| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ROCK1 5 nM (IC50) ROCK2 50 nM (IC50)
ROCK1 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1), ROCK2, MRCKalpha (myotonic dystrophy-related Cdc42-binding kinase alpha), and MRCKbeta. DJ4 is an ATP-competitive inhibitor of these kinases. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
DJ4 是一种 ATP 竞争性 ROCK1 和 ROCK2 抑制剂，其 IC₅0 值分别为 5 nM 和 50 nM。它还能抑制 MRCKα 和 MRCKβ，IC₅0 值分别为 10 nM 和 100 nM。在无细胞激酶活性测定中，DJ4 可抑制这些激酶对肽底物的磷酸化。该化合物可阻断细胞内应力纤维的形成并诱导细胞凋亡。
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| 体内研究 (In Vivo) |
体外实验表明，DJ4可诱导细胞凋亡并抑制应力纤维形成。它能有效抑制癌细胞的迁移和侵袭，使其成为治疗癌症转移的潜在药物。DJ4可用于多种癌症的研究，包括肺癌、乳腺癌和胰腺癌（PANC-1）。
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| 酶活实验 |
激酶抑制实验的通用无细胞方案：采用时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 或放射性激酶活性测定法。将重组活性 ROCK1 (5 ng/孔) 与生物素标记的肽底物（例如 S6K 肽或特定的 ROCK 底物肽）在含有 10 uM ATP 的激酶缓冲液（25 mM HEPES，pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mM DTT，0.01% Tween-20）中孵育。加入不同浓度的 DJ4 (0.01 nM 至 10 uM)。加入 ATP 和肽底物启动反应。在 30℃ 下孵育 60 分钟后，加入 EDTA 终止反应。加入标记有供体荧光团（例如铕）的抗磷酸底物抗体和标记有受体荧光团（例如XL665）的链霉亲和素。1小时后测量TR-FRET信号。根据抑制曲线计算IC₅0值。对ROCK2、MRCKα和MRCKβ进行类似的检测。使用50-100种激酶，在单一浓度的DJ4（例如1 uM）下进行激酶选择性分析。
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| 细胞实验 |
评估 ROCK/MRCK 抑制和细胞凋亡诱导的通用细胞实验方案：将癌细胞（例如，PANC-1 胰腺癌细胞、MDA-MB-231 乳腺癌细胞或 A549 肺癌细胞）以 2×10⁵ 个细胞/孔的密度接种于 6 孔板中，培养基为含 10% FBS 的 DMEM。24 小时后，用不同浓度的 DJ4（0.1、0.5、1、2.5、5、10 uM）处理细胞 24-48 小时。进行应力纤维分析时，用 4% 多聚甲醛固定细胞，用 0.1% Triton X-100 透化细胞，并用鬼笔环肽-TRITC（用于显示 F-肌动蛋白）和 DAPI（用于显示细胞核）染色。使用荧光显微镜采集图像。定量分析具有应力纤维的细胞百分比。为进行细胞凋亡分析，收集处理后的细胞，用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）染色，并通过流式细胞术进行分析。为进行蛋白质印迹分析，裂解细胞，并用针对裂解型PARP、裂解型caspase-3、磷酸化MLC2（肌球蛋白轻链2，ROCK/MRCK的底物）、总MLC2和GAPDH的抗体进行检测。处理72小时后，使用MTT法评估细胞活力。
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| 动物实验 |
评估异种移植模型中抗转移疗效的通用动物实验方案：将PANC-1荧光素酶标记的胰腺癌细胞（1×10⁶个细胞，溶于0.1 mL PBS）经尾静脉注射到雌性NOD/SCID小鼠体内，建立肺转移模型。7天后，将小鼠随机分为治疗组（每组n=10）。将DJ4配制成合适的溶剂（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水），并以5、10和20 mg/kg的剂量，每日一次腹腔注射，连续21天。每周腹腔注射D-荧光素（150 mg/kg）后，通过生物发光成像（BLI）监测肿瘤转移情况。研究结束时，将小鼠安乐死，取出肺脏，用布氏液固定，并在解剖显微镜下计数肺表面转移结节的数量。同时对肺脏进行组织病理学检查（苏木精-伊红染色），以确认微转移灶。收集肿瘤组织用于免疫组织化学（Ki-67、cleaved caspase-3、p-MLC2）和蛋白质印迹分析（ROCK/MRCK信号通路）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
DJ4 的一般药代动力学方案：雄性 Sprague-Dawley 大鼠分别通过腹腔注射（IP，10 mg/kg）和静脉注射（IV，2 mg/kg）给药 DJ4。该化合物配制于赋形剂中，例如 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80 和 45% 生理盐水。分别于给药后 0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12 和 24 小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 定量测定血浆中 DJ4 的浓度。使用非房室模型分析计算药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、t½、清除率、分布容积和生物利用度）。DJ4 的分子量为 348.42，分子式为 C1₉H1₆N4OS。 DJ4 在 DMSO 中的溶解度为 10 mg/mL (28.70 mM)。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
DJ4 的一般毒性试验方案：在 ICR 小鼠中进行为期 14 天的重复给药毒性研究。DJ4 通过腹腔注射给药，剂量分别为 5、15 和 40 mg/kg/天，连续 14 天。试验设置溶剂对照组。每日监测临床症状、体重和食物消耗量。试验结束时，采集血样进行血液学检查（全血细胞计数及分类）和血清生化检查（ALT、AST、ALP、BUN、肌酐、总蛋白、白蛋白、葡萄糖、CPK）。进行大体解剖，并记录主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺脏、脑、睾丸）的重量。对这些器官进行组织病理学检查。制备骨髓涂片以评估骨髓毒性。由于 ROCK 在心脏功能中发挥着重要作用，因此特别关注心脏。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DJ4的分子式为C1₉H1₆N4OS，分子量为348.42。该化合物是ROCK1/2和MRCKα/β的ATP竞争性抑制剂。据报道，DJ4在肺癌、乳腺癌和胰腺癌（PANC-1）的研究中均有效。该化合物通过抑制ROCK/MRCK信号通路来阻断应力纤维的形成并诱导细胞凋亡。DJ4的纯度为98.48%。储存方面，粉末应在-20℃下保存长达3年，溶液应在-80℃下保存长达6个月或在-20℃下保存长达1个月。DJ4是研究癌细胞迁移、侵袭和转移机制的重要研究工具。
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| 分子式 |
C19H16N4OS
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|---|---|
| 分子量 |
348.42
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| CAS号 |
1681020-24-5
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| 密度 |
1.36±0.1 g/cm3(Temp: 20 °C; Press: 760 Torr)(predicted)
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| LogP |
0
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8701 mL | 14.3505 mL | 28.7010 mL | |
| 5 mM | 0.5740 mL | 2.8701 mL | 5.7402 mL | |
| 10 mM | 0.2870 mL | 1.4350 mL | 2.8701 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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