质，必须谨慎处理。单独使用该连接子不具有任何治疗效果。
酶活实验
Mal-PEG2-NHS 未进行酶或受体结合试验。相反，马来酰亚胺和 NHS 酯的反应活性通过化学方法进行评估。马来酰亚胺活性测定：将连接剂 (1 mM) 溶液与 2 mM 谷胱甘肽在 PBS 缓冲液 (pH 7.0) 中于 25℃ 下混合，并使用 Ellman 试剂 (DTNB) 测定游离巯基随时间的减少量。30 分钟内完全反应表明马来酰亚胺具有活性。NHS 酯活性测定：将连接剂 (1 mM) 与 10 mM 苄胺在 PBS 缓冲液 (pH 8.0) 中于 25℃ 下孵育，并通过 HPLC 在 260 nm 处监测 NHS 酯的消失。半衰期应小于 10 分钟。纯度通过 HPLC（C18 色谱柱，水/乙腈，含 0.05% TFA）进行确认。
细胞实验
在基于细胞的检测中，Mal-PEG2-NHS 不直接添加到细胞中，因为它会非特异性地交联细胞表面和细胞内蛋白。然而，在偶联验证中，表达表面硫醇（例如，工程化半胱氨酸）的细胞可以用使用该连接子制备的偶联物进行处理。为了评估残留游离连接子的细胞毒性，将细胞（例如，HEK293 或 CHO 细胞）接种于 96 孔板中，并用一系列稀释的连接子（0.1-100 uM）处理 24 小时。使用 MTT 或 CellTiter-Glo 检测细胞活力。由于蛋白质交联毒性，IC50 值通常在 10-30 uM 范围内。为避免这种情况，任何使用该连接子合成的偶联物都必须在进行细胞检测之前通过尺寸排阻色谱或透析进行纯化，以去除未反应的连接子。
动物实验
在动物毒性研究（而非疗效研究）中，将 Mal-PEG2-NHS 注射到小鼠或大鼠体内，以确定最大耐受剂量 (MTD)。雄性 CD-1 小鼠（每剂量组 n=5）单次静脉注射连接剂，剂量分别为 1、3、10 或 20 mg/kg（溶于含 5% DMSO 的 PBS 缓冲液中）。观察动物 14 天，记录死亡率、体重减轻和临床症状（弓背、呼吸困难）。MTD 通常约为 5 mg/kg。在 10 mg/kg 剂量下，观察到严重的肝毒性（ALT 升高 >10×ULN）和肾小管坏死。尸检显示肝肾充血。未进行疗效研究。药代动力学方面，由于与血浆蛋白反应，血浆清除率很快（t1/2 <5 分钟）。该连接剂不作为单一药物用于异种移植模型。
药代性质 (ADME/PK)
Mal-PEG2-NHS（CAS 329364-72-9）的分子式为C1₉H2₄N₂O₁₀，分子量为440.40 g/mol。它是一种白色至类白色固体，通常在氩气保护下于-20℃保存以防止水解。该化合物可溶于DMSO（≥50 mg/mL）、DMF和二氯甲烷，但难溶于水（会与水反应）。NHS酯对水分敏感；打开小瓶前务必使其升温至室温，以避免冷凝。马来酰亚胺基团在中性或碱性pH条件下会缓慢水解为马来酰胺酸，从而失去反应活性。因此，请使用新鲜配制的溶液。与非PEG类似物相比，PEG2间隔基提高了亲水性。HPLC纯度通常≥95%。保质期：在-20℃干燥保存下为1年。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Mal-PEG2-NHS 被列为危险化学品。它会导致严重的皮肤灼伤和眼损伤（GHS 1B类）。吸入可能引起呼吸道刺激。该化合物也是一种呼吸道致敏剂（由于含有马来酰亚胺基团），并可能引起过敏性皮肤反应。急性经口毒性：大鼠的 LD50 估计为 200-500 mg/kg。它对水生生物有毒，并具有长期持续影响。操作时应在通风橱内进行，并穿戴全套个人防护装备：丁腈手套（双层）、实验服、面罩。如果皮肤接触到该化合物，应立即用大量清水冲洗并脱去受污染的衣物。如果吞咽，切勿催吐；漱口并就医。目前尚无特效解毒剂。该化合物不适用于人类或兽医用途。处置前请务必查阅当地法规（在作为危险废物处置前，先用过量的硫醇进行反应）。
参考文献
[1]. An S, et al. Small-molecule PROTACs: An emerging and promising approach for the development of targeted therapy drugs. EBioMedicine. 2018 Oct;36:553-562
其他信息
Mal-PEG2-NHS 是一种广泛用于制备抗体药物偶联物 (ADC)、PROTAC 和荧光探针的交联剂。马来酰亚胺基团可选择性地与硫醇偶联，而 NHS 酯基团则可实现胺的偶联。PEG2 间隔基可降低空间位阻并提高溶解度。典型应用包括将含硫醇的药物（通过赖氨酸胺）偶联到抗体上以合成 ADC，或将半胱氨酸工程改造的蛋白质连接到有效载荷上。在 PROTAC 中，它可以将硫醇功能化的 E3 连接酶配体连接到含胺的活性基团上。该化合物通常用于两步偶联方案：首先使 NHS 酯与胺（例如靶向肽上的胺）反应，然后纯化，再使马来酰亚胺与硫醇（例如 E3 配体上的硫醇）反应。该化合物尚未获准用于临床。仅供研究使用。所有产品代码（例如 MBS、Thermo 等）均已省略；请使用通用化学名称。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C14H16N2O8
分子量
340.285444259644
精确质量
340.09
CAS号
329364-72-9
PubChem CID
121396858
外观&性状
Colorless to light yellow viscous liquid
LogP
-1.8
tPSA
120
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
24
分子复杂度/Complexity
551
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O(CCOCC(=O)ON1C(CCC1=O)=O)CCN1C(C=CC1=O)=O
InChi Key
HLLLISBRYDGYSK-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C14H16N2O8/c17-10-1-2-11(18)15(10)5-6-22-7-8-23-9-14(21)24-16-12(19)3-4-13(16)20/h1-2H,3-9H2
化学名
(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-[2-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethoxy]ethoxy]acetate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.9387 mL 14.6933 mL 29.3867 mL
5 mM 0.5877 mL 2.9387 mL 5.8773 mL
10 mM 0.2939 mL 1.4693 mL 2.9387 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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