Org-24598   中文名称: N-甲基-N-[(3R)-3-苯基-3-[4-(三氟甲基)苯氧基]丙基]甘氨酸

GlyT-1/glycine transporter 1

[3H]CHIBA-3007与大鼠脑膜结合的药理学特征[1]
检测了与大鼠脑膜结合的特异性[3H]CHIBA-3007（1 nM）的药理学抑制作用。发现十种化合物，即去甲基-CHIBA-3007、CHIBA-3007，CHIBA-3008、SSR504734、NFPS/ALX5407、LY2365109、Org-24598、甘氨酸、肌氨酸和ALX1393，可以取代与大鼠脑膜结合的[3H]CHIBA-300七（图3）。CHIBA-3008、CHIBA-3007、NFPS/ALX5407、LY2365109、Org24598、SSR504734和去甲基-CHIBA-3007的Ki值分别为2.2、2.8、4.1、16.2、16.9、24.6和35.9 nM（表1）。内源性物质肌氨酸和甘氨酸与[3H]CHIBA-3007结合的Ki值分别为103.5µM和287.9µM。相比之下，GlyT-2抑制剂ALX1393在[3H]CHIBA-3007结合时的亲和力非常低（851.7nM）（表1）。
八种GlyT-1抑制剂（CHIBA-3007、去甲基CHIBA-3006、NFPS/ALX5407、LY2365109、Org24598、SSR504734、肌氨酸和甘氨酸）阻断[3H]CHIBA-307特异性结合的效力显著（r = 0.943,p<0.0001）与这些抑制剂在相同样品中抑制[14C]甘氨酸摄取的相关性（图4）。此外，还有一个显著的（r = 0.981, p = 0.003) [3H]CHIBA-3007结合抑制效力与[3H]N-甲基-SSR504734结合药物抑制效力之间的相关性（数据来自[31]）（图5）。

[3H]CHIBA-3007结合试验[1]
对[3H]CHIBA-3007与大鼠脑膜的结合进行了测定。将大鼠脑膜悬浮液的等分试样（200µL）一式两份加入到含有[3H]CHIBA-3007和指定浓度的试验药物的反应混合物中，最终体积为0.5mL。在10µM SSR504734（一种强效和选择性的GlyT-1抑制剂）存在的情况下，估计非特异性结合。[3H]CHIBA-3007在室温下结合120分钟，用于平衡饱和和抑制研究。通过使用24通道细胞采集器在用0.5%聚乙烯亚胺预处理的Whatman GF/B玻璃过滤器上快速真空过滤来终止结合反应。用5mL冰冷的测定缓冲液洗涤过滤器3次，并将其放入装有4mL闪烁鸡尾酒的小瓶中。使用液体闪烁计数器测定过滤器捕获的放射性。 为了研究[3H]CHIBA-3007结合的药理学特征，使用了10种化合物：去甲基CHIBA-3006、CHIBA-3008、SSR504734、NFPS/ALX5407、LY2365109、Org24598、甘氨酸、肌氨酸和ALX1393。

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抑制[14C]甘氨酸摄取[1]
通过向HB的200µL大鼠脑膜中添加10µM[14C]甘氨酸来开始[14C]摄取测定。如前所述，在37°C下，对八种化合物（去甲基CHIBA-3007、CHIBA-307、SSR504734、NFPS/ALX5407、LY2365109、Org24598、肌氨酸和甘氨酸）抑制[14C]甘氨酸摄取15分钟。在30µM SSR504734存在的情况下估计非特异性摄取。通过在用0.5%聚乙烯亚胺预处理的Whatman GF/B玻璃过滤器上快速真空过滤来终止[14C]甘氨酸的摄取。用缓冲液清洗过滤器，并使用如上所述的液体闪烁计数器测定过滤器捕获的放射性。

[1].Pharmacological characterization of [³H]CHIBA-3007 binding to glycine transporter 1 in the rat brain. PLoS One. 2011;6(6):e21322.

Glycine transporter-1 (GlyT-1) in glial cells regulates extracellular levels of glycine, which acts as an obligatory co-agonist at the N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors in the brain. In the present study, we developed a novel radioligand, [³H]3-chloro-N-((S)-((R)-1-methylpiperidin-2-yl)(thiophen- 3-yl)methyl)-4- (trifluoromethyl)picolinamide ([³H]CHIBA-3007), for studying GlyT-1 in the brain. The presence of a single saturable high-affinity binding component for [³H]CHIBA-3007 binding to the rat brain membranes was detected. Scatchard analysis revealed an apparent equilibrium dissociation constant (K(d)) of 1.61±0.16 nM and a maximal number of binding sites (B(max)) of 692.8±22.8 fmol/mg protein (mean ± SEM, n = 3). The specific binding of [³H]CHIBA-3007 was inhibited by a number of GlyT-1 inhibitors, such as CHIBA-3007, desmethyl-CHIBA-3007, CHIBA-3008, SSR504734, NFPS/ALX5407, LY2365109 and Org24598, consistent with the pharmacological profiles of GlyT-1 inhibitors. Interestingly, the potency of eight GlyT-1 inhibitors (CHIBA-3007, desmethyl-CHIBA-3007, NFPS/ALX5407, LY2365109, Org24598, SSR504734, sarcosine, and glycine) for blocking in vitro specific binding of [³H]CHIBA-3007 was significantly correlated with the potency of these inhibitors for inhibiting [¹⁴C]glycine uptake in the rat brain membranes. In contrast, the GlyT-2 inhibitor ALX1393 exhibited very weak for [³H]CHIBA-3007 binding. Furthermore, the regional distribution of [³H]CHIBA-3007 binding in the rat brain was similar to the previously reported distribution of GlyT-1. The present findings suggest that [³H]CHIBA-3007 would be a useful new radioligand for studying GlyT-1 in the brain.[1]

C19H20F3NO3

367.36

367.14

C, 62.12; H, 5.49; F, 15.51; N, 3.81; O, 13.07

372198-97-5

5311285

Typically exists as solid at room temperature

1.254

4.232

49.77

1

7

8

26

430

1

CN(CC[C@H](C1=CC=CC=C1)OC2=CC=C(C=C2)C(F)(F)F)CC(=O)O

KZWQAWBTWNPFPW-QGZVFWFLSA-N

InChI=1S/C19H20F3NO3/c1-23(13-18(24)25)12-11-17(14-5-3-2-4-6-14)26-16-9-7-15(8-10-16)19(20,21)22/h2-10,17H,11-13H2,1H3,(H,24,25)/t17-/m1/s1

2-[methyl-[(3R)-3-phenyl-3-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]propyl]amino]acetic acid

Org 24598; ORG-24598; 2-[methyl-[(3R)-3-phenyl-3-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]propyl]amino]acetic acid; 2-(methyl-((3R)-3-phenyl-3-(4-(trifluoromethyl)phenoxy)propyl)amino)acetic acid; org24598; R-(-)-N-methyl-N-(3-(4-trifluoromethyl)phenoxy)-3-phenyl-propylglycine lithium salt; 372198-97-5; N-Methyl-N-[(3R)-3-phenyl-3-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]propyl]glycine;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。