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Collagenase, Type II

目录号: V83272 纯度: >125CDU/mg
COA 产品数据 产品说明书 SDS
II型胶原酶是一种微生物衍生的基质金属蛋白酶（MMPs）和锌肽酶。
Collagenase, Type II CAS号: 9001-12-1
产品类别: MMP
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
100mg
250mg
500mg
1g
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产品描述
II型胶原酶是一种微生物来源的基质金属蛋白酶（MMP）和锌肽酶。它可以分解C型胶原蛋白1、3、5、7、8、10、纤连蛋白、明胶和聚集蛋白聚糖。
II型胶原酶（CAS 9001-12-1）是一种微生物来源的基质金属蛋白酶（MMP）和锌肽酶。它是一种具有独特能力的酶，能够消化天然和变性胶原蛋白。该产品来源于溶组织梭菌，以透析冻干粉末的形式供应。II型胶原酶用于各种组织的解离。
生物活性&实验参考方法
靶点
Collagenase Type II targets collagen types 1, 3, 5, 7, 8, and 10, as well as fibronectin, gelatin, and aggrecan. It is a member of the matrix metalloproteinase (MMP) family and requires Ca²⁺ and Zn²⁺ for activity. The enzyme specifically acts on protocollagen, breaking it down for further hydrolysis by other proteases.
体外研究 (In Vitro)
II型胶原酶用于制备分离骨、心、肝、甲状腺和唾液腺的原代细胞。
储备液的制备
1. 将1 mL HBSS（含Ca2+和Mg2+的Hank平衡盐溶液）加入100 mg胶原酶中，摇匀至完全溶解，配制成100 mg/mL（即100倍浓缩）的储备液；
2. 使用低蛋白吸附的0.22 μM滤膜进行过滤除菌，立即使用或分装成小份，避光冷冻于-20℃至-5℃；
3. 使用前置于冰上解冻，避免反复冻融。组织和细胞分散常用浓度为0.5-2.5 mg/mL，软骨消化常用浓度为1-2 mg/mL。所需的最佳工作浓度需根据具体的实验条件或参考相关文献确定。
器官/组织的分离
1. 使用无菌手术刀或剪刀将组织切成 3-4 mm 大小的组织块；
2. 用含 Ca2+ 和 Mg2+ 的 HBSS 溶液多次洗涤组织块；
3. 加入足量的含 Ca2+ 和 Mg2+ 的 HBSS 溶液浸没组织块，并加入胶原酶至所需工作浓度；
4. 在 37 °C 下孵育 4-18 小时。使用水平摇床并在消化过程中补充 3 mM CaCl2 可以提高消化效率；
5. 可用不锈钢网或尼龙网筛分分散的细胞，并收集以备后用。向部分解离的组织中加入适量的新鲜胶原酶工作液，并在 37°C 下继续孵育以进一步消化；
6. 用不含胶原酶的 HBSS 缓冲液洗涤收集的细胞数次；
7. 将上述细胞重悬于细胞培养基中，并使用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度；
8. 将细胞接种于细胞培养皿中，并使用合适的细胞培养基进行培养。
器官灌注
1. 在预热至 37°C 的含 Ca2+ 和 Mg2+ 的 HBSS 缓冲液中加入胶原酶，并加入 3 mM CaCl2 有助于提高分离效率；
2. 以优化的速率将胶原酶工作液注入相应的器官；
3. 将上述过程中回收的灌注液通过不锈钢或尼龙网筛过滤，以将解离的细胞或小的组织碎片与较大的组织块分离。未完全分解的组织需要用新鲜的胶原酶工作液在 37°C 下继续孵育。
4. 与上述“器官/组织分离”部分中的步骤 6-8 相同。
在体外，II 型胶原酶用于从骨骼、心脏、肝脏、甲状腺和唾液腺组织中分离细胞。它还用于研究动脉组织中的晚期糖基化终产物 (AGE)，以及分离人类肿瘤、小鼠肾脏、人脑和肺上皮细胞。
体内研究 (In Vivo)
在体内，胶原酶可用于治疗胶原蛋白过度沉积引起的疾病。II型胶原酶与其他胶原酶一样，在组织修复和再生中发挥作用。其在研究和潜在治疗中的应用基于其降解特定类型胶原蛋白的能力。
酶活实验
体外胶原酶II型活性测定包括测量其对胶原蛋白的消化活性。一个酶活性单位定义为在37°C、pH 7.5条件下，5小时内从胶原蛋白中释放1 μmol L-亮氨酸当量所需的酶量。该酶还具有酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性。
细胞实验
体外细胞检测II型胶原酶的方法包括组织解离。将组织与含有Ca²⁺和Mg²⁺的HBSS缓冲液中的酶在37°C下孵育4-18小时。所得细胞悬液经过滤和洗涤后，用于原代培养。
动物实验
II型胶原酶的体内动物研究不如I型胶原酶那样广泛。然而，胶原酶总体上已在动物模型中得到研究，以探讨其对伤口愈合、组织重塑以及胶原蛋白过度沉积相关疾病的影响。该酶在研究中的应用已相当成熟。
药代性质 (ADME/PK)
由于II型胶原酶主要用作研究试剂，因此其药代动力学数据通常不予报道。在组织解离过程中，酶在消化后会被洗去。在治疗应用中，酶是局部给药，并在给药部位发挥作用。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
II型胶原酶的全身毒性较低。该酶的活性需要Ca²⁺，并可被EDTA、EGTA和重金属离子抑制。洗涤剂和六氯环己烷也能降低酶活性。该化合物仅供研究使用，不可用于人体治疗。
参考文献

[1]. Therapeutic applications of collagenase (metalloproteases): A review. Asian Pac J Trop Biomed, 2016, 6(11): 975-981.
其他信息
胶原酶 II 型是一种用于组织解离和原代细胞分离的研究试剂。它特别适合从骨、心脏、肝脏、甲状腺和唾液腺组织中分离细胞。该酶独特的消化原生胶原和变性胶原的能力使其成为细胞生物学研究中的宝贵工具。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
精确质量
812.418
CAS号
9001-12-1
外观&性状
Light yellow to light brown solid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: ≥ 50 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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