PLK1/BRD4-IN-3

目录号: V88742 纯度: ≥98%
PLK1/BRD4-IN-3(化合物 21)是溴结构域 4(BRD4)和 polo 样激酶 1(PLK1)的选择性双重抑制剂。
PLK1/BRD4-IN-3 CAS号: 2251709-91-6
产品类别: Epigenetic Reader Domain
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
PLK1/BRD4-IN-3(化合物 21)是一种选择性双重抑制剂,可抑制溴结构域 4 (BRD4) 和 polo 样激酶 1 (PLK1)。PLK1/BRD4-IN-3 对 BRD4-BD1、PLK1 和 BRDT-BD1 的 IC50 值分别为 0.059、0.127 和 0.245 μM。
PLK1/BRD4-IN-3(化合物 21)是一种选择性双重抑制剂,可同时靶向溴结构域 4 (BRD4) 和 polo 样激酶 1 (PLK1)。它是一种小分子,基于结构导向设计策略,旨在同时抑制两条独立的致癌通路:通过 BRD4 进行表观遗传调控和通过 PLK1 进行细胞周期进程调控,从而用于癌症研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
BRD4 BD1 0.059 μM (IC50) PLK1 0.127 μM (IC50) BRDT BD1 0.245 μM (IC50)
BRD4 (bromodomain 4, specifically the first bromodomain, BD1) and PLK1 (polo‑like kinase 1). The compound also inhibits BRDT-BD1 (the bromodomain of bromodomain testis‑specific protein).
体外研究 (In Vitro)
在无细胞酶活性测定中,PLK1/BRD4-IN-3 对 BRD4-BD1 的抑制 IC₅0 为 0.059 uM (59 nM),对 PLK1 的抑制 IC₅0 为 0.127 uM (127 nM),对 BRDT-BD1 的抑制 IC₅0 为 0.245 uM (245 nM)。这种平衡的双重抑制特性表明其对这两个靶点均具有很高的抑制活性。
体内研究 (In Vivo)
此条目不可用。作为一种双重抑制剂,PLK1/BRD4-IN-3 预计既能诱导 G2/M 期细胞周期阻滞(由于 PLK1 抑制),又能下调 MYC 等癌基因(由于 BRD4 抑制)。这些作用的结合应能对癌细胞产生协同抗增殖活性。
酶活实验
一种通用的无细胞 BRD4 抑制方案:采用 TR-FRET 检测。将重组 BRD4(BD1) 蛋白 (2 nM) 与生物素标记的乙酰化组蛋白 H4 肽 (50 nM) 在检测缓冲液(50 mM HEPES,pH 7.5,150 mM NaCl,1 mM DTT,0.01% Tween-20,0.1% BSA)中孵育,并加入不同浓度的 PLK1/BRD4-IN-3 (0.001-10 uM)。加入铕标记的抗 GST 抗体 (1 nM) 和链霉亲和素-XL665 (20 nM)。1 小时后,在 665 nm 处测量 FRET 信号,并计算 IC₅0 值。PLK1 抑制则采用放射性激酶活性测定法。将重组 PLK1 (5 nM) 与生物素标记的肽底物 (1 uM) 和 10 uM ATP 以及不同浓度的 PLK1/BRD4-IN-3 一起孵育。反应在 30°C 下孵育 30 分钟,并通过 TR-FRET 检测磷酸化底物。
细胞实验
PLK1/BRD4抑制剂的一般细胞实验方案:将癌细胞(例如HeLa、MV4-11或A549)接种于96孔板中,并用PLK1/BRD4-IN-3(0.001-10 uM)进行系列稀释处理72小时。使用CellTiter-Glo或MTT法检测细胞活力。对于细胞周期分析,将细胞处理24小时后固定,用碘化丙啶染色,并通过流式细胞术进行分析。使用抗磷酸化组蛋白H3(Ser10)抗体染色评估有丝分裂指数。对于BRD4抑制实验,将细胞处理6-24小时,并通过qRT-PCR检测MYC mRNA水平,并通过Western blot检测MYC蛋白水平。对于 PLK1 抑制,细胞经 24 小时处理,并通过蛋白质印迹法测量磷酸化 PLK1 (Thr210) 和磷酸化 Cdc25C (Ser216) 水平。
动物实验
PLK1/BRD4-IN-3 的通用动物实验方案:将 5×10⁶ 个 MV4-11 白血病细胞或 HeLa 宫颈癌细胞皮下植入雌性 NOD/SCID 小鼠体内。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时,将小鼠随机分为治疗组(每组 n=8)。将 PLK1/BRD4-IN-3 配制成合适的溶剂(例如,10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45% 生理盐水),并以 10、30 和 100 mg/kg 的剂量,每日一次灌胃给药,持续 21 天。每周测量两次肿瘤体积。实验结束时,收集肿瘤组织进行 Western blot(MYC、磷酸化组蛋白 H3、裂解型 PARP)、IHC(Ki-67、磷酸化组蛋白 H3)和 qRT-PCR(MYC)分析。进行 PK/PD 研究,以确定血浆暴露量与靶点抑制之间的相关性。
药代性质 (ADME/PK)
PLK1/BRD4-IN-3 的通用药代动力学方案:雄性 Sprague-Dawley 大鼠分别经口灌胃(PO,10 mg/kg)和静脉注射(IV,2 mg/kg)给予 PLK1/BRD4-IN-3。分别于 0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、12 和 24 小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)定量分析血浆药物浓度。计算药代动力学参数(Cmax、Tmax、AUC、t½、清除率、分布容积和口服生物利用度)。该化合物的分子量为 561.72,在二甲基亚砜(DMSO)中的溶解度为 16.67 mg/mL。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
PLK1/BRD4-IN-3 的一般毒性试验方案:在 ICR 小鼠中进行为期 14 天的重复给药口服毒性研究。PLK1/BRD4-IN-3 通过灌胃给药,剂量分别为 10、30 和 100 mg/kg/天,连续给药 14 天。评估指标包括临床症状、体重、食物消耗量、血液学指标(全血细胞计数及分类、血小板计数)、血清生化指标(ALT、AST、BUN、肌酐)以及骨髓、胃肠道、肝脏和肾脏的组织病理学检查。重点关注骨髓(骨髓抑制)和胃肠道(胃肠道毒性),因为这是 PLK1 和 BRD4 抑制的靶向效应。
参考文献

[1]. Structure-Guided Design and Development of Potent and Selective Dual Bromodomain 4 (BRD4)/Polo-like Kinase 1 (PLK1) Inhibitors. J Med Chem. 2018 Sep 13;61(17):7785-7795.

其他信息
PLK1/BRD4-IN-3 是通过结构导向的设计和优化策略开发的,该策略产生了一系列高效且选择性的双重 BRD4/PLK1 抑制剂(包括 PLK1/BRD4-IN-2 和 PLK1/BRD4-IN-3)。这种双重抑制剂策略旨在克服单靶点治疗相关的耐药机制,并提高抗肿瘤疗效。该化合物的 CAS 编号为 2251709-91-6,分子式为 C31H43N₇O3,分子量为 561.72 g/mol。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C31H43N7O3
分子量
561.72
精确质量
561.343
CAS号
2251709-91-6
PubChem CID
145976646
外观&性状
Solid powder
tPSA
103
氢键供体(HBD)数目
2
可旋转键数目(RBC)
7
重原子数目
41
分子复杂度/Complexity
902
定义原子立体中心数目
1
SMILES
C[C@H]1C(=O)N(C2=CN=C(N=C2N1C3CCCC3)NC4=C(C=C(C=C4)C(=O)NC5CCN(CC5)C)OC6CCCC6)C
InChi Key
HTPNGOWITIWAHM-FQEVSTJZSA-N
InChi Code
InChI=1S/C31H43N7O3/c1-20-30(40)37(3)26-19-32-31(35-28(26)38(20)23-8-4-5-9-23)34-25-13-12-21(18-27(25)41-24-10-6-7-11-24)29(39)33-22-14-16-36(2)17-15-22/h12-13,18-20,22-24H,4-11,14-17H2,1-3H3,(H,33,39)(H,32,34,35)/t20-/m0/s1
化学名
4-[[(7S)-8-cyclopentyl-5,7-dimethyl-6-oxo-7H-pteridin-2-yl]amino]-3-cyclopentyloxy-N-(1-methylpiperidin-4-yl)benzamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7802 mL 8.9012 mL 17.8025 mL
5 mM 0.3560 mL 1.7802 mL 3.5605 mL
10 mM 0.1780 mL 0.8901 mL 1.7802 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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